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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
陈琼 顾志峰 王爱民 战欣 石耀华
对本实验室和其他学者已经发表的马氏珠母贝外套膜和珍珠囊的454焦磷酸测序转录组数据以及NCBI中的EST数据进行了重组装、同源序列比对和GO注释分析。重组装获得了30266个contig,平均长度522 bp,其中最长的contig为4144 bp;NR数据库BLAST分析获取了2310个相似性contig(E≤10?5),其中1902个在模式动物(人、小鼠、海胆、线虫、斑马鱼、果蝇或者太平洋牡蛎和珠母贝)中可以查找到同源序列。基因注释(GO)结果表明,注释到生物学过程的3846个contig可分为23个亚类,其中代谢过程蛋白、细胞过程蛋白和生物学调控蛋白为contig数量最多的3个亚类;注释...
[期刊] 水产学报
[作者]
王庆恒 张善发 杜晓东 邓岳文 黄荣莲
2006年4月,从流沙港马氏珠母贝养殖群体中挑选11个纯黄壳色个体为繁殖群体建立了黄壳色选系F1。同时,随机选取了50个个体作为繁殖群体建立了对照组。2007年10月,从两个组分别选取相同规格的个体,比较了不同温度和盐度条件下两个组的耗氧率(OCR)和排氨率(NR)。结果表明:(1)在15~30℃,两个组的耗氧率和排氨率均随温度升高而增大。黄壳色选系的OCR和NR变化范围分别为0.117~1.009 mg/(g.h)和0.013~0.028 mg/(g.h),对照组的OCR和NR变化范围分别为0.142~0.827 mg/(g.h)和0.016~0.028mg/(g.h)。(2)在15℃,对照...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
罗少杰 邓岳文 郑哲 焦钰 王庆恒
通过甲基化敏感多态性扩增（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｍｓａｐ）技术，检测马氏珠母贝（ｐｉｎｃｔａｄａ ｍａｒｔｅｎｓｉｉ）外套膜的边缘膜区（ｍａｎｔｌｅ ｅｄｇｅ，ｍｅ）、套膜区（ｍａｎｔｌｅ ｐａｌｌｉａｌ，ｍｐ）和中央膜区（ｍａｎｔｌｅ ｃｅｎｔｒａｌ，ｍｃ）的基因组ｄｎａ甲基化修饰水平；回收具特异性的清晰甲基化修饰片段进行测序、比对分析并筛选基因；利用荧光定量ｐｃｒ对筛选基因进行定量分析。结果显示：（１）利用１５对引物进行扩增实验，平均每个个体外套膜３个区域能够产生（１１６３．２５±１２４．３４）条清晰可辨的条带，其．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
卢金昭 张彬 梁海鹰 梁碧丹
本研究为了探究乙酰化修饰在马氏珠母贝植核后的作用，通过注射赖氨酸去乙酰化酶抑制剂（lysine deacetylase inhibitor，KDI）混合物，采用荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白印迹（western blot，WB）、抗氧化酶活性检测以及养殖指标等多水平综合分析，探究提高蛋白质乙酰化修饰水平对马氏珠母贝植核免疫的影响。注射KDI混合物后，首先检测HDAC 6/10（10006221）、Sir2家族成员（10031932和10020349）这3个去乙酰转移酶基因的表达水平，发现均在不同时间出现显著下调，鳃组织总蛋白乙酰化水平在72 h显著提高，表明注射药物后提高了乙酰化水平；其次使用qRT-PCR检测免疫相关因子的时序表达，结果显示，IRAK1、IL-17、NF-κB和CASP 2基因的表达在12 h都出现显著上调，IκK在48 h显著上调，而TRAF 3从48 h后则出现显著下调，表明KDI刺激后受体贝机体细胞免疫增强；抗氧化酶GSH-Px、POD和CAT酶活性在12 h和24 h表现出显著上调的趋势，表明受体贝机体体液免疫增强；最后，结合养殖数据分析，发现60 d的存活率和留珠率显著提高。研究表明，乙酰化修饰参与了马氏珠母贝的植核免疫反应，KDI可能可以作为免疫调节剂调节马氏珠母贝的植核免疫应答。本研究为深入探究乙酰化修饰的生物学功能和调控机制奠定基础，为合理控制珍珠贝免疫反应提供理论支撑。
关键词：
马氏珠母贝 植核 乙酰化修饰 KDI
[期刊] 水产学报
[作者]
石耀华 洪葵 郭希明 王嫣 侯占辉 顾志峰 王爱民
构建了马氏珠母贝的血液、足、鳃、胃、肝、心脏、外套膜、珍珠囊和感染多毛虫马氏珠母贝的血液(血感)等9个组织的cDNA文库,测序获得了6979个EST序列,从中查找到了268个重复序列,隶属于243个EST,含微卫星的EST数占EST总数的3.48%。珍珠囊cDNA文库含微卫星的序列所占比例最高,为6.16%,血感的最低,为1.65%。双碱基重复序列130个,占48.5%,(AT/AT)n类型最常见;三碱基类型的83个,占约31%,其中(AAT/ATT)n和(AAG/CTT)n较多;四碱基重复的有30个,占11.2%,(AAAT/ATTT)n占了该类型的约50%。一共能够设计151对微卫星引物,...
