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[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱化彬 沈彦军 杜卫华 鞠光伟 庞云渭 郝海生 赵学明 王栋 王宗礼
【目的】开展异种克隆,为濒危动物的保护、细胞核重编程与核质互作研究提供新途径。【方法】以马耳成纤维细胞为供体,牛卵母细胞为受体,采用无透明带手工克隆方法构建异种胚胎,比较不同的激活液、培养液、体细胞同期方式、核移植方法对马-牛异种克隆胚胎体外发育的影响。【结果】(1)A23187+6-DMAP联合激活获得的克隆胚胎发育较好,囊胚率2.60%;(2)克隆胚胎于mCR1aa中的卵裂率和桑葚率显著高于CR1aa和SOF(83.65%vs 77.49%,74.87%;22.36%vs19.37%,18.98%,P<0.05),且发育到囊胚(2.72%),CR1aa与SOF间无显著差异;(3)供体细胞经...
关键词：
马 牛 异种克隆 手工克隆
[期刊] 财会月刊
[作者]
安娜
在我们脚下的地壳中,有许许多多条我们并不知晓的地下暗河在静静地流淌着。这些暗河中生活着一些与地面生物外形和习性都不太相同的奇异生物。最近,德国科学家就在克罗地亚的一条地下暗河中发现了完全透明的蜗牛。在克罗地亚一处深达980米的地下洞穴中,科学家发现了这种透明的蜗牛。一条
关键词：
地下暗河 德国科学家
[期刊] 中国农业科学
[作者]
敬晓棋 雷安民 屈雷 窦忠英
【目的】通过对正常受精胚胎、山羊同克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)以及牛-山羊异种克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)中线粒体超微结构的观察与比对,从亚细胞水平揭示异种克隆胚胎出现异常的原因,为异种克隆技术的进一步研究提供新思路。【方法】利用透射电镜分别对山羊正常受精胚胎、山羊同种克隆胚胎及牛-山羊异种克隆胚胎的原核、2-细胞、4-细胞、8-细胞及桑椹胚阶段的早期胚胎进行线粒体超微结构观察。【结果】山羊自然受精胚胎、山羊同种克隆胚胎的线粒体均为帽状,随着胚胎的发育,线粒体由电子密度高、嵴少的未成熟状态发育为电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体,而牛-山羊异种克隆胚...
关键词：
牛 山羊 异种克隆 超微结构 线粒体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
江曙 陈代杰 戈梅 黄为一
将透明颤菌血红蛋白基因 (vgb基因 )克隆至链霉菌的质粒载体pIJ70 2中 ,构建成表达载体pLY70 2 ,并将pLY70 2质粒转化阿扎霉素B的高产菌株———吸水链霉菌NND 5 2 C的原生质体 ,获得转化子H。经发酵实验表明 ,在限氧的条件下 ,可以使NND 5 2 C菌株的生物量提高 14 4 % ,阿扎霉素B的产量提高 30 8%。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卢晟盛 宋立峰 滕维中 杨绿峰 卢克焕
【目的】为了探讨猪卵母细胞的生物物理特性,该文研究了猪卵母细胞透明带的力学性质。【方法】在39℃环境下,利用微管吸吮的方法在倒置显微镜下通过显微操作装置用显微玻璃管吸吮猪卵母细胞,通过自制的专用于卵母细胞透明带杨氏模量测量软件,测量了经过44～48h体外成熟培养的核成熟和核未成熟猪卵母细胞(n=76,共7次重复)的透明带杨氏模量。【结果】计算得到猪卵母细胞透明带的弹性模量为(1.43±0.29)×104Pa。【结论】该研究结合了生殖生物学和力学的内容,为评判哺乳动物卵母细胞和胚胎质量开拓了新的思路和内容。
关键词：
猪 卵母细胞 透明带 微管吸吮 杨氏模量
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴景龙 隋丹丹 张冬辉 周智敏 李昊 郑雪莉 韩崇选
【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王全喜 红海 张焱如 乌尼尔夫 芒来
依据马肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以蒙古马基因组DNA为模板,利用PCR技术,扩增出MSTN基因第三外显子序列。将所得片段与PGEM—Teasy载体连接,转化感受态DH5a大肠杆菌。筛选出阳性克隆,酶切、PCR鉴定后,经DNA测序结果表明,所克隆到的MSTN基因第三外显子与文献报道基本一致,有一处单核苷酸有变异。
关键词：
蒙古马 肌生成抑制素 第三外显子
[期刊] 水产学报
[作者]
刘志强 冯建彬 邱高峰
为了快速准确判断中华绒螯蟹卵细胞是否发育成熟,实验根据斑马鱼卵细胞透明液的配方进行一系列的探索,最终发现用无水乙醇、冰乙酸和甲醛按60∶1∶30的体积比混合成的透明液处理中华绒螯蟹卵细胞,在细胞内可以观察到一白色斑点。对卵巢组织进行切片观察,证实该斑点即为中华绒螯蟹卵细胞的细胞核。在发育成熟的卵细胞中则不能观察到白色斑点。研究表明,无水乙醇、冰乙酸和甲醛按60∶1∶30的体积混合成的透明液能够有效透明中华绒螯蟹卵细胞,为准确判断其卵母细胞是否发育成熟,及时对卵母细胞进行人工诱导具有重要的实用价值。
关键词：
中华绒螯蟹 卵细胞 细胞核 透明液
[期刊] 海洋渔业
[作者]
朱清澄 高玉珍 花传祥 杨明树
