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[期刊] 水产学报
[作者]
何夙旭 张美超 徐俐 杨雅麟 李青 周志刚
为评价斑马鱼口服高丝氨酸内脂酶AI-96对嗜水气单胞菌NJ-1浸浴攻毒的保护效应,实验设置基础料与实验料两组饲料,实验料是在基础料中按3 U/g饲料添加N酰基高丝氨酸内酯酶AI-96(以下简称AI-96),通过高浓度(2.5×108cfu/mL)及低浓度(0.7×108cfu/mL)两组剂量的嗜水气单胞菌NJ-1(以下简称NJ-1)分别浸浴攻毒斑马鱼,在12 h、24 h、3 d、7 d和14 d取鳃丝、肠道壁、肝和肾样,采用实时荧光定量PCR法检测取样器官中NJ-1量,并统计攻毒周期内的死亡率,来评价高丝氨酸内酯酶AI-96的保护力。结果显示:在攻毒周期内所取组织内均检测到NJ-1,按菌数肠...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄天培 潘洁茹 姚帆 黄张敏
利用pMD18-T克隆载体从苏云金芽胞杆菌菌株WB12中克隆了酰基高丝氨酸内酯酶基因(AHL-lactonase,aiiA).测序结果表明,该基因(GenBank登录号为DQ000642)由753个碱基组成,编码含有250个氨基酸残基的蛋白质.推测该蛋白质分子质量为28 ku,等电点为4.2,不含信号肽序列.利用DNAMAN软件构建同源关系树.结果表明,该蛋白与已报道具有减弱欧文氏菌胡萝卜亚种致病力的11个A iiA蛋白酶氨基酸序列总相似性为81.2%,并含有相同的氨基酸序列保守区.核苷酸序列的BLAST分析结果表明,与之同源性较高的基因均为蜡质芽孢杆菌组aiiA基因(86%-99%).
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
贾坤 廖燕红 徐磊 王虎虎 徐幸莲
[目的]研究铜绿假单胞菌所产生的群体感应信号分子酰基-高丝氨酸内酯(AHL)对鼠伤寒沙门氏菌生物菌膜形成的影响,为不同菌体间群体感应的研究提供参考,为沙门氏菌的控制提供帮助。[方法]利用薄层层析法分析铜绿假单胞菌所产生AHL的成分,并通过添加0%、1.0%、1.5%、2.0%(体积分数)的AHL来研究其对鼠伤寒沙门氏菌生物菌膜形成、浮游菌体生长以及菌体泳动能力的影响。[结果]铜绿假单胞菌产生2种相同类型的AHL分子(C12-HSL和3-oxo-C8-HSL),100℃加热5 min并不会改变AHL的成分。
[期刊] 水产学报
[作者]
储卫华 陆承平
根据已发表的气单胞菌胞外蛋白酶基因核苷酸序列,设计和合成了一对引物,以嗜水气单胞菌AhJ-1的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增到约900bp的丝氨酸蛋白酶基因片段,并克隆到质粒载体pGEM-T中进行测序和分析,结果表明扩增的丝氨酸蛋白酶基因片段与已发表的嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶Ahe2的同源性有87％,扩增片段编码343个氮基酸,推测的分子量为35700,计算机软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性,可作为核酸疫苗的侯选基因片段。
关键词：
嗜水气单胞菌 丝氨酸蛋白酶基因 克隆
[期刊] 水产学报
[作者]
何夙旭 王全民 黄路 周志刚
为探讨芽孢杆菌潜在的淬灭靶点，本研究通过芽孢杆菌Ｒ１与嗜水气单胞菌ＮＪ－１共培养，并对ＮＪ－１生物量、信号分子产生量、毒力因子基因和群体感应（ＱＳ）关键调控基因表达量进行检测。结果显示：１ＮＪ－１单独培养时，信号分子ＢＨＬ和ＨＨＬ的产量与ＮＪ－１生长趋势一致，在２７ Ｈ时达到峰值并启动Ｌｕｘ Ｒ表达，进而调控毒力因子金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、肠毒素、气溶素和血溶素等表达，其在２７～３０ Ｈ时呈现峰值表达，通路ＱＳｅ Ｂ在２７～３０ Ｈ启动表达，４８ Ｈ时达到峰值，而种间调控Ｌｕｘ Ｓ基因表达一直处于低水平状态；２与芽孢杆菌Ｒ１共培养时，仅痕量ＡＨＬＳ信号分子被检出，毒力因子相关基因表达量均显著．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王彦波 任真真 张岩 傅玲琳
为了筛选能提高水产动物对嗜水气单胞菌抗病性的益生菌，并研究其免疫调节的作用机制。将５种乳酸菌与斑马鱼ＺＦ－４细胞共培养后通过荧光定量ＰＣＲ方法检测细胞因子ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的表达量，并用流式细胞仪检测被嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒后的细胞凋亡率来筛选对ＺＦ－４细胞保护性最显著的乳酸菌，将其添加至模式生物斑马鱼饲料中饲喂２８ ｄ后，用嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒并检测斑马鱼肠道中促炎性细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和抗炎性细胞因子ＩＬ－１０的表达情况，并计算斑马鱼被攻毒后的累积死亡率。结果显示，５种乳酸菌分别与细胞共培养后，芽孢乳酸菌０９．７１２能明显提高ＺＦ－４细胞ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