关键词：
马氏珠母贝 EST-SSR 分子遗传学
[期刊] 水产学报
[作者]
梁碧丹 卢金昭 梁海鹰 张美珍 申铖皓 张彬
为了探究肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor，TNFR)基因在马氏珠母贝中的免疫应答机制，本实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了马氏珠母贝TNFR27(PmTNFR27)基因cDNA全长并进行生物信息学分析，运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了马氏珠母贝在脂多糖(LPS)、聚肌胞苷酸(Poly (I:C))及镉胁迫后，PmTNFR27 mRNA在其不同组织的表达模式。结果显示，PmTNFR27 cDNA全长为1 524 bp，5′UTR长为186 bp，3′UTR长为248 bp，包含28 bp的poly(A)尾巴，开放阅读框(ORF)为1 062 bp，编码353个氨基酸；结构域预测表明PmTNFR27具有一个典型的CRD结构域和一个跨膜蛋白结构域，符合肿瘤坏死因子受体超家族特征；多序列比对结果显示，贝类种间的相似性不高，但功能结构域位置较保守。系统进化树结果显示马氏珠母贝与其他贝类聚为一簇。qRT-PCR结果显示，PmTNFR27 mRNA在马氏珠母贝各组织中均有表达，在鳃中相对表达量最高。LPS刺激后，PmTNFR27基因在鰓中的相对表达量于3 h显著上升并达到最高值，于72 h降到最低值，最高值约为最低值的9.67倍；Poly (I:C)刺激后，PmTNFR27基因在鰓中的相对表达量在6、12 h显著上升并达到最高值，至96 h时降到最低值，最高值约为最低值的13.16倍。镉胁迫后，3 h相对表达量达到最高，24、48 h相对表达量显著下降。研究结果表明PmTNFR27可能参与了马氏珠母贝的免疫应答反应。本研究可为进一步探究TNFR在贝类中的生物学功能提供重要的理论基础和参考价值。
[期刊] 水产学报
[作者]
魏利平 周学家 于光溥 耿孝同 马明正 唐芳
1994年马氏珠母贝由广东省海康县雷州湾北移到山东省蓬莱县进行人工育苗。在水温21－23℃的条件下控温促熟13天产卵，较南海自然繁殖季节提前40余天。采用阴干—升温刺激法产卵，平均个体产卵量为292万粒，受精率为96％。D型幼虫培育密度12．2个／mL。以等边金藻为饵料，在水温20．5～23．6℃下培育19天即出现眼点。以聚乙烯网片、棕帘和聚乙烯板为附着基，幼虫6天即附着完毕。在15m3育苗水体中，培育出壳长2．8mm，壳高1．91mm的幼苗1440万粒，出苗量为96万粒／m3，比南方常规育苗的产量提高10倍。
关键词：
马氏珠母贝 北移 控温育苗
[期刊] 中国水产科学
[作者]
管云雁 刘文广 何毛贤
采用9个多态性微卫星位点分析马氏珠母贝(Pinctada fucata)壳高选育品系(JCS)4个世代的遗传多样性与遗传结构的变化。结果表明,随着选育的进行,4个世代每个位点的平均有效等位基因数(Ne)从2.096下降至1.435,平均等位基因丰度(Rs)从3.556下降至2.556,平均观测杂合度从0.492渐次下降至0.269,遗传多样性呈明显的下降趋势。随着选育世代的增加,从等位基因频率的变化来看,部分呈上升趋势,部分呈下降趋势,部分基本保持稳定,其中,一些低频基因甚至会趋于消失。在所有等位基因中,大部分的频率呈随机变化趋势,并在不同的世代间上下波动;HHM20-158 bp的频率呈有规...
