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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李玉祥 谢涟琪 李惠君
以爪哇香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｊａｖａｎｉｃｕｓ）和香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）为亲本进行种间原生质体融合。以营养缺陷型和单亲原生质体灭活为融合子筛选标记，ＰＥＧ－Ｃａ２＋系统促融合，在ＩＲＭＭ培养基上检出融合子。经荧光核染色、拮抗试验、同工酶谱分析等检验融合子，通过固体栽培试验选出可以结实的融合子Ｆ０４菌株。试验结果显示，Ｆ０４具有生长快、易结实的特性
关键词：
香菇 爪哇香菇 原生质体融合
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
史玉英 李惠君
把经过纯化的香菇单核营养缺陷型(?)原生质体,与碘代乙酰胺灭活的野牛菇 L_(81-39)_4,原生质体用PEG 进行融合,在双层再生培养基上培养,挑得融合子5株:F_4,F_6,F_(11),F_(17),F_(18)。用荧光染色法,对亲本及融合子菌丝的单核和双核进行详细观察和鉴定.融合子 F_4,F_6,F_(18) 出菇表明,菇形偏近 L_(81-39),但菌柄较短,菌盖较大且略厚;F_(17)的菇色,肉质程度偏向于 L_(52);F_(11)出菇多,但个体小,色淡,菌盖薄。酯酶同工酶测定结果表明:F_(11),F_(17)都有双亲所具有的9条谱带中的7条,R_f值为:0.683,0.7...
关键词：
原生质体 融合 香菇
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
田娟 李玉祥 李惠君
采用１５ｇ／Ｌ溶壁酶处理获得了香菇单核体Ｌ３８－Ｓ０３、Ｌ５２－ａｄｅ和金针菇单核体ＦＶ１１－Ｓ２３的原生质体。１ｇ／Ｌ焦磷酸二乙酯灭活的Ｌ３８－Ｓ０３和腺嘌呤缺陷型Ｌ５２－ａｄｅ的原生质分别与８ｇ／Ｌ碘代乙酰胺灭活的ＦＶ１１－Ｓ２３的原生质体进行ＰＥＧ－Ｃａ２＋促融合，在ＲＣＭ、ＩＲＭＭ培养基上再生，得到１４２个融合子。其中１７个菌株能结实出菇。筛选出Ｆ０１、Ｆ０２和Ｆ０３３个融合子菌株，并从培养特征、显微结构、拮抗反应、同工酶谱分析和出菇特征等方面与亲本菌株Ｌ３８、Ｌ５２及ＦＶ１１进行了比较，结果显示融合子既有双亲菌株的特征，又有别于双亲菌株。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王建华 赵学慧
原生质体制备与融合是重要的细胞工程技术,有利于实现远缘遗传物质的直接交换,促进遗传资源创新。本试验用Olympus BHS显微镜观察了曲霉原生质体融合全过程;采用淀粉-麸皮-硫铵培养基、淀粉-麸皮-豆粕培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基(PDA)等研究曲霉融合子及亲株产淀粉酶能力的特点;比较分析了亲株和融合子产淀粉酶性能与温度稳定性;比较研究了曲霉亲株和融合子淀粉酶的淀粉-聚丙烯酰胺非变性垂直平板凝胶电泳特征和各菌株可溶性蛋白质的淀粉-聚丙烯酰胺凝胶电泳特征。结果表明:曲霉原生质体融合过程很快,整个融合过程在5 min之内完成;融合子及亲株产淀粉酶随培养基、培养时间不同而变化;F05融合子在淀粉-麸...
关键词：
曲霉 原生质体融合 淀粉酶 电泳
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉强
根据增加棉花基因库多样性的迫切需要,棉花改良计划正在转向于多种分子育种技术的应用和资源的利用。丰富的棉花野生种(Gossypiumspp.)是栽培棉遗传改良重要的种质资源和更新资源,并成为宝贵的遗传资源库,野生棉研究利用对栽培棉的遗传改良有着重大的现实和理论意义及潜在的应用
[期刊] 西南农业学报
[作者]
雷开荣 U.Ryschka E.Klocke
用酶法分离甘蓝下胚轴原生质体和萝卜叶肉原生质体, 对供体原生质体(萝卜) 进行融合前单因素(酶EcoRI) 或双因素复合处理(酶EcoRI+ UV0.035-0.105J/cm 2), 用PEG法诱导甘蓝与萝卜属间非对称性原生质体融合。结果表明,(1)不同处理方法对植株再生率有明显影响,对称性融合植株再生率为8.5% ,非对称性融合植株再生率低3个百分点; 单因素处理植株再生率达11% , 双因素复合处理植株再生率只有2.3% 。在双因素复合处理中,尽管各处理间植株再生率有显著差异, 但紫外线强度与植株再生率间无明显的规律变化; (2) 双因素复合处理再生植株具有较低的相对DNA含量,通道数为...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
龙建友 唐世荣 吴文君
【目的】对No.24菌株及其诱变株Ms-24菌株的原生质体的制备、融合、再生条件及融合子的生物活性进行了研究,探索了秦岭霉素的产量提高与融合条件的关系。【方法】采用荧光染色技术对融合子进行了标记,秦岭霉素含量的测定采用了HPLC法进行。【结果】融合后得到的3株高产秦岭霉素的融合子即为pf77,pf126和pf138菌株,其发酵产物的杀菌活性比原始No.24菌株分别提高了43.48%,60.87%和65.22%。HPLC检测发现,融合子pf77,pf126,pf138菌株发酵产物中秦岭霉素的含量与No.24菌株相比分别提高了36.59%,74.39%和91.46%。【结论】进行原生质体再生时,添...
