【目的】获得有效防治马铃薯黑痣病的芽胞杆菌，并明确其次级代谢产物的抑菌作用。【方法】利用平板对峙法筛选马铃薯黑痣病菌拮抗菌株，通过形态学特征及gyrB序列分析进行鉴定；通过带毒培养基法和平皿对扣法测定脂肽类物质和挥发性有机物抑菌活性；利用特异性引物对菌株G32次级代谢产物5种脂肽类抗生素合成的相关基因sfp、ituA、fenB、bacD、mycB进行检测。通过顶空固相微萃取技术（HS-SPME）富集G32挥发性有机物，利用全二维气相色谱-质谱联用法（GC×GC-MS）进行成分鉴定。【结果】从河北农业大学实验基地采集得到的根际土中共分离得到50株芽胞杆菌，成功筛选得到一株对马铃薯黑痣病菌具有良好拮抗作用的芽胞杆菌菌株G32，抑菌圈为（20.68±0.42）mm。经形态学和分子生物学鉴定为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。B. amyloliquefaciens G32分泌的脂肽类活性物质和挥发性化合物均可抑制黑痣病菌的生长，造成菌丝扭曲变形，出现囊泡等畸形现象。对B. amyloliquefaciens G32分泌的次级代谢产物进一步分析表明，B. amyloliquefaciens G32具有表面活性素（Suffactins）、伊枯草素（IturinA）、杆菌毒素（BacillomycinD）、抗霉菌枯草菌素（Mycosubtilin）等脂肽类化合物的基因簇；B. amyloliquefaciens G32能产生13种6类挥发性物质，包括酮类、醇类、芳香族类、醚类、有机酸类，其中3-羟基-2-丁酮含量最高为48.90%，其次是2-壬酮（11.33%）和正辛醇（10.84%）；B. amyloliquefaciens G32具有产淀粉酶和纤维素酶的能力。【结论】B. amyloliquefaciens G32可分泌脂肽、挥发性有机物和纤维素酶等多种抑菌物质，对马铃薯黑痣病的防治具有一定潜力，同时为多种抑菌物质的协同增效作用提供了理论基础。

【目的】由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani AG-3)引起的马铃薯黑痣病是马铃薯生产中重要的土传病害,严重影响马铃薯的产量和质量。利用微生物杀菌剂防治马铃薯黑痣病是环境友好、切实可行的措施之一。本研究旨在获得有效防治马铃薯黑痣病的生防细菌并明确其防病作用方式,为生防细菌发酵工艺的优化、微生物杀菌剂的合理施用提供科学依据。【方法】通过对峙培养法和温室盆栽试验筛选有效防治马铃薯黑痣病的生防细菌,通过Biolog微生物鉴定系统、16S rDNA序列以及gyrA、gyrB、rpoB和rpoC多基因序列分析对生防细菌进行分类鉴定。通过盆栽试验比较生防细菌菌株发酵液、无菌体上清液和菌体悬浮液对马铃薯黑痣病的防治效果,利用高效液相色谱(HPLC)对脂肽提取物进行分离,通过抑菌活性测定结合质谱(UPLC-Triple TOF-MS/MS)技术鉴定生防细菌产生的抑菌活性物质。采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术测定马铃薯根际黑痣病菌的DNA拷贝数。【结果】通过对2 106株细菌进行筛选,获得3株有效防治马铃薯黑痣病的生防细菌,其中HMB33604菌株对马铃薯黑痣病的防治效果较高,达到52.9%。通过生理生化及多基因序列比对,将HMB33604菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该菌株发酵液和上清液对马铃薯黑痣病具有显著的防治效果,分别为52.2%和66.4%,而菌体悬浮液对马铃薯黑痣病的防治效果仅为16.9%,证明该菌株主要通过产生抑菌活性物质而起到防治马铃薯黑痣病的作用。HMB33604菌株可以产生泛革素(fengycin)、伊枯草菌素A(iturin A)和表面活性素(surfactin),抑菌试验证明泛革素和伊枯草菌素是HMB33604菌株产生的主要抑菌活性物质,这两种脂肽类抗生素能够显著抑制黑痣病菌的生长,并且造成菌丝畸形。菌株发酵液和无菌体上清液均显著降低马铃薯根际黑痣病菌的DNA拷贝数,与对照相比分别降低了60.3%和64.0%;而菌体悬浮液处理后根际黑痣病菌的DNA拷贝数仅降低10.3%。【结论】获得一株有效防治马铃薯黑痣病的生防细菌——解淀粉芽孢杆菌HMB33604,该菌株主要通过产生抑菌活性物质而发挥生防作用。泛革素和伊枯草菌素是HMB33604菌株产生的主要抑菌活性物质。泛革素和伊枯草菌素不仅造成黑痣病菌菌丝畸形,还可显著降低马铃薯根际黑痣病菌的数量,从而有效防治马铃薯黑痣病。