牛志伟 吕小丽 黄钧 韩书煜 黎姗梅 梁静真 韦慕兰 邓小红
通过借鉴Meta分析法分析中国知网数据库(CNKI)中有关鱼源、鳖源嗜水气单胞菌的7种毒力基因的相关研究数据,探讨鱼源、鳖源嗜水气单胞菌毒力基因的分布特点及为研制嗜水气单胞菌多价DNA疫苗提供候选基因。分析结果表明:嗜水气单胞菌毒力基因的分布受养殖对象的种类和生长环境影响;南方和北方地区鱼源嗜水气单胞菌以毒力基因astA、altA、aerA和hlyA分布较为广泛,南方地区鳖源嗜水气单胞菌毒力基因hlyA、actA和aerA分布均较为广泛,可分别作为制备鱼源和鳖源嗜水气单胞菌多价DNA疫苗候选基因。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
储卫华 陆承平
以提纯的嗜水气单胞菌胞外蛋白酶 (ECPase)注射异育银鲫 ,鲫鱼出现典型的由嗜水气单胞菌引起的败血症症状 :病鱼体表充血、出血 ,鳃苍白 ,腹部膨大 ,肛门红肿突出 ,腹腔内有红色的腹水 ,肠壁充血发炎 ;背部肌肉注射部位发生液化、糜烂 ,鳞片竖起。病鱼各组织器官都有病变 ,其中尤以肝、肾最为严重 :肝脏肿大 ,质地脆弱 ,肝细胞水肿 ,胞浆结构疏松 ;肾小体坏死以至解体 ,肾小管上皮细胞也发生病变。体外试验表明 ,正常鲫鱼血清中有某种成分能够抑制蛋白酶的活性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
郭欣娅 季策 谢子健 季帆 祖尧 任建峰 张庆华
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是人-兽-鱼共患的致病菌,严重威胁食品安全和人类的健康。为了研究宿主嗜中性粒细胞清除细菌感染的动态变化过程,利用红色荧光蛋白标记的副溶血弧菌Vp57~(RFP)菌株感染受精后48 h(hours post fertilization,hpf)的斑马鱼(Danio rerio)幼鱼耳泡,建立局部感染模型,并以大肠杆菌(Escherichia coli)Ec01菌株为对照,系统比较了副溶血弧菌和大肠杆菌的半数致死剂量(median lethal dose,LD_(50))、存活曲线以及和嗜中性粒细胞相互作用的动态过程,RT-qPCR验证炎症相关基因il1b和il10在感染前后的表达量变化。结果显示副溶血弧菌和大肠杆菌感染斑马鱼幼鱼的LD_(50)分别为7.90×10~8 CFU/mL和1.14×10~(11) CFU/mL,与感染大肠杆菌相比,斑马鱼感染副溶血弧菌后招募嗜中性粒细胞的速度更快,且数量更多。RT-qPCR结果发现斑马鱼感染副溶血弧菌后在相同时间点能够激活更高的il1b和il10基因的表达,引起强烈的炎症反应。基于以上研究,我们建立的副溶血弧菌-斑马鱼幼鱼耳泡局部感染模型,为进一步研究嗜中性粒细胞清除副溶血弧菌感染的动态过程,以及深入揭示天然免疫应答机制提供了依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
陆宏达 金丽华
将病鳖进行细菌分离，获得的菌株经细菌学鉴定，致病菌为嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）。病鳖食欲减退以至不吃食，反应迟钝；颈部充血，腹甲严重充血，甚至出血、溃疡，体表可见形成的疤痕；口腔、舌尖和鼻孔充血，甚至口、鼻孔中流出血水；肝脏、肾脏、脾脏肿大，有坏死病灶。组织病理观察表明：大量细菌侵入肺、肾、脾、血液、心脏和肌肉等器官组织，造成出血以及全身性组织损害，组织细胞出现肿胀、颗粒变性、玻璃样变和坏死崩解；血管壁严重受损，内皮细胞坏死脱落。血管内以及器官组织血液中大量红细胞变形、碎裂、溶解，呈现溶血性贫血，血液中白细胞数量极少，病变区无白细胞浸润现象。病鳖由于血细胞广泛受损、...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
沈锦玉 李新华 潘晓艺 尹文林 曹铮
中华鳖(Trionyx sinensis)细菌性疾病主要由气单胞菌感染引起的,通过脱脂奶平板检测及酶活性试验得出温和气单胞菌TL97528株分泌的胞外蛋白酶为丝氨酸蛋白酶,而丝氨酸蛋白酶是气单胞菌的主要毒力因子。根据已发表的嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列保守区域设计引物,PCR扩增出一长度为809 bp大小的特异片段,该序列在Genbank上的登录号为FJ357446。对该序列进行分析发现,已发表的温和气单胞菌(Aeromonas sobria)丝氨酸蛋白酶基因(GenBank登录号为AF253471)同源性为98%、与其他几株已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila...
