- 年份
- 2024(8748)
- 2023(12890)
- 2022(11267)
- 2021(10952)
- 2020(9120)
- 2019(21309)
- 2018(21202)
- 2017(40312)
- 2016(22249)
- 2015(25275)
- 2014(24952)
- 2013(25017)
- 2012(23055)
- 2011(20920)
- 2010(20495)
- 2009(18719)
- 2008(17930)
- 2007(15285)
- 2006(13220)
- 2005(11619)
- 学科
- 济(87511)
- 经济(87400)
- 管理(57203)
- 业(53723)
- 企(43349)
- 企业(43349)
- 方法(40444)
- 数学(35578)
- 数学方法(35217)
- 中国(25216)
- 农(22841)
- 学(20878)
- 财(19839)
- 贸(18279)
- 贸易(18268)
- 地方(18117)
- 业经(17983)
- 易(17772)
- 农业(15199)
- 制(14854)
- 和(14096)
- 环境(14057)
- 融(13056)
- 金融(13054)
- 银(13046)
- 银行(12996)
- 理论(12916)
- 行(12486)
- 技术(12469)
- 务(12058)
- 机构
- 大学(313449)
- 学院(308579)
- 济(125237)
- 经济(122748)
- 管理(119561)
- 研究(111448)
- 理学(103923)
- 理学院(102689)
- 管理学(100877)
- 管理学院(100326)
- 中国(82564)
- 科学(70873)
- 京(67625)
- 所(56908)
- 财(54038)
- 农(53575)
- 研究所(52604)
- 中心(49088)
- 业大(48309)
- 财经(44226)
- 北京(43311)
- 江(42668)
- 农业(42223)
- 范(41250)
- 师范(40859)
- 院(40571)
- 经(40550)
- 经济学(38275)
- 州(37333)
- 经济学院(34567)
- 基金
- 项目(218280)
- 科学(170328)
- 基金(159198)
- 研究(156312)
- 家(140483)
- 国家(139390)
- 科学基金(118037)
- 社会(97588)
- 社会科(92383)
- 社会科学(92360)
- 基金项目(84647)
- 省(82201)
- 自然(78155)
- 自然科(76296)
- 自然科学(76274)
- 自然科学基金(74875)
- 划(71024)
- 教育(70835)
- 资助(66656)
- 编号(62121)
- 成果(51010)
- 重点(48993)
- 部(48677)
- 发(46373)
- 创(44645)
- 课题(43043)
- 科研(42132)
- 创新(41812)
- 教育部(41221)
- 大学(40824)
- 期刊
- 济(131130)
- 经济(131130)
- 研究(90895)
- 中国(58363)
- 学报(54426)
- 科学(49325)
- 农(48425)
- 管理(42789)
- 大学(40328)
- 学学(38008)
- 财(37827)
- 农业(34185)
- 教育(32773)
- 融(25019)
- 金融(25019)
- 技术(24410)
- 经济研究(21697)
- 财经(20887)
- 业经(19385)
- 业(18829)
- 经(17816)
- 问题(17419)
- 图书(16976)
- 科技(15553)
- 贸(15126)
- 理论(14808)
- 版(14774)
- 资源(14613)
- 世界(14552)
- 技术经济(13863)
共检索到447581条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
魏红艳 孙德俊 李云 孙卉 蔡文启