关键词：
秦岭霉素 原生质体融合 融合子
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
皇甫张娟 顾彪 宗兆锋
利用重寄生链霉菌F46与生防放线菌SC1和SC11进行原生质体融合,以原生质体的形成率和再生率为指标,研究了Gly、蔗糖、酶及其质量浓度对原生质体融合的影响,并确定了最佳的酶解时间及灭活时间。结果表明,3个菌株培养液中加入Gly和蔗糖的质量浓度以0．5和30 g／mL为宜。对菌株SC1和SC11,分别用10 mg／mL和15 mg／mL,溶菌酶酶解60 min和100 min较合适;对菌株F46,以蜗牛酶(10 mg／mL)和溶菌酶(10 mg／mL)体积比为1:1的混合酶液酶解75 min为宜。菌株F46在55℃条件下热灭活45 min,菌株SC1和SC11则需在55℃条件下热灭活15 mi...
关键词：
重寄生链霉菌 放线菌 原生质体融合
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
甘志波 赵学慧
用PEG促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉(Aspergillus niger)AMS-11的原生质体与细胞分裂中期的啤酒酵母(Sacchuromyces cerevisiae)RasseⅫ原生质体融合,在选择性培养基上获得了能利用羧甲纤维素作唯一碳源的杂种酵母菌株FASS_1及FASC_1,经测定其DNA量、蛋白质电泳谱带、生长曲线和碳源同化等项目,它们均具有双亲菌株的特征性状。
关键词：
黑曲霉 啤酒酵母 原生质体融合
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王建华 赵学慧
４种蛋白酶对黑曲霉、米曲霉原生质体稳定性、再生及融合的研究结果表明：蛋白酶用于原生质体灭活前或后保温均显著降低原生质体数量、同时提高原生质体再生率及灭活原生质体融合指数。蛋白酶安全、无毒可以替代常规促融合剂聚乙二醇
关键词：
曲霉 蛋白酶 原生质体 再生 融合
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
谢航 陈婕 邱宏端
为选育耐高温耐盐红螺菌用于其粉状制剂研制,以降解水产养殖水体亚硝基氮功能达90%以上的耐盐红螺菌与能在60～70℃下生长的嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株,通过正交试验探讨2种菌株的原生质体融合条件。分别对融合子进行温度、生长盐度和净化水质等功能测定,检出性能较优的融合子,同时采用电镜、细胞色素吸收光谱等方法,将融合子优良株与2种亲株进行比较鉴别。实验结果表明,2种菌株原生质体融合的最优条件为温度37℃,作用时间3 h,聚乙二醇(PEG)浓度为40%。在该优化条件下原生质体融合率为1.536%,筛选获得3株能在30～50℃良好生长的融合子(a、b、c)。融合子生长耐受温度较耐盐红螺菌亲株提高66%,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张修军 周启
报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。
[期刊] 华北农学报
[作者]
惠志明 刘凡 简元才 申书兴 赵泓
甘蓝型油菜Ogu CMS系幼叶原生质体经剂量分别为0.025 0,0.075 0,0.315 0,0.468 0和0.960 0 J/cm2的紫外线辐照后,与花椰菜下胚轴原生质体通过PEG法诱导融合,其中0.025 0~0.468 0 J/cm2获得再生植株68株,0.960 0 J/cm2辐射剂量下没有获得再生株。通过根尖染色体计数、流式细胞仪倍性鉴定、同工酶酶谱分析、RAPD及Ogu CMS线粒体基因orf138 STS(Sequence Tagged Site)标记引物扩增等方法对再生株进行了鉴定。结果表明,其中32株为杂种植株。同时也发现,紫外线辐照剂量的增加对供体染色体的丢失程度影响...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
尹良芬
鉴于有性世代形成能高的稻瘟病菌菌株有限,稻瘟病菌间的杂交组合难于获得,从而很难对一些重要基因,如无毒基因,抗药性基因等进行遗传分析及深入研究。本研究利用原生质体融合技术获得梨孢菌的杂合子,从而评价该体系用于遗传研究的可行性。首先,利用转基因技术获得稻瘟病菌Y93-164a-1跟蟋蟀草病菌SA98-4的抗药性转化子,然后将两个菌的稳定转化子的原生质体进行融合,之后进行连续5次的继代培养,最后进行3次单孢分离来挑选稳定的融合子。结果表明,利用原生质体融合技术在两个不同致病型的梨孢菌之间能获得稳定的融合子,初步表明利用原生质体融合技术组建梨孢菌的融合子群体用于遗传分析在技术上是可行的。
关键词：
梨孢属 稻瘟病菌 原生质体融合 遗传分析
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡兴奎 柳俊 谢从华
以马铃薯栽培种“中薯2号”的无性系3#、8#和野生种Solanum chacoense叶肉原生质体为融合试材,优化马铃薯高效融合的电融合参数。研究表明,在交变电场(AC)100 V/cm、AC作用时间20 s、直流脉冲电压(DC)1 100 V/cm、DC脉冲时间60 μs、脉冲数1次时,双核融合率可达40％以上。融合产物经过4-5个月的培养获得再生植株。对首先再生的15个株系通过RAPD标记检测,证明均为体细胞杂种。所用引物C-01能够同时扩增出杂种植株中双单倍体亲本11 00 bp和670 bp的特征带以及野生种S.chacoense亲本510 bp的特征带。
关键词：
马铃薯 电融合 体细胞杂种 RAPD
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