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[期刊] 林业科学研究
[作者]
蔡琼 丁贵杰 文晓鹏
［目的］克隆马尾松谷胱甘肽过氧化物酶基因，并对其进行功能研究。［方法］采用ＲＡＣＥ技术克隆基因Ｃ ＤＮＡ序列，实时荧光定量ＰＣＲ检测基因在马尾松干旱胁迫下的表达模式，花序浸泡法转化拟南芥，并对转基因与野生型拟南芥的生长表型和根系生长进行分析。利用荧光显微镜技术对转基因拟南芥不定根进行ＧＦＰ荧光检测。［结果］克隆到１个８７１ ｂＰ的ＧＰＸ基因全长Ｃ ＤＮＡ序列，命名为Ｐｍ ＧＰＸ６。Ｐｍ ＧＰＸ６包括５１３ ｂＰ的完整开放阅读框，编码１７０个氨基酸残基。Ｐｍ ＧＰＸ６蛋白与油松Ｐｔ ＧＰＸ蛋白同源性达９５％。Ｐｍ ＧＰＸ６在马尾松根中高表达，茎、叶中表达量低。在干旱胁迫下，Ｐｍ ＧＰＸ６在根、茎．．．
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
陈虎 贾婕 罗群风 吴东山 杨章旗
克隆获得马尾松Pinus massoniana PmGPX基因,进行生物信息学分析以及在不同抗虫材料表达模式分析。在前期马尾松转录组测序获得该基因片段基础上,用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得基因全长,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术分析该基因在不同抗虫材料中的表达模式。克隆获得基因cDNA全长序列,命名为PmGPX。该基因包含741 bp开放阅读框,编码246个氨基酸。序列分析表明:该基因具有GPX家族典型的保守结构域,等电点PI 8.29,蛋白分子量27.08 kDa,与针叶植
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张孜宸 隋欣 高飞 周宜君 陈静 刘楠
【目的】克隆盐芥谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs)基因ThGPX8,对其进行序列分析,构建原核表达载体,为进一步研究ThGPX8的结构和功能奠定基础。【方法】以盐芥为材料,利用RT-PCR技术获得其ThGPX8基因的全长cDNA序列;应用生物信息学手段对该基因编码的蛋白结构和系统进化关系进行分析;构建原核表达载体pET-ThGPX8,转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。【结果】获得的ThGPX8基因序列的开放阅读框(ORF)为504bp,编码167个氨基酸,具有GPXs的特征结构域,不是跨膜蛋白;其二级结构主要由无...
关键词：
ThGPX8 盐芥 基因克隆 原核表达
[期刊] 水产学报
[作者]
唐蕾 傅明骏 赵超 邱丽华 刘文生 江世贵
为了研究含硒谷胱甘肽过氧化物酶（ｓｅｌｅｎｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｓｅｇｐｘ）在斑节对虾应激反应和卵巢发育中的作用，实验以斑节对虾肝胰腺转录组数据中筛选获得的ｓｅ－ｇｐｘ基因（ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ）片段为基础，利用ｒａＣｅ技术获得ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因的Ｃ ｄｎａ全长，并对其进行了生物信息学分析；利用荧光定量ｐＣｒ技术研究了ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ在斑节对虾不同组织、卵巢发育各期、肝胰腺组织在ｐｈ９、硫酸铜（Ｃｕ～（２＋））应激下的相对表达量和变化趋势。结果显示，ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因Ｃ ｄｎａ全长为９５９ ｂｐ，５＇非编码区（ｕｔｒ）长１０ｂｐ，开放．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张晗晗 徐燕 纪德华 陈昌生 许凯 谢潮添
谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｇｐｘ）是植物活性氧（ｒｏｓ）清除酶促系统的重要成员之一，在植物逆境胁迫应答中发挥着重要作用。本研究以坛紫菜（ｐｙｒｏｐｉａ ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ）为研究材料采用ｒａＣｅ技术克隆获得了一条坛紫菜的ｇｐｘ全长基因序列，命名为ｐｈｇｐｘ（ｇｅｎ Ｂａｎｋ收录号：Ｊｘ６７３９０８）。该基因序列全长１０２７ Ｂｐ，包含５５５ Ｂｐ的开放阅读框，所编码的多肽包含１８４个氨基酸，分子量为１９．９ ｋ ｄ，等电点为８．７６。多序列比对和系统进化树分析结果表明ｐｈ ｇｐｘ属于植物ｇｐｘ基因家族成员。基因表达水平的ｑ ｐＣｒ分析结果表明ｐｈ ｇ．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张萌 姜文婷 王雪纯 蒋湘宁 盖颖
