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[期刊] 西南农业学报
[作者]
何雪梅 唐雅园 孙健 李丽 向昱 杨兆杏 赵承刚 韦珍 唐杰
【目的】分离纯化香蕉磷脂酶D(PLD)并分析其生化特性,为深入研究香蕉PLD打下基础。【方法】采用硫酸铵沉淀结合柱层析法对香蕉PLD粗酶液进行纯化,考察反应体系中香蕉PLD蛋白含量、Ca~(2+)浓度、pH和反应时间对PLD活性的影响,明确PLD的生化特性。【结果】80%硫酸铵沉淀结合DEAE-sepharose CL-6B阴离子交换柱、Hitrap SP HP阳离子交换柱和Sephadex G-200凝胶层析柱,可将香蕉PLD粗酶液纯化58.74倍,达到电泳纯,香蕉PLD的相对分子量约为43 kD;香蕉PLD活性最佳测定条件为:PLD蛋白含量30.00μg、Ca~(2+)浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min、pH 6.5,确定香蕉PLD具有较强亲和力和较高催化活性。【结论】硫酸铵沉淀结合柱层析分离技术适用于香蕉PLD纯化,在PLD蛋白含量30.00μg、Ca~(2+)浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min及pH 6.5条件下,香蕉PLD活性最高。
关键词：
香蕉 磷脂酶D 分离纯化 生化特性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
万嗣宝 张斌 战吉宬 陈建业 尹京苑
【目的】克隆桃果实中的磷脂酶Dα基因,并对其进行序列分析和低温表达模式分析。【方法】采用电子克隆与RT-PCR相结合的方法分离桃果实PLDα基因cDNA全长序列;半定量RT-PCR和Northern杂交检测目的基因在桃果实低温贮藏过程中的表达情况。【结果】成功获得全长为2859bp的桃果实PLDα基因序列,该序列具有完整的开放阅读框架(ORF,172～2604bp),编码810个氨基酸。对ORF进行的RT-PCR验证结果与电子克隆序列一致。序列分析显示,桃果实PLDα基因编码的氨基酸序列与草莓、番茄、葡萄等物种的磷脂酶Dα氨基酸序列之间具有高度的保守性,含有N端C2结构域及两个保守的活性中心。...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
代易 纪春艳 王振中
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)能够特异性结合并抑制真菌侵染所产生的多聚半乳糖醛酸酶。本试验以健康香蕉幼苗植株为材料,通过硫酸铵沉淀、PM10膜超滤浓缩、亲和层析、离子交换层析以及凝胶层析等步骤,纯化获得一种PGIP,SDS-PAGE确定其分子质量为38.2ku。该PGIP的活性对温度敏感,对香蕉枯萎病菌4号小种(Foc4)PG酶活性的抑制高于对Aspergillus niger PG酶活性的抑制,表明其对不同PG酶的抑制具有选择性。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王俊斌 李明 丁博 包曙光 王锐 谢晓东
为获得更多小麦抗逆基因资源,利用RT-PCR方法克隆了磷脂酶D基因(PLD),命名为TaPLDα,并对基因及其蛋白进行了生物信息学分析。结果表明,TaPLDα开放阅读框为2 394 bp,编码812个氨基酸残基,等电点5.30,分子量为92 kDa。序列分析显示,TaPLDα基因编码的氨基酸序列含有N端C2结构域及2个保守的活性中心。预测TaPLDα蛋白是一个亲水性稳定蛋白且定位于细胞质,其二级结构含28.82%的α-螺旋、20.07%的延伸链、6.03%的β-转角和45.07%的不规则卷曲。该蛋白不存在信号肽,无跨膜区。TaPLDα与水稻、玉米和拟南芥的PLDα氨基酸序列之间具有高度的保守性...
