- 年份
- 2024(3749)
- 2023(5482)
- 2022(4592)
- 2021(4241)
- 2020(3702)
- 2019(8323)
- 2018(8214)
- 2017(15298)
- 2016(8793)
- 2015(9503)
- 2014(9546)
- 2013(9330)
- 2012(8910)
- 2011(8027)
- 2010(8228)
- 2009(7442)
- 2008(7846)
- 2007(7108)
- 2006(6106)
- 2005(5483)
- 学科
- 济(32172)
- 经济(32131)
- 管理(22124)
- 业(21583)
- 方法(18156)
- 企(17613)
- 企业(17613)
- 数学(15761)
- 数学方法(15355)
- 学(11404)
- 财(8728)
- 农(7682)
- 中国(7063)
- 理论(6424)
- 务(6048)
- 财务(6025)
- 财务管理(6008)
- 制(5978)
- 业经(5971)
- 企业财务(5746)
- 银(5645)
- 银行(5615)
- 融(5488)
- 金融(5485)
- 技术(5347)
- 行(5291)
- 农业(5005)
- 贸(4877)
- 贸易(4876)
- 和(4796)
- 机构
- 大学(132474)
- 学院(130290)
- 研究(48463)
- 济(45085)
- 经济(43950)
- 管理(43856)
- 理学(38165)
- 理学院(37597)
- 管理学(36270)
- 管理学院(36040)
- 科学(35913)
- 中国(35041)
- 农(32238)
- 京(29629)
- 所(27423)
- 农业(26261)
- 业大(25811)
- 研究所(25589)
- 财(21850)
- 中心(21520)
- 江(20245)
- 北京(18101)
- 财经(17900)
- 院(17448)
- 范(17285)
- 农业大学(17259)
- 师范(16973)
- 省(16548)
- 经(16251)
- 州(16088)
- 基金
- 项目(92069)
- 科学(70426)
- 基金(67048)
- 家(62669)
- 国家(62221)
- 研究(57866)
- 科学基金(51166)
- 自然(36828)
- 自然科(36065)
- 自然科学(36050)
- 省(35740)
- 自然科学基金(35402)
- 社会(34903)
- 基金项目(34558)
- 社会科(33203)
- 社会科学(33190)
- 划(31326)
- 资助(29444)
- 教育(27134)
- 重点(21662)
- 编号(21119)
- 计划(20322)
- 部(19706)