应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBIA 130 4的gfp::gus基因上游 ,替代椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S) ,得到重组质粒pTA2、pC2 6和pC45 .通过Agroinfiltration法 ,将含pTA2、pC2 6、pC45和pCAMBIA 130 4的根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtu ...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁芳 吕茂民 马玉媛 吴健敏 田克恭 毕丁仁 章金刚
【目的】构建以缺失不同功能区的猪内源性反转录病毒(PERV)5′非编码区(5′UTR)为启动子的萤光素酶表达载体,分析5′UTR的转录调控规律。【方法】将含有不同功能域的PERV的UTR克隆至萤光素酶表达载体上,转染瞬时表达细胞Cos-7,检测萤光素酶的表达。【结果】缺失R区的5′UTR显示出很强的启动子活性,U3重复区序列缺失的5′UTR启动子活性显著下降。UTR显示出较之LTR强的启动子活性。缺失整个U3区的UTR比仅缺失U3重复区的UTR启动子活性强。【结论】在R区有转录因子的结合位点可引起转录活性下降;U3重复区序列表现出增强子的活性。在5′UTR的下游序列中,包括引物结合区(PBS)...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李文彬 于晓玲 闫羿辰 孙建波
[目的]为了深入研究香蕉长链非编码RNA Malnc2310的功能和特性，对Malnc2310的启动子顺式作用元件、病原菌响应模式及结合因子进行了初步的研究。[方法]将Malnc2310全长启动子P1(1 625 bp)及从5′端到3′端序列互补的启动子片段P2(400 bp)、P3(800 bp)和P4(425 bp)转入拟南芥，研究其在高盐和尖孢镰刀菌粗毒素胁迫下的响应模式；以Malnc2310启动子P1为诱饵，利用酵母单杂交技术筛选获得与该启动子结合的转录因子，并确定启动子的核心功能区。[结果]Malnc2310的启动子包含多个与光照、病原菌、激素响应相关的顺式作用元件；所有启动子片段在尖孢镰刀菌粗毒素处理的GUS活性比高盐处理后更高，且P3驱动下GUS的活性与全长P1驱动下的活性相似；通过酵母单杂文库筛选到128个潜在的结合因子序列，其中双C2H2结构的锌指蛋白ZFP-WIP2经点对点酵母单杂交验证可与P1和P3互相结合。[结论]Malnc2310的启动子对尖孢镰刀菌粗毒素比对高盐处理更敏感，筛选到1个锌指蛋白ZFP-WIP2可与启动子核心功能区(425～1 225 bp)结合。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
阮小蕾 李海辉 李华平
采用PCR的方法分别克隆了香蕉束顶病毒(BBTV)广东分离物NS株系和NSP株系的附加组分,将之命名为BT-NS和BT-NSP。序列分析发现,2个附加组分基因全长均为1 094 nt,其核苷酸的同源率为97.3%,编码氨基酸的同源率为98.4%;与BBTV台湾分离物附加组分S1、S2和越南分离物附加组分S3相比,BT-NS/NSP与S1的氨基酸序列相似率最高,与S2的相似率最低。每一附加组分的ORF均含有推导的与脱氧核苷酸结合的基序,具有潜在的复制酶活性。通过对BBTV编码复制酶基因组分的进化树分析发现,BT-NS/NSP与BBTV台湾附加组分S1的亲缘关系最近,与广东分离物NSP株系DNA组...
关键词：
香蕉束顶病毒 附加组分 序列分析
[期刊] 中国流通经济
[作者]
陈耀庭 戴俊玉
调查香蕉从蕉农到消费者过程中收购、批发、零售等环节发生的成本和利润分配可以发现,"农户+蕉农自销型流动摊点+消费者"模式流通成本最低,"农户+第三方物流+超市+消费者"模式流通利润最高,而规模大小、流通环节多寡、流动摊点管制等是影响流通成本非常重要的几个因素,其中流通过程中的专用资产投入是提升流通利润的关键。为更好地降低流通成本,提高流通利润,在生产环节,应当借助专业合作社帮助农户扩大生产规模,从而有效降低单位生产成本;在中间环节,应当扶持第三方物流加大专用资产投入,从而提升香蕉品质,拉长香蕉保鲜时间,进而提高议价能力,以便择机进入市场,避免价格波动;在销售环节,应当重点扶持超市扩大生鲜果蔬销...
