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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨丹 宋昕昊 季春雷 彭麟 高修歌 左儒楠 季辉 江善祥
[目的]研究鲫鱼肝脏细胞色素P450酶系对马度米星铵的响应。[方法]采用半静态染毒法，设置0.112、0.224、0.448 mg·L~(-1)的马度米星铵处理组和助溶剂对照组，在染毒后第7、14、21及28天，测定肝脏中细胞色素P450 1A(CYP1A)、3A(CYP3A)及4T(CYP4T)的mRNA表达水平，同时测定7-乙氧基异吩唑酮-脱乙基酶（EROD）、氨基比林-N-脱甲基酶（APND）、苯胺-4-羟化酶（AH）、红霉素-N-脱甲基酶（ERND）、NADPH-细胞色素C还原酶（NCCR）的活性及细胞色素P450（CYP450）的含量；通过体外肝微粒体孵育法评价马度米星铵对CYP1A活性的影响。[结果]马度米星铵对CYP1A、CYP3A和CYP4T的mRNA表达水平有一定诱导作用；0.448 mg·L~(-1)马度米星铵组CYP450含量在第21天显著低于对照组（P<0.05）；试验期间，马度米星铵组ERND活性均低于对照组；暴露于各染毒组的AH活性呈先升高后降低的趋势；体外肝微粒体孵育体系中，马度米星铵对CYP1A活性的抑制作用小于25%。[结论]马度米星铵对鲫鱼肝微粒体CYP1A活性无影响；马度米星铵对ERND活性的抑制作用可能与CYP3A的转录水平无关；ERND对马度米星铵较为敏感，适合作为马度米星铵污染水体的生物标志物。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕敏 刘惠霞 吴文君
研究了细胞色素 P4 5 0含量及 NADPH-细胞色素 P4 5 0还原酶活性与苦皮藤素 对粘虫(Mythimna separata)和小地老虎 (Agrotisypsilon)选择毒性的关系。结果表明 ,对照组小地老虎中肠细胞色素 P4 5 0含量及 NADPH-细胞色素 P4 5 0还原酶活性均显著高于粘虫。苦皮藤素 处理后 ,小地老虎和粘虫中肠细胞色素P4 5 0含量均显著高于对照 ,粘虫中毒抽搐期及失水期中肠细胞色素 P4 5 0含量分别比对照升高 1 .4 6和 2 .2 6倍 ,NADPH-细胞色素 P4 5 0还原酶活性分别比对照升高 1 .2 6和 2 .5 6倍 ;处理...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李根芳 胡瑞芹 宋汝浩 陈良标
水体急性低氧一直是水产养殖中的棘手问题，而铁代谢在鱼类低氧应激中发挥着极其重要的作用。为探究铁离子浓度对鱼类应激低氧胁迫的影响，本研究以模式生物斑马鱼的肝脏细胞（Zebrafish liver cells，ZFL）为研究对象，分别利用柠檬酸铁胺（Ammonium ferric citrate，FAC）和去铁胺（Defetoxamine，DFO）对ZFL细胞进行外源铁补充和内源及外源铁清除处理，从而比较不同铁离子浓度下ZFL细胞对低氧胁迫的应激反应。结果表明，低氧胁迫显著降低了ZFL细胞的增殖能力和存活率以及铁代谢相关基因的表达水平，而与对照组和内源及外源铁清除组相比，补充外源铁能够明显增强ZFL细胞在低氧胁迫下的增殖能力、存活率和铁蛋白的表达水平。同时，在外源铁补充组的ZFL细胞中，与铁吸收（tfa）、铁储存（fthl27、fthl28、fthl31）和铁输出（fpn）相关基因的mRNA表达水平均显著提高。进而又对低氧胁迫下ZFL细胞的活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平进行检测，发现补充外源铁能够在一定程度上恢复ZFL细胞中ROS的水平，说明在一定范围内胞内ROS水平的增加有利于ZFL细胞应对低氧胁迫。综上所述，本研究发现当ZFL细胞处于急性低氧时，补充外源铁离子可以提高细胞内的铁水平，进而产生一定的有益ROS，有助于提高其在低氧环境中的生存率。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘瑾 张美娟 于成兵 杨烁烁 张京 徐建雄 徐维娜
为研究黄连素对高脂诱导的斑马鱼肝脏细胞脂质代谢组学的影响，以斑马鱼细胞为实验材料，通过棕榈酸钠（0.25 mmol/L，24 h）诱导肝脏细胞脂质沉积模型，经黄连素（25 μmol/L，6 h）处理后收集细胞。采用高效液相色谱-质谱联用技术进行脂质代谢组学分析，对不同处理的斑马鱼肝脏细胞的脂质代谢物进行筛选鉴定并对脂代谢相关因子的基因表达进行检测。结果显示，与对照组相比，高脂组共筛选出1 761个差异离子，其中鉴定出147种差异表达的代谢产物基因，123个表达升高、24个降低；高脂+黄连素组共筛选出2 728个差异离子，其中鉴定出346种差异表达的代谢产物，139个升高、207个降低。与高脂组相比，高脂+黄连素组共筛选出1 605个差异离子，其中鉴定出259种差异表达的代谢产物，45个升高、204个降低。