关键词：
马氏珠母贝 选育 遗传变异 微卫星
[期刊] 水产学报
[作者]
李广丽 叶富良
采用聚丙烯酰胺凝胶水平平板电泳技术 ,研究了马氏珠母贝的 8种组织 7种同工酶的酶谱表型 ,结果表明 :所测组织中未检出α -磷酸甘油脱氢酶 (α -GPDH)和醇脱氢酶 (ADH) ,乳酸脱氢酶 (LDH)只在肝脏有一条微弱谱带 ,苹果酸脱氢酶 (MDH)、苹果酸酶 (ME)和超氧化物岐化酶 (SOD)部分组织间有显著差异 ,而酯酶 (EST)则具有明显的组织特异性。
关键词：
马氏珠母贝 同工酶 电泳 组织特异性
[期刊] 水产学报
[作者]
王庆恒 郝瑞娟 郑哲 邓岳文 杜晓东
硫酸角质素具有丰富的携带大量负电荷的磺酸基团,参与生物矿化的成核过程。磺基转移酶催化磺酸基团的转移,对硫酸角质素的生物合成起决定性作用。本研究利用RACE技术克隆马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST1a全长,并通过RNA干扰技术检测PmCHST1a对硫酸角质素合成及贝壳珍珠层形成的影响。结果显示,PmCHST1a基因全长1385 bp,编码366个氨基酸;含有磺基转移酶结构域,具有跨膜结构和信号肽,定位于高尔基体上。组织差异表达分析发现,PmCHST1a在中央膜显著高表达。注射PmCHST1a的RNAi探针后
[期刊] 水产学报
[作者]
王梅芳 余祥勇 刘永 毛勇 于非非
通过比较不同pH值(5.5~9.5)、不同盐度的海水等作为基础液对马氏珠母贝精子保存的影响,选择其中无激活精子作用又对其生理特性(活力,寿命,受精能力等)无影响者,加入二甲亚砜抗冻剂配制成超低温保存的抗冻保护液,精液与保护液按1∶10和1∶20的比例混合,样品按4组不同的降温程序平衡后转入液氮冷冻,比较其超低温冻存的效果。结果表明:以海水(pH7.5~8.0)为基础液,配制10%DMSO作为抗冻保护液,精液与保护液比例为1∶20,在低温(0~4℃)中平衡约30min,在距液氮面15cm、5cm处分别停留5min、10min后转入液氮(-196℃),冻存精子效果良好。冷冻24h、48h及5个月后...
关键词：
马氏珠母贝 精子 超低温保存
[期刊] 中国水产科学
[作者]
尹立鹏 邓岳文 杜晓东 王庆恒
以马氏珠母贝(Pinctada martensii)速长系F2为材料,分析了贝龄对植核贝生长、成活率和育珠性状影响。实验设2.0龄贝植核组(A)、2.0龄贝对照组(B),1.5龄贝植核组(C)和1.5龄贝对照组(D),按照常规技术进行插核手术与海区养殖,育珠期为450 d。在插核后第15、30、60、180、270和450天,比较各组的平均体质量和成活率差异;在插核后270 d和450 d,比较A和C组留核率、珍珠层厚度、优质珠率和珍珠产量的差异。结果表明,在插核后第15、30、60、180和270和450天,4个组的平均体质量和成活率均存在显著性差异(P<0.05),C和D组的成活率显著大于...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赖卓欣 刘雅 王庆恒 郑哲 邓岳文
(Fructose 1,6-bisphosphatase,FBP)是催化糖异生过程中的限速酶,当动植物体处于温度胁迫等不良环境条件时,FBP通过参与糖异生途径以维持机体的糖平衡,在动植物抗逆过程中起着重要作用。本实验通过RACE技术获得了马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)FBP(Pm-FBP)基因c DNA全长序列,并使用荧光定量PCR技术检测了该基因在马氏珠母贝不同组织的表达量,以及在17℃(低温组),22℃(对照组),32℃(高温组)条件下鳃中的时序表达模式。序列分析表明
[期刊] 水产学报
[作者]
张红玉 何毛贤 管云雁
利用SRAP(sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)标记对马氏珠母贝红色壳家系第一代到第三代(F1、F2、F3)及回交家系(BC1)的遗传变异进行了分析。7对SRAP引物共产生63条扩增带,其中多态性条带55条,平均每对引物组合产生7.86条多态标记。在F1,F2及F3三代中,Shannon信息指数和Nei氏基因多样性指数显示世代群体的遗传多样性呈下降趋势,但差异并不显著(P>0.05)。随着世代的增加,相邻世代群体之间的遗传分化有逐渐降低的趋势,而世代内遗传相似性逐渐增加。BC1与F1的遗传相似度高于F3与F1间,表明回交能使后代...
关键词：
马氏珠母贝 序列相关扩增多态性 遗传变异
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
王爱民 石耀华 吴星
多毛类寄生病是我国养殖马氏珠母贝普遍存在的病害 ,同时也是危害最大的病害。本研究比较了 4种防治多毛类寄生病方法 (淡水浸泡法、饱和盐水浸泡法、SBS涂料涂覆法和水泥涂覆法 )的效果 ,通过分析处理后 10d和处理后 6 0d试验贝中的活虫数、有虫率和贝死亡率 ,用t检验同对照组比较。结果表明 ,水泥涂覆法在处理后前期的杀虫效果明显 ,在长时间养殖中对提高试验贝的成活率方面有显著的优势 ,该法成本低、易操作。
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