通过组织块分离法、梯度稀释涂布法和划线分离法，从健康紫皮和白皮洋葱中筛选得到内生菌，采用平板对峙培养法测定其对１０株供试指示菌的抑菌活性，再以洋葱提取液为对照，对各拮抗菌株的发酵液进行薄层层析和高效液相色谱分析。结果表明，从２种洋葱中共筛选出８７株内生菌，其中内生细菌６８株，内生放线菌３株，内生真菌１６株。通过抑菌试验，发现１２株内生细菌对３至９种指示菌具有抑菌活性，占分离菌株总菌数的２３．０８％，其中ＹＤ–２１、ＹＤ–２３、ＹＤ–２６、ＹＤ–２７、ＹＤ–３２、ＹＤ–３８、ＹＤ–３７、ＹＤ–２２共８株菌株的抗菌谱较广，对９种供试指示菌均具有抑菌活性。薄层层析检测结果表明，菌株ＹＤ–２７发酵产物．．．

筛选获得对灰霉病菌具有抑制活性的芽孢杆菌菌株,明确其胞外抑菌物质的活性及稳定性,为灰霉病提供安全、高效、易行的生物防治方式,并为其后续生防制剂的研发提供科学依据。采集我国云南、黑龙江、新疆、河北等地蔬菜种植土壤样品129个,采用稀释涂平板法分离获得芽孢杆菌4 200株,采用平板对峙法获得191株具有灰葡萄孢菌拮抗性能的菌株,其中菌株KA4的抑菌能力最强,对灰霉病菌的抑菌率为65.34%。采用形态学、生理生化特征以及16S rDNA和gyrB基因序列分析相结合的鉴定方法进行了KA4菌株的鉴定,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌,命名为BA-KA4。BA-KA4的无菌发酵液具有较强的抑菌活性,稀释10,20,40倍的无菌发酵液对灰葡萄孢菌的抑菌率分别为78.83%,65.19%,45.38%。通过单因素法测定了不同处理温度、pH值和紫外照射时间对BA-KA4无菌发酵液抑菌活性的影响,该菌株的无菌发酵液具有良好的温度、pH和紫外线稳定性。综上,解淀粉芽孢杆菌BA-KA4能够抑制灰霉病菌生长、胞外抑菌物质活性稳定,可作为灰霉病生物防治的优良微生物资源,具有良好的开发前景。

【目的】筛选及开发对马铃薯早疫病具有生防效果的菌株，以期丰富该病的生防菌种资源。【方法】从马铃薯种植区该病害发生严重的地块根际土壤中分离筛选生防菌株，利用形态学特征观察、生理生化特性检测及16S rDNA和gyrB基因序列同源性分析，对其种属进行分类鉴定。通过测定菌株对马铃薯块茎切片的防病效果、抑菌广谱性与生物学功能初步验证其防效功能，并设置盆栽试验印证菌株对马铃薯早疫病的防效及对土壤微生物菌群的影响。【结果】获得1株对马铃薯早疫病菌平板抑制率达89%的生防菌株WK-1，经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌株对马铃薯离体块茎切片的防效为88.39%，其抑菌效果具有广谱性，有溶解无机磷及产铁载体的能力，盆栽防效为74.49%，且有助于土壤微生物群落结构得到改善。【结论】生防菌株WK-1在马铃薯早疫病的防治方面具有较大的开发应用潜能，可以作为高效复合功能菌剂的候选菌株。

为改善马铃薯Solanum tuberosum疮痂病日益加重的情况,以疮痂链霉菌Streptomyces scrabies为指示菌筛选拮抗菌,优化菌株的发酵条件,检测菌株对马铃薯疮痂病的抑制情况。首先,利用稀释涂布法、平板划线法和抑菌圈法分离筛选到了1株对疮痂链霉菌具有抑制作用的拮抗菌株,通过形态学观察和16S rDNA序列比对鉴定为芽孢杆菌Bacillus,并命名为BU108。随后,采用单因素多水平试验设计方法,对该菌株培养条件进行了优化,确定最适培养条件为:碳源为葡萄糖,氮源为酵母浸粉,碳氮比为1∶2,磷酸二氢钾(KH_2PO_4)为0.5 g·L~(-1),硫酸镁(MgSO_4·7H_2O)为0.5 g·L~(-1),氯化钠(NaCl)为5.0 g·L~(-1),培养温度为28℃,pH 8,培养时间为22 h。最后,通过盆栽实验检验了芽孢杆菌BU108对马铃薯疮痂病的实际抑制效果,结果显示:BU108施用浓度为1×10~(10)cfu·m~(-2)时效果最好,抑制率为91.6%,差异达极显著水平(P<0.01)。