关键词：
流通模式 流通成本 流通利润
[期刊] 水产学报
[作者]
王靖雯 吴苗苗 李莉娟 顾泽茂 袁军法
为建立基于Nrf2、HO-1启动子活性的抗病毒药物筛选方法，实验以黑头软口鲦上皮细胞系（FHM）为材料，构建Nrf2、HO-1启动子重组质粒，利用双荧光素酶报告系统检测不同浓度（0、3.1、6.3、12.5、25.0、50.0 μg/mL）的白藜芦醇、水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素对启动子活性的影响，并利用鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus，SVCV）和蛙虹彩病毒（rana grylio iridovirus，RGV）验证阳性药物的抗病毒效果。结果显示，Nrf2、HO-1启动子序列中存在FOX家族、IRF家族等多种转录因子的结合位点，并分别存在1个和3个与甲基化相关的CpG岛。双荧光素酶报告实验显示，水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素可激活Nrf2、HO-1启动子。药物浓度梯度实验表明，6.3 μg/mL的姜黄素和穿心莲内酯可显著上调Nrf2和HO-1的启动子活性。病毒感染后的细胞病变效应、病毒的复制及病毒滴度结果均证明姜黄素和穿心莲内酯可抑制SVCV和RGV的感染。综上，本实验建立的pGL3-Nrf2和pGL3-HO-1启动子报告质粒，可用于抗水生病毒药物的筛选，也为Nrf2、HO-1转录调控机制的研究提供了工具。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨玉艾 孙永科 华进联 窦忠英
为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用PmeI线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经PacI酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测...
[期刊] 华北农学报
[作者]
冷春玲 李文利
以柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)DNA为模板,运用PCR技术钓取ApNPV(IE-1)基因的启动子片段,并将其克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。将测序的2.7 kb DNA片段用EcoRⅠ和BglⅡ双酶切,回收3'端1.6 kb的DNA片段。将该片段插入到pGFP-N2表达载体上构建以其作为启动子的IE-1/pGFP-N2重组质粒。重组质粒经脂质体介导转染Hela细胞,结果可见绿色荧光蛋白(GFP)在细胞中的表达,证明钓取的IE-1基因启动子片段具有启动子的转录活性。
[期刊] 林业科学
[作者]
杨桂燕 郭宇聪 张凤娇 赵震 高彩球
［目的］ＶＨＡｃ基因（Ｖ－ＡＴＰＡｓｅ ｃ亚基）是Ｖ－ＡＴＰＡｓｅ的重要亚基，能响应盐、重金属等胁迫，过表达刚毛柽柳ＴＨＶＨＡｃ１基因的酵母能提高抗ｃｄｃｌ＿２耐ＮＡｃｌ能力。本研究拟通过分离ＴＨＶＨＡｃ１基因不同长度启动子片段并对其胁迫后活性进行分析，以进一步探讨ＴＨＶＨＡｃ１基因响应ｃｄｃｌ＿２和ＮＡｃｌ胁迫的机制。［方法］根据ＴＨＶＨＡｃ１基因启动子中含有的ｄｏｆ顺式作用元件的分布，将ＴＨＶＨＡｃ１基因上游启动子分为２０５ ｂＰ（－１—－２０５），５０４ ｂＰ（－１—－５０４）和７８１ ｂＰ（－１—－７８１）３个不同长度片段。将这些不同长度启动子片段分别替换Ｐ ｃＡＭｂＩＡ１３０１载体上．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邹芝英 王茂元 李大宇 杨弘
采用高保真PCR方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)基因组DNA中分离出β-actin基因启动子序列,将β-actin基因启动子插入pN1-EGFP构建成真核细胞表达载体pEGFP-β-actin,并通过脂质体转染法将重组载体导入人胚肾上皮细胞HEK 293T,荧光显微镜下观察外源基因EGFP在细胞中的表达情况。结果显示:β-actin基因启动子调控区具有典型的启动子特征,含有TATA Box、CArG和CCAAT Box 3个重要的顺式作用元件。荧光显微镜下观察到50%～60%的HEK 293T细胞中发出绿色荧光,显示尼罗罗非鱼β-actin基因启动子能够驱动EGF...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
董向向 王矢乔 关宇涵 张志宏 李贺