【目的】植物谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）是酶促活性氧清除机制中的关键酶之一，对日本落叶松GPX开展酶学特性与抗逆性研究，可以补充和完善林木改良基因资源，也为探究谷胱甘肽过氧化物酶抗逆的分子机制提供理论依据。【方法】本研究以日本落叶松茎部组织为材料克隆谷胱甘肽过氧化物酶基因，进行生物信息学分析和亚细胞定位研究。诱导、纯化目的蛋白进行体外酶学活性测定，通过点斑试验、生长曲线试验验证GPX抗逆性。【结果】从日本落叶松茎中克隆得到了2个GPX基因，分别命名为LkGPX2、LkGPX3，二者都含有完整的特征保守基序。构建系统进化树发现，LkGPXs和具有抗逆功能的PmGPX与PeGPX聚为一支。亚细胞定位显示，LkGPX2和LkGPX3蛋白在细胞核和细胞质中均有表达。以硫氧还蛋白（Trx）为电子供体进行体外酶学活性测定，LkGPX2与LkGPX3对过氧化氢（H_2O_2）、过氧化氢叔丁醇（t-BHP）和有机氢过氧化物（Cum-OOH）都具有催化活性，LkGPX2对于3种底物的催化活性分别为（0.402±0.037）、（0.424±0.018）、（0.425±0.009） U/mg,LkGPX3对于3种底物的催化活性分别为（0.397±0.027）、（0.449±0.028）、（0.407±0.021） U/mg。大肠杆菌体外逆境处理试验表明，LkGPX2、LkGPX3能够提高大肠杆菌对模拟干旱胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）既能起到活性氧清除作用，同时具备一定应对非生物胁迫的能力。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘振兴 柯浩 曹艳林 张健騑 林敏 孟轩
采用RACE技术,克隆了日本鳗鲡(Anguilla japonica)谷胱甘肽过氧化物酶1和4(GPx1、GPx4)基因的完整编码序列(Complete coding sequence,CDS)。GPx1基因全长993bp,5′非编码区(UTR)29bp,CDS573bp,3′UTR372bp,PolyA19bp;第803-898位碱基(位于3′UTR)形成1个硒半胱氨酸插入序列(Selenocysteine insertion sequence,SECIS),协助144-146位密码子TGA编码Sec。GPX4基因全长1048bp,5′UTR115bp,CDS561bp,3′UTR346bp...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁勇 陈月星 赵丽那 阮景军 程剑平 赵钢 严俊
【目的】本文探究硒对不同麦类谷胱甘肽酶活性的影响。【方法】分别测定在高硒(施30 g/hm2硒酸钠)和低硒(不施硒)条件下,不同麦类作物分蘖期第二片叶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,分析硒酸钠与GSH-Px活性两个因素间的相互作用。【结果】麦类GSH-Px活性在高硒环境显著高于低硒环境;不同麦类GSH-Px活性对硒敏感度不同。【结论】这为进一步研究麦类硒摄取的生理机制提供了重要依据。
关键词：
麦类作物 谷胱甘肽过氧化物酶 硒酸钠
[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁潘霞 邢颖 廖青 潘丽萍 陈锦平 刘永贤 江泽普
【目的】探究硒对春茶谷胱甘肽过氧化物酶活性及品质的影响,为进一步研究硒调控茶叶生理机制提供理论依据。【方法】以氨基酸螯合硒作为硒源,对土壤进行淋施,研究不同质量浓度硒肥对春茶茶叶含硒量、谷胱甘肽过氧化物酶活性、茶叶中茶多酚、茶多糖含量的动态变化的影响。【结果】12～21 L/hm~2的各处理下茶叶硒含量差异不显著,且均显著高于9 L/hm~2和对照处理,其中15 L/hm~2浓度处理时茶叶硒含量最高,为0.64 mg/kg;硒处理可以明显提高茶叶的GSH-Px活性,硒肥浓度在15 L/hm~2时,酶活性最强。施硒后,可以增加茶的茶多酚、茶多糖含量。18 L/hm~2硒处理下春茶的茶多酚、茶多糖含量为各处理最高。【结论】在适量的硒浓度处理下,可以明显提高茶叶的GSH-Px活性,并增加茶的茶多酚、茶多糖含量。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈俏丽 王峰 李丹蕾 零雅茗 张瑞芝
根据转录组测序结果,克隆到水稻干尖线虫谷胱甘肽过氧化物酶基因(Ab-GPX),对其基因结构、在缺氧条件下的表达模式及功能进行研究.原位杂交结果表明,Ab-GPX在水稻干尖线虫生殖系统部位表达.RT-PCR结果表明,Ab-GPX在缺氧胁迫及恢复供氧过程中表达量上调.利用基因沉默技术进一步研究发现,Ab-GPX沉默后,水稻干尖线虫在缺氧条件下存活率显著下降,表明该基因可能参与调控水稻干尖线虫的缺氧隐生状态.