进一步对不饱和脂肪酸代谢通路研究发现，差异代谢产物二高-γ-亚麻酸（DGLA）和二高-α-亚麻酸（ETA）含量在高脂组中显著上升，且添加了黄连素后含量显著下降；与对照相比，高脂+黄连素组的DGLA和ETA含量并无显著差异。通过检测DGLA和ETA分解相关酶的基因（atgl、hsl）表达量发现，与对照组相比，高脂组二者均显著降低，添加了黄连素后均显著升高；检测合成相关酶基因（acc、elovl6、elovl7a、scdb、fas和fads2）的表达量，结果显示，与对照组相比，高脂组细胞内acc、elovl6和scdb的表达量显著升高，fads2表达量显著降低，而添加了黄连素后细胞内fads2的表达量显著升高，fas、elovl6和scdb表达量显著降低。综上所述，高脂诱导通过抑制脂质分解相关基因表达，促进脂质合成相关基因的表达进而引起脂肪在细胞中的过度沉积，添加适量黄连素可以显著改善这一现象。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
谭树华 罗少安 梁芳 严芳 何典翼
采用室内模拟方法,研究了不同亚硝酸钠浓度(0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L和3.0mg/L)处理不同时间后对鲫鱼肝脏过氧化氢酶(CAT)活性的影响。实验结果表明:在处理后24h,各浓度处理组的CAT活性增加;当处理时间延长时,2.0mg/L和3.0mg/L处理组CAT活性受到抑制,抑制程度与其剂量高低和暴露时间的长短呈正相关,表现出显著的浓度-效应和时间-效应关系;而0.5mg/L和1.0mg/L处理组CAT活性在暴露后48h显著升高,在96h时下降至稍低于对照组。结果表明,CAT活性对亚硝酸钠胁迫较为敏感,提示有可能成为水体中亚硝酸盐氮浓度升高的一个合适的生物指示剂。
关键词：
鲫鱼肝脏 过氧化氢酶 亚硝酸钠
[期刊] 中国农业科学
[作者]
任晓宇 杨美玲 高翠娥 张建珍 马恩波
【目的】研究飞蝗(Locusta migratoria)细胞色素P450(CYP450)第四家族(CYP4)中3个基因的功能。【方法】以飞蝗为材料,依据飞蝗EST数据库P450基因预测序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆飞蝗细胞色素P450基因的cDNA全长序列,命名为CYP4C69、CYP4C73和CYP4DH1(GenBank登录号:KF857162、KF857163和KF857164)。采用实时定量PCR技术分析CYP4C69、CYP4C73和CYP4DH1在飞蝗各发育阶段以及不同组织中mRNA的表达水平。应用RNA干扰技术沉默CYP4C69、CYP4C73和CYP4DH1,实时定量P...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张林林 徐鹿 韩召军
利用毒死蜱、吡虫啉和溴氰菊酯等3类不同药剂,通过毒力生测首先确定了田间灰飞虱对杀虫剂的低水平多重抗性特性;其次通过解毒酶活力测定,发现抗性品系的细胞色素P450氧化酶和酯酶明显升高;进而根据灰飞虱转录组数据进行引物设计,通过PCR克隆对转录组中的细胞色素P450及酯酶基因进行验证,在得到53条细胞色素P450基因序列及72条酯酶基因序列的基础上,利用半定量PCR比较这些基因在灰飞虱田间抗性品系和敏感品系间的表达差异。结果发现:细胞色素P450的CYP6家族中有10条,CYP4家族中有6条,这16条基因序列在抗性品系中的表达量明显高于敏感品系;酯酶中也有12条基因系列在抗性品系中的表达量明显高于...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨海峰 张玲玲 覃少华 江善祥
将60只40日龄依莎公鸡随机等分为对照组、苯巴比妥(PB)诱导组和地塞米松(DEX)诱导组,进行体外肝微粒体酶活性测定和体内安替比林(AP)消除动力学试验,研究苯巴比妥和地塞米松对鸡肝微粒体细胞色素P450的诱导作用。结果表明,与对照组相比,PB组和DEX组的肝微粒体酶活性显著提高(P<0.01),AP的代谢速率显著加快(P<0.01)。表明苯巴比妥和地塞米松对鸡肝微粒体体细胞色素P450具有明显的诱导作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄敏 程珂 马春松 王猛 王春芳
为探究6-姜烯酚对鱼类的免疫调节作用,用不同浓度的6-姜烯酚孵育斑马鱼肝脏细胞48 h后,检测其生长率、胞内活性氧(ROS)水平、抗氧化酶活性,并进行抗炎、抗氧化基因表达量的检测。结果显示:高浓度的6-姜烯酚抑制肝脏细胞的增殖(P<0.05),而活性氧ROS和脂质过氧化产物MDA含量最低(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
胡晓 房文红 汪开毓 孙贝贝 胡琳琳 周帅 周俊芳
在分析了氟甲喹腹腔注射后对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)主要药酶活性影响的基础上,从蛋白表达和mRNA转录水平探究了氟甲喹对CYP1A(EROD)的诱导机制。以氟甲喹剂量35mg/kg一次性腹腔注射异育银鲫24h后,肝微粒体的7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶(EROD)活性为54.33pmol/(mg·min),显著高于对照组的34.00 pmol/(mg·min)(P