草莓果实成熟的早晚,直接影响果农的收益。课题组前期研究发现,草莓ARF4基因能够调控草莓开花时间。启动子是基因转录的开关,其转录活性影响着基因表达的强弱。克隆ARF4基因启动子并分析其转录活性,对进一步明确ARF4基因的功能具有重要意义。根据草莓基因组信息设计特异引物,克隆草莓ARF4基因启动子。使用Plant CARE在线软件,预测其序列上的顺式作用元件。将ARF4启动子进行分段缺失克隆,利用农杆菌介导的果实注射法及GUS组织染色,确定GUS基因表达的强弱。通过农杆菌介导的叶盘转化法,获得转proARF4::GUS基因草莓植株,利用GUS组织染色法分析启动子的组织表达特异性。对转基因草莓植株进行非生物胁迫处理,通过qRT-PCR方法确定影响ARF4基因启动子转录活性的因素。结果表明:在ARF4基因启动子序列上,除了存在基本的核心元件外,还包含一些光响应、胁迫响应、厌氧诱导及激素响应等作用元件。GUS组织染色结果显示,随着启动子序列长度逐渐变短,GUS基因表达变弱。在转proARF4::GUS基因草莓植株叶柄、嫩叶及新茎中GUS表达水平较高,且在嫩叶中表达量最高。在非生物胁迫处理下,IAA和GA可使GUS基因表达显著提高。这些结果提供了影响ARF4基因表达的相关因素,为调控草莓开花时间奠定了基础。
关键词：
草莓 ARF4 启动子 转录活性分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周荣艳 魏彦辉 锡建中 李兰会 陈辉 高立杰 张振红
【目的】分析山羊ＰＲＮＰ基因启动子活性区域，旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子，为阐明山羊ＰＲＮＰ基因的表达调控提供理论依据，并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路；【方法】以山羊ＰＲＮＰ基因序列（ＧｅＮ ＢａＮｋ登录号：ｅＵ８７０８９０）为模板，设计特异性引物，扩增山羊ＰＲＮＰ基因５′侧翼区片段，并将扩增片段克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体，鉴定为阳性的克隆进行测序；利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测；利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段１１个，并克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体后，鉴定为阳性的质粒和ＰＧＬ３－ＢａＳｉｃ载体分别用限制性内切酶ＭＬ．．．
关键词：
山羊 PRNP基因 启动子 转录活性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王亚娴 杨藩 王华岩
【目的】Ｓａｌｌ４是一种锌指结构转录因子，对建立和维持动物多能干细胞具有重要意义。为探索猪Ｓａｌｌ４的表达和转录调控机制，克隆了猪Ｓａｌｌ４启动子，对其进行了功能验证和核心调控区的筛选。【方法】从猪基因组中克隆获得２．１ ｋｂ Ｓａｌｌ４启动子片段，并构建相应的报告载体；将报告载体ｐ Ｅ２．１转染不同种类的细胞，进行细胞特异性表达检测；采用实时荧光定量ｐＣＲ方法，检测Ｓａｌｌ４在猪不同组织和细胞中的表达变化；通过生物信息学方法，分析Ｓａｌｌ４启动子上各种关键顺式作用元件和潜在的转录结合位点；将多能转录因子ＯＣｔ４、ＳＯｘ２、ｋｌｆ４、ＭｙＣ、ＥＳＲＲａ／ｂ和ＳＭａｄ与Ｓａｌｌ４启动子共转染２９．．．
关键词：
猪 Sall4 启动子 多能性 转录调控
[期刊] 华北农学报
[作者]
汪亮 李忠秋 唐晓东 张海峰 刘娣 张冬杰
ATP6V0A4基因编码V-ATP酶的一个亚基,与H~+转运相关,是遗传性远端肾小管性酸中毒的致病基因。在前期研究中发现,民猪在遭受冷应激后其背脂中ATP6V0A4基因的转录水平发生了显著上升(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
盛晔 闵丹 李轶女 张志芳 朱越雄 朱江
【目的】研究新发现的斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ株基因ORF13的结构与功能。【方法】根据SpltMNPV Ⅱ ORF13基因序列设计引物,经PCR扩增并克隆ORF13。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建ORF13片段的原核表达载体,表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明,起始密码子上游-84bp处发现杆状病毒晚期启动子基序ATAAG,没有发现明显的早期启动子基序。启动子活性分析和转录时相分析证实,ORF13是一个早期和晚期都表达的基因,在病毒感染2 h就开始转录,18 h达到最高峰,24 h以后转录水平有所下降,但基本维持恒定。pET-28a-O...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