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
姜晶晶 张殿昌 麻建军 苏天凤 江世贵
研究了合浦珠母贝含硒谷胱甘肽过氧化物酶(命名为poSe-GPx)基因结构特征和在应激状态下的表达调控机制,其cDNA全长为1271 bp,5′-非编码区(UTR)长28 bp,3′-UTR长631 bp,包括4个RNA不稳定信号结构域(ATTTA)、1个保守的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)和1个位于poly(A)尾巴上游22个核苷酸处的多聚腺苷信号(AATAAA).开放阅读框(ORF)为612 bp,编码由203个氨基酸组成的多肽,分子质量约23.1 ku,理论等电点为8.29.poSe-GPx第51个氨基酸为硒代半胱氨酸(Sec),由密码子TGA编码.poSe-GPx序列中存在1个保守的...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
冯涛 郑微云 洪万树 陈荣
研究大弹涂鱼 (Boleophthalmuspectinirostris)暴露于 0 .0 5、0 .2 0和 0 .50mg/L不同质量浓度苯并(a)芘 (BaP)溶液中 1周 ,其肝脏谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx)活性的变化。结果显示 ,0 .5mg/LBaP组中 ,随暴露时间的延长 ,大弹涂鱼肝脏GPx活性被显著抑制 (P≤ 0 .0 5) ;暴露 3d ,随BaP浓度的增加 ,GPx活性显著降低 (P≤ 0 .0 5) ,表明高剂量的BaP可对其肝脏产生毒性作用。将大弹涂鱼暴露于 0 .50mg/LBaP 3d ,再转入清洁海水中 4d ,其肝脏GPx活性可恢复至对照组水平 ,表明其肝...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
粟霞 张军科 马锋旺
根据Genbank上已报道的烟草、辣椒、龙眼和杨树4种植物的抗坏血酸过氧化物酶基因的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE法对皇家嘎拉苹果叶片APX基因进行克隆、分析。结果表明,皇家嘎拉苹果叶片APX基因片段长度为694 bp,与GenBank中已登陆的富士苹果果实、皇家嘎拉苹果花芽、草莓及Rosa hybridcultivar等的APX cDNA的同源性分别为97%,97%,84%和84%。
关键词：
苹果叶片 APX基因 过氧化物酶
[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖蓉 罗慧珍 张小娟 邓舒 张春芬 任莹 孟玉平 曹秋芬 聂园军
【目的】研究枣树谷胱甘肽过氧化物酶基因(Zj GPX)的功能,为其在果树抗逆基因工程改良中的利用奠定基础。【方法】以‘壶瓶枣’(Ziziphus jujuba Mill.Hupingzao)结果枝构建的c DNA文库中选取一条与其他植物谷胱甘肽过氧化物酶基因有较高同源性的序列为研究对象进行序列分析,预测其功能。通过实时荧光定量技术分析目的基因在盐胁迫及干旱胁迫条件下的表达特性,并构建植物表达载体PEZR(K)-LNY-Zj GPX,运用农杆菌介导法,将Zj GPX转入拟南芥,对转基因及野生拟南芥植株作盐胁迫及干旱胁迫处理,验证其抗逆功能。【结果】Zj GPX编码序列(CDS)长510 bp,编...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郑苗苗 张令昂 焦战战 邵淑丽
采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加方式,对红平菇HP1(Pleurotus djamor)进行培养,检测不同时间培养液对不同底物的氧化作用,作为锰过氧化物酶的产生及活性测定的主要依据。在含Mn2+的培养液添加底物木屑后锰过氧化物酶最大酶活为358.7 U·L-1,提取经优化筛选后的锰过氧化物酶粗酶液,对4种具有不同化学结构的染料进行了脱色试验。结果表明,对异戊二烯类番红在6 h时脱色率为82.6%。因此,显示出红平菇HP1锰过氧化物酶对番红染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景。采用RT-PCR和RACE技术,从红平菇HP1菌株中获得编码锰过氧化物酶基因的c ...
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