为了明确地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的抑制作用,研究了地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌菌丝生长、游动孢子释放、游动孢子萌发、孢子囊萌发产生芽管的抑制作用。结果表明:地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的菌丝生长、游动孢子释放和游动孢子萌发有明显的抑制作用,对菌丝生长的抑制作用,抑菌带平均宽度达到5.58 mm,在稀释度为10-1时地衣芽孢杆菌对游动孢子释放的抑制率高达86.11%,对游动孢子萌发的抑制率也达到了78.1%。但地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的孢子囊萌发产生芽管抑制作用较弱。

【目的】本文在接种马铃薯黄萎病病原菌下,研究钾肥及配施枯草芽孢杆菌对马铃薯黄萎病发病率和马铃薯生长的影响。【方法】通过盆栽试验,采用伤根法接种马铃薯黄萎病病原菌的方法。【结果】钾肥配施枯草芽孢杆菌对马铃薯黄萎病的防效要优于单施钾肥,其中试验处理K3VB、K2VB、K1VB处理对马铃薯黄萎病防效分别是相应单施钾肥K3V、K2V、K1V的处理的1. 09、1.67、3. 51倍。施用枯草芽孢杆菌可以使马铃薯植株钾积累量增加,植株钾积累量与马铃薯黄萎病发病率呈显著负相关。试验还发现施用钾肥后对马铃薯株高、根干物重、地上干物重都有显著促进作用,而配施枯草芽孢杆菌后效果更加显著,其中K3B处理的株高、根干物重、地上干物重是K3处理的1. 21、1. 2、1. 14倍。【结论】钾肥及配施枯草芽孢杆菌对马铃薯黄萎病有一定的防控效果,同时也可以促进马铃薯的生长。

【目的】分离筛选对马铃薯甲虫(Colorado potato beetle,CPB)具强致病性的细菌生防菌株并对其鉴定。【方法】从CPB虫体上分离病原细菌,利用几丁质酶和蛋白酶活性初步筛选致病菌株,然后通过室内和田间试验筛选出可导致CPB大量死亡的生防菌。根据形态学、生理生化特性和16S rDNA序列分析等进行鉴定,确定生防菌株的分类学地位。【结果】从新疆CPB分布区采集的CPB发病成虫虫体上分离纯化获得126个细菌菌株,其中36个菌株对昆虫体壁几丁质和蛋白质具有降解活性。在室内马铃薯叶片饲养的CPB各龄幼虫和成虫上测试,11个菌株对1—2龄幼虫表现出不同程度致病力,在接种后1—3 d始见幼虫...

【目的】为获得拮抗马铃薯早疫病菌的优良生防菌株,研究其抑菌活性物质对马铃薯早疫病菌的影响。【方法】利用平板对峙法对生防菌进行筛选,通过形态学特征和分子生物学的方法对生防菌进行鉴定,并检测其分泌生防作用相关的酶的能力。通过扫描电镜观察生防菌次级代谢产物对早疫病菌丝影响,利用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)技术对生防菌次级代谢产物的活性成分进行鉴定,结合琼脂扩散法进一步验证活性成分。【结果】将筛选得到的生防菌株鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),命名为C16。菌株C16能分泌淀粉酶和表面活性素,具有固氮能力,发酵液和脂肽粗提物能显著抑制马铃薯早疫病菌丝的生长,发酵液的抑菌圈可达31.5 mm, 10 mg/mL脂肽粗提物的抑菌带可达12.67 mm。早疫病菌分别与发酵液和脂肽粗提物共培养后,经扫描电镜观察发现,菌丝扭曲变形,表面产生褶皱,以及出现囊泡化等现象。对脂肽粗提物进行成分分析,发现其含有表面活性素Surfactin和伊枯草素Iturin两种物质,通过琼脂扩散法测定两种活性物质的抑菌活性,发现伊枯草素Iturin为主要抑菌活性成分。【结论】本研究筛选获得拮抗马铃薯早疫病菌的优良生防菌株为贝莱斯芽胞杆菌C16,其主要抑菌物质为伊枯草素Iturin。本研究结果为利用微生物菌剂防治马铃薯早疫病提供了备选菌种资源,同时为菌株C16的开发利用奠定了基础。

从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定;通过点种法对其抗菌谱进行测定;采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外产物抑菌活性的影响。结果显示:该菌株为短小芽孢杆菌(GenBank accession No.HM137033);对20株病原指示菌中的13株均产生不同程度的抑制作用,抗菌谱较广;菌株培养48 h后的胞外产物抑菌作用最强;在pH为7时,抑菌活性最大;达到最大抑菌活性的温度和盐度分别为28℃、5;蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均会降低其抑菌活性。该菌对病原弧菌、迟...