根据２０１４年我国秋刀鱼捕捞船在西北太平洋采集的秋刀鱼（Ｃｏｌｏｌａｂｉｓ ｓａｉｒａ）样本，提取１ ０６２个耳石进行拍照处理，并根据耳石透明带特征对其进行划分，运用统计学方法研究耳石类型及与肉体长组的关系，分析各月份耳石类型变化。研究发现，８３％小型鱼（Ｋｎ ｌ≤２４０ ｍｍ）和７１％中型鱼（２４０ ｍｍ３１４ ｍｍ）耳石类型Ⅱ、类型Ⅲ占优。肉体长在２８０ ｍｍ以下的类型Ⅰ耳石比例较大，耳石没有形成透明带，随着Ｋｎ ｌ的增加，类型Ⅱ和类型Ⅲ在肉体长组的比例增加。耳石透明带最早在２０２．．．
关键词：
秋刀鱼 耳石类型 透明带
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 陆承平 杜念兴 徐为燕 陈溥言
以纯化的牛冠状病毒(BCv)免疫 BALB/c 小鼠,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0融合,用间接 ELISA 筛选,获得了4株分泌 BCV 特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞:C_(12)、C_(31)、C_(42)和C_(54).它们系针对 BCV 不同表面抗原决定簇的.用 C_(12)和 C_(31)两株细胞制备的腹水混合包被聚苯乙烯微孔板,建立了以生物素标记的兔抗 BCV IgG 和酶标亲和素介导的 BAS—ELISA,并对 BCV 标准毒株和临床犊牛腹泻粪样作了检测.
关键词：
牛冠状病毒 单克隆抗体 ELIsA
[期刊] 华北农学报
[作者]
张建一 梁春年 吴晓云 张良斌 郭宪 裴杰 阎萍
以Agouti基因作为牦牛毛色调控的候选基因,探索Agouti基因编码区序列多态性,以期为阐明Agouti与毛色形成的相关性及毛色形成机理奠定基础。根据GenBank已发表序列(NM_206843)设计1对引物,以天祝白牦牛和黑色被毛甘南牦牛皮肤总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增,成功获得了牦牛Agouti基因编码区序列。采用生物信息学方法预测分析Agouti基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、疏水性、二级结构等;采用DNA混合池测序法和直接测序法,检测牦牛Agouti基因编码区的序列变异。结果表明,扩增得到的Agouti基因的编码区是一条长为593 bp的DNA序列。黑色甘南牦牛和...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张弛 曹俊伟 张涌
为了了解牛卵母细胞经短时间(30 min)热应激和采用不同供体细胞对核移植后重构胚发育的影响,对成熟前牛卵母细胞进行了不同温度(38.5(CK),39.5,40.5,41.5和42.5℃)热应激处理,以牛胎儿成纤维细胞为供体细胞,比较了重构胚的卵裂率和囊胚率;将成熟前牛卵母细胞于41.5℃热应激30 min,以未进行热应激处理的牛卵母细胞为对照,比较了3种不同供体细胞(牛胎儿成纤维细胞、牛卵巢上皮细胞、牛颗粒细胞)核移植后的重构胚囊胚细胞数。结果表明,成熟前牛卵母细胞经41.5℃热应激处理30 min,其卵裂率(72.5%)和囊胚率(18.3%)与对照组(57.6%和13.6%)相比均有显著提...
关键词：
牛 卵母细胞 热应激 细胞克隆 核移植
[期刊] 中国农业科学
[作者]
石仙 熊显荣 兰道亮 陈伟明 胡嘉嘉 蔡雯祎 李键
【目的】研究牦牛细胞周期蛋白D2(Cyclin D2,CCND2)基因序列特征及其在牦牛不同发情时期卵巢中的表达。【方法】以牦牛为研究对象,提取卵巢的总RNA进行反转录为第一链c DNA,根据Gen Bank中黄牛CCND2的m RNA序列(Gen Bank登录号:NM_001076372.1),使用Primer 5.0软件设计引物。应用PCR方法对CCND2基因扩增克隆,并测序获得CCND2基因完整的CDS区序列及部分5′端和3′端UTR区。使用Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL及S
[期刊] 华北农学报
[作者]
阚威 王华 马友记 赵兴绪 张勇
为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗,采集隐性奶牛乳房炎奶样,利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基和色素试验,并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb,采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列,经ORF分析和B细胞表位预测,利用Primer 5.0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物,添加酶切位点和真核表达元件,以分离株无乳链球菌的基因组为模板,PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序,经测序确定无误后,连接pcDNATM3.1 V5-His A(pcDNA-cfb)真核载体,转化DH5α感受态细胞,提取...
[期刊] 林业科学
[作者]
侯新毅 姜笑梅 殷亚方
使用国内木器涂饰常见的3种清漆:硝基清漆、醇酸树脂清漆、聚氨酯清漆,系统测试3种桉树木材涂饰前后色度学参数的变化,以期揭示涂饰过程中3种桉树木材材色的变化规律,从而为涂饰工艺的确定及控制涂饰后的材色提供参考。试验表明:涂饰前后木材色度学特征的变化是渐变过程,与涂饰次数有关;使用不同清漆,不同树种色度学参数表现出一定的差异。
关键词：
尾巨桉 柠檬桉 窿缘桉 透明涂饰
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