关键词：
小麦 磷脂酶Dα 基因克隆 生物信息学
[期刊] 西南农业学报
[作者]
康伟伟 张超 易自力 陈智勇 谭炎宁
【目的】磷脂酶PLD(Phospholipase D)家族是水稻中一类重要的蛋白,它在植物的生长发育调控以及非生物胁迫应答中发挥着重要作用。本研究旨在了解水稻PLD家族的基本信息。【方法】采用生物信息学的方法,对该家族16个成员基因的结构、蛋白基序、时空表达模式以及激素诱导表达模式等进行了分析。【结果】水稻PLD家族基因的长度为2982～11 305 bp,含有3～21个外显子,同亚类基因的外显子数目一致;所有家族成员在蛋白序列上表现出较高的相似性,除OsPLDφ,OsPLDκ外的大部分成员含有3种相同类型的基序。提取RiceXPro数据库中的表达数据后发现,PLD基因在根、茎、叶、花药、子房等部位中的表达量相对较高,而在胚芽和胚乳等部位中的表达量较低;PLD基因对不同激素的响应行为呈现出丰富的多样性,它们受茉莉酸(JA)和脱落酸(ABA)诱导表达,受油菜素内酯(BR)和细胞分裂素(CTK)所抑制,而对赤霉素(GA)和生长素(IAA)不敏感。【结论】成员含有相同类型的基序,表明它们在功能上具有保守性和一致性;各成员在不同激素处理后表现出不同的应答方式,暗示水稻PLD成员在逆境响应中执行不同的功能。这些研究结果为进一步研究水稻PLD家族基因的生物学功能奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王国泽 茅林春 潘炘
磷脂酶D(PLD)是一种分解磷脂的多功能酶。文章介绍了PLD的生化特性及其在信号转导中的作用,概述了PLD的调控机制及在机械损伤、低温、高渗透压、激素和微生物等环境胁迫下的响应。
关键词：
PLD 信号转导 环境胁迫
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡广隆 陈亚娟 魏建华 王宏芝 张杰伟
【目的】为研究兰花(Phalaenopsis equestris)中PI-PLC基因家族各成员在兰花中的生理功能。【方法】利用兰花基因组数据库,经过生物信息学分析,获得兰花PI-PLC基因家族成员的基因结构、染色体定位和编码蛋白,经过多重序列比对进行进化和分类分析。【结果】结果表明:兰花基因组中含有3个PI-PLC家族基因成员,分别含有913个外显子。TMHMM跨膜区结构分析显示,兰花PI-PLC蛋白均不含有跨膜区;MEME保守结构域分析显示,兰花PI-PLC蛋白均含有4个保守的EF、X、Y和C2结构域。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
杨洪 朱玲 骆晓蕊 周春娅 庄志猛
本研究利用ＲＡＣＥ和ＲＴ－ＰＣＲ技术克隆了海蜇（ＲｈｏＰｉｌＥｍＡ ＥｓＣｕｌＥｎＴｕｍ）磷脂酶Ａ＿２基因（ＲＥ－ＰｌＡ＿２－１）的ＣＤｎＡ及基因组序列，并分析了其ｍ ＲｎＡ在海蜇不同发育阶段的表达。ＲＥ－ＰｌＡ＿２－１基因的ＣＤｎＡ全长为８２４ ｂＰ，包括了４８ ｂＰ的５？非编码区、５０４ ｂＰ的开放阅读框及２７２ ｂＰ的３＇非翻译区。ｓｍＡＲＴ分析显示，ＲＥ－ＰｌＡ＿２－１为分泌蛋白，包括了一个由１９个氨基酸组成的信号肽和一个由１１８个氨基酸组成的磷脂酶Ａ＿２结构域。多序列比对和系统进化分析显示，ＲＥ－ＰｌＡ＿２－１基因与来自星状海葵（ｎＥｍＡＴｏｓＴＥｌｌＡ ｖＥＣＴＥｎｓｉｓ）、僧袍芋．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
何全光 邝健飞 陈建业 陆旺金
【目的】探讨脂氧合酶(LOX)在香蕉果实成熟过程中的作用。【方法】选取1 000μL.L-1丙烯处理采后不同时间(采后10 h和48 h)的香蕉果实,并分析果皮中MaLOX、MaACS和MaACO等基因表达,LOX活性变化、乙烯释放及其与果实成熟的关系。【结果】采后48 h的香蕉果实,经丙烯处理后果皮中LOX活性及基因表达在成熟前呈先下降后升高的趋势,且先于乙烯高峰、MaACS和MaACO基因表达峰出现。丙烯处理虽能诱导采后10 h的香蕉果实果皮中MaACS和MaACO基因的表达,但不能提高果皮中LOX活性和促进果实成熟。【结论】推测香蕉果实在成熟进程中,果皮中LOX和ACO、ACS协同调控香...