【目的】从不同烟区健康烟草的根际土壤样品中筛选对烟草青枯病具有较强拮抗作用的芽孢杆菌,为防治烟草青枯病提供生防资源。【方法】随机从福建龙岩、四川德昌、陕西汉中等地健康烟草根际土壤中采集30份土壤样品,采用平板稀释法从中分离芽孢杆菌,以烟草青枯病菌为靶标菌筛选拮抗芽孢杆菌,并通过培养特性、菌体形态、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,对筛选的拮抗芽孢杆菌菌株进行鉴定;采用温室盆栽试验,测定拮抗芽孢杆菌的促生作用、定殖能力和抑菌活性。【结果】从健康烟草根际土壤中分离得到1株抗烟草青枯病菌活性较好的菌株LW-4,经鉴定其为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。L...

【目的】筛选及开发出对马铃薯早疫病害具有防治效果的拮抗细菌菌株，旨在丰富该病的生防菌种资源。【方法】从马铃薯种植区早疫病害发生严重的地块根际土壤中分离筛选拮抗菌株，利用形态学特征观察、生理生化特性检测及16S rDNA与gyrB基因序列分析的多项分类法，对获得的拮抗菌株进行分类鉴定。通过测定拮抗菌株对马铃薯块茎切片的防病效果、抑菌广谱性及其生物学功能初步验证菌株的防效功能，并进一步设置盆栽试验印证供试拮抗菌株对马铃薯早疫病的防治效果及对土壤微生物菌群的影响。【结果】通过初筛与复筛获得1株对马铃薯早疫病病原菌平板抑制率达89%的拮抗细菌WK-1菌株，经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌株对马铃薯离体块茎切片的防治效果为88.39%，对马铃薯黑痣病菌、水稻纹枯病菌、玉米大斑病菌、小麦赤霉病菌以及水稻恶苗病菌均具有一定的抑制效果。此外，有溶解无机磷以及产铁载体的能力，盆栽防治效果为74.49%，且经拮抗菌剂WK-1处理，土壤根区微生物群落结构得到改善，土壤中有益微生物细菌的多样性上升。【结论】本研究筛选得到的对马铃薯早疫病菌具有较强抑制作用的拮抗细菌WK-1，可有效防控马铃薯早疫病害的发生，为该病害的生物防治提供了理论基础及菌种资源，应用于农业植物病害防治工作的前景良好，可根据实际种植生产需要进行推广。

为获得能够产Iturins类脂肽的芽孢杆菌以应用于植物的生物防治中,以果蔬体内、根际土壤等多生境中分离的118株细菌为出发菌株,采用平板对峙法、管碟法对其进行了初筛和复筛。结果表明:其中3株菌株对立枯丝核菌、瓜果腐霉和尖孢镰刀菌显示出强烈的抑制作用;通过薄层层析等方法对产Iturins脂肽菌株进行初步分析,最终确定K103为目标菌株。通过形态学鉴定、生理生化试验及16SrDNA的分子生物学等方法,对产抗菌脂肽的K103菌株进行分类学鉴定,最终确定菌株K103为解淀粉芽孢杆菌,并将其命名为解淀粉芽孢杆菌K103(Bacillus amyloliquefaciens K103)。

为获得能够产ＩｔｕｒＩｎｓ类脂肽的芽孢杆菌以应用于植物的生物防治中，以果蔬体内、根际土壤等多生境中分离的１１８株细菌为出发菌株，采用平板对峙法、管碟法对其进行了初筛和复筛。结果表明：其中３株菌株对立枯丝核菌、瓜果腐霉和尖孢镰刀菌显示出强烈的抑制作用；通过薄层层析等方法对产ＩｔｕｒＩｎｓ脂肽菌株进行初步分析，最终确定Ｋ１０３为目标菌株。通过形态学鉴定、生理生化试验及１６ｓｒＤｎＡ的分子生物学等方法，对产抗菌脂肽的Ｋ１０３菌株进行分类学鉴定，最终确定菌株Ｋ１０３为解淀粉芽孢杆菌，并将其命名为解淀粉芽孢杆菌Ｋ１０３（ＢＡｃＩｌｌｕｓ ＡｍｙｌｏｌＩｑｕｅｆＡｃＩｅｎｓ Ｋ１０３）。