[期刊] 水产学报
[作者]
张庆华 马文元 陈彪 刘至治 徐华东 张秋月 王晓冰 贾亮
为了分离鉴定实验室养殖的金钱鱼暴发性疾病的病原，利用传统病原分离的方法，从病鱼肝脏分离得到一株Ｇ–短杆菌（Ａｈ２０１４１６），对其进行电镜观察和生理生化鉴定，对病鱼组织进行病理切片分析，并根据科赫法则，用分离株对健康金钱鱼进行人工感染。结果显示，该菌株电镜下观察细菌大小为０．８～１．０μｍ×１．０～２．０μｍ（宽×长），无芽孢和荚膜，生理生化特性与嗜水气单胞菌基本一致；１６Ｓ ｒ ｒＮＡ序列（登录号：Ｋｒ００６２４８）与ＧｅＮ ＢＡＮＫ中嗜水气单胞菌（ＡｅｒｏｍｏＮＡＳ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌＡ，Ａｈ ＡＴＣＣ７９６６）的１６Ｓ ｒ ｒＮＡ基因序列的同源性高达９９％，系统进化树与Ａｈ聚为一支。病理．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈琼 陆承平
以福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 HEC 毒素免疫 Balb/C 小鼠,取其脾细胞与 SP2/O 细胞融合,用间接ELISA 筛选,获得9株分泌 HEC 毒素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,腹水 ELISA 效价为1∶640～1∶20 480。其中8株能特异性抑制 HEC 毒素的溶血活性,溶血抑制效价为1∶32～1∶256。用1B4和5E3两株细胞制备的腹水混合,建立了检测嗜水气单胞菌 HEC 毒素的点酶法。用单抗点酶法对95株临床病鱼分离菌进行检测,有72例阳性,敏感性较多抗点酶法高。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范红结 陈怀青 姚火春 陆承平
将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代［Ｊ－１（５）］在产毒素培养基上连续传代至第３５代［Ｊ－１（３５）］，并分别检测Ｊ－１（６）和Ｊ－１（３５）的生化特性。另取Ｊ－１（６）、Ｊ－１（１５）、Ｊ－１（２５）和Ｊ－１（３５）分别制备嗜水气单胞菌灭活疫苗，用其分别免疫鲫鱼，之后用Ａｈ强毒攻击；同时用Ｊ－１（６）经腹腔注射或浸泡各免疫组鲫鱼，测其最低免疫剂量。结果显示，从第５代传至３５代，Ａｈ菌株的培养特性和免疫原性没有显著差异；腹腔免疫和浸泡免疫的最低有效剂量分别为１×１０７ｃｆｕ／尾和５×１０７ｃｆｕ／ｍＬ。表明ＡｈＪ－１株可作为理想的疫苗生产株。
关键词：
嗜水气单胞菌 免疫原性 生化特性 稳定性
[期刊] 水产学报
[作者]
张美超 曹雅男 姚斌 白东清 周志刚
将N-乙酰高丝氨酸内酯酶基因(aiiO-AIO6)插入表达载体pET28a构建了原核表达载体pET28a/aiiO-AIO6。转化大肠杆菌后筛选具有活性的重组子并对纯化的目的蛋白AiiO-AIO6的酶学性质进行了研究,同时研究了纯化的酶液对嗜水气单胞菌ATCC7966溶血素(Hemolysin,Hem)、细胞肠毒素(Cytotonic enterotoxin,Ast)、胞外蛋白酶(Extracellular protease,Ep)、丝氨酸蛋白酶(Serine protease,Sp)及磷脂酶Pho(Phospholipase A1,Pho)等5个毒力因子表达的影响。结果表明,pET28a/a...
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