关键词：
细胞色素P450 异育银鲫 氟甲喹 诱导
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈松 杨亦桦 江孝静 吴益东
比较了 6种增溶剂对棉铃虫细胞色素P4 5 0O 脱甲基活性的影响。结果表明 ,在匀浆缓冲液中加入Polyoxyethyleneetherw 1,棉铃虫细胞色素P4 5 0的O 脱甲基活性为 37 80U (mOD·min-1·larva-1) ,是对照的 1 34倍 ;经Chaps、胆酸钠、Emulgen 911、Emulgen 913、Triton X10 0增溶处理后 ,O 脱甲基活性分别为 2 2 7,2 7 5 8,9 6 4 ,14 77和 19 86U ,分别是对照的 97% ,98% ,34% ,5 2 %和 70 %。对照中只有 79 2 %的个体能够被检测到活性 ,而在...
关键词：
棉铃虫 细胞色素P450 增溶剂 抗药性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
袁远 高熹 张连根 倪峰 高俨 吴毅歆 喜超 朱家位
【目的】探索甜菜叶蛾产生抗药性的分子机制。【方法】利用RACE技术,从甜菜夜蛾Spodoptera exigua中克隆获得1个细胞色素P450基因的全长cDNA序列。【结果】该基因全长894 bp,开放阅读框411 bp,3′和5′端非编码序列分别为79和213 bp,推导的氨基酸序列编码194个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为22.30 kDa,等电点为8.22。同源性比对分析发现,甜菜夜蛾细胞色素P450基因与斜纹夜蛾Spodoptera litura、甘蓝夜蛾Mamestra brassicae、棉铃虫Helicoverpa armigera和谷实夜蛾Helicoverpa zea细胞色素P450的相似性分别为42%、41%、39%和42%。【结论】研究结果可为今后深入研究甜菜夜蛾细胞色素P450功能提供借鉴和参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王晖 张珉 张小红 夏兰琴
【目的】通过体外饲喂双链RNA(dsRNA),利用RNAi技术沉默麦长管蚜和桃蚜体内细胞色素P450。【方法】采用PCR克隆获得麦长管蚜和桃蚜体内细胞色素P450片段;利用双链RNA合成试剂盒合成麦长管蚜和桃蚜细胞色素P450保守序列的dsRNA;在蚜虫人工饲料中,分别加入终浓度为0、3、5和7.5 ng.μL-1的dsRNA,每个试验组设置3个重复,分别于饲喂后2天、4天、6天、8天统计蚜虫的存活数;利用实时荧光定量PCR技术分析饲喂后目标基因的表达抑制情况。【结果】从麦长管蚜与桃蚜的cDNA中分别克隆细胞色素P450,所克隆片段同源性为90.1%,发现随着dsRNA浓度的增大,麦长管蚜和桃...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏岭 李绍戊 王荻 刘红柏 卢彤岩 尹家胜
依据GenBank已公布的鲫鱼热激蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)和beta-actin mRNA序列,分别设计两对引物,应用半定量RT-PCR方法检测应激处理后不同恢复时期鲫鱼(Carassius auratus)肝脏中HSP70 mRNA的表达情况。结果表明,诱导后肝脏组织中HSP70 mRNA的表达量呈现时间依赖性,存在先升高后回落的趋势。在诱导后1h即有所升高,在4h时达到最高值,之后逐渐降低,至48h,表达量降至最初值。研究结果为鲫鱼HSP70的研究提供了基础数据,也为将HSP70用作鱼类生理状态的诊断提供了理论依据。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
符贵红 杨先乐 喻文娟 胡鲲 章海鑫 黄宣运
采用基因克隆技术获取草鱼(Ctenopharyngodon idellus)细胞色素P450 3A(CYP3A)cDNA序列长1 849 bp,包含完整开放阅读框(open reading frame,ORF)1 542 bp,1个终止密码和含polyA信号3′UTR;ORF编码514个氨基酸,含信号肽(29 aa),2个跨膜螺旋区(23 aa,23 aa),血红素结合域(21 aa)和6个底物识别位点(SRS1-6);与其他脊椎动物CYP3A氨基酸序列相似度达60%～92%。用实时定量PCR和分光光度计法分别研究了草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idellus kidney ...
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