关键词：
香蕉 脂氧合酶 成熟 跃变
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
程新伟 梁鹏 孙鹤 赵卉双 金红 程文健 陈丽娇
以氯仿/甲醇法提取的大黄鱼鱼卵粗磷脂为原料,研究柱层析固定相种类、粒度,洗脱剂流速、配比及样品上载量等因素对分离纯化的鱼卵磷脂酰胆碱(Roe-PC)纯度和回收率的影响,以确定最佳的工艺参数.结果表明,在固定相为200300目硅胶,流动相为氯仿/甲醇(3∶2),流速为2 m L·min(-1),上载量为0.035 g·g(-1)(样品/硅胶)的条件下,分离纯化的大黄鱼Roe-PC的纯度可达96.34%,回收率为85.18%.
关键词：
大黄鱼鱼卵 磷脂酰胆碱 分离纯化
[期刊] 林业科学
[作者]
邹维华 赵强 崔德才 王斌
建立美洲黑杨G2组培再生体系,确立美洲黑杨G2分化最适宜培养基和生根培养基。然后分别进行卡那霉素和潮霉素敏感性试验,利用叶盘法依次将反义磷脂酶Dγ(Anti_PLDγ)基因和几丁质酶(CH5B)基因转入美洲黑杨G2中。首先转入反义磷脂酶Dγ基因,经诱导不定芽及生根阶段卡那霉素(选择性抗生素)连续筛选,获得了21株卡那霉素抗性植株。抗性植株经PCR及PCR_Southern杂交检测,有13株均呈阳性,证明Anti_PLDγ基因成功整合到美洲黑杨G2基因组中。耐盐性试验表明,4株转基因植株抗NaCl能力比对照都有不同程度提高。选择4号株系继续转入几丁质酶基因,通过潮霉素(选择性抗生素)筛选不定芽及...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
孙嘉曼 尹玲 张进忠 韦绍龙 李朝生 刘金成 卢江
研究广西特色香蕉种质资源的遗传多样性和亲缘关系，为香蕉种质资源分类、品种鉴定和有效利用提供理论参考。采用１３对ＳＳＲ荧光标记引物，对收集到的２４份广西主栽香蕉品种及特色种质资源进行扩增，采用毛细管电泳对其进行基因分型。共扩增得到１３１个等位基因，平均每对引物扩增得到１０．１个等位基因。引物的多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．６５～０．８７，平均０．７７。在相似系数０．８５附近，２４个香蕉品种划分为４个大类：第一大类包含栽培种的香牙蕉和广西各地区的野生近缘种，第二大类为大蕉，第三大类为粉蕉，第四大类为贡蕉。从收集到的野生资源中筛选与栽培种亲缘关系较近、且具有良好抗病性的品种，可作为抗病育种的中间材料．．．
关键词：
香蕉 SSR标记 指纹图谱 广西
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李佳 彭德良 黄文坤
采用线虫通用引物D2A和D3B对9个香蕉穿孔线虫种群的核糖体DNA28S大亚基的D2/D3区进行了扩增,获得的片段长度约为780bp,克隆测序后使用UPGMA法进行聚类分析和构建系统发育树。结果表明9个线虫种群D2/D3区核苷酸序列相似性为99.13%,其中8个群体的序列与越南报道的香蕉穿孔线虫近源种(Radopholus sp.7B VietNam)的D2/D3区核苷酸序列(DQ328712)相似性为97.46%,说明香蕉穿孔线虫D2/D3区具有较大的保守性。聚类分析结果表明,RSHN12r、RSSH、RSHL、RSHK、RSLZ、RSSZ、RSHN13、RSHN12p等8个种群聚为一类,亲...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈文娟 陈丽娇 曾稍俏
为了充分提取和利用大黄鱼鱼卵中的磷脂,研究酶水解法提取大黄鱼鱼卵磷脂的工艺。通过单因素试验和响应面设计优化试验,确定酶水解法的最佳工艺条件,并比较酶水解法与溶剂法、超声波法的提取效果。结果表明,选用内切型木瓜蛋白酶、料液比1∶2、pH 6.0、酶解温度45℃、酶解时间1.5 h和加酶量125 U/g为较佳工艺条件。在此条件下,产品的平均提取率可达70.92%,表明响应面法用于对大黄鱼鱼卵磷脂提取条件的优化是可行的。工艺放大试验结果表明,酶水解法的提取率比溶剂法和超声波法分别提高了22.02%和9.6%,说明酶水解法是提高大黄鱼鱼卵磷脂提取率的较好方法。
关键词：
大黄鱼 鱼卵 磷脂 酶水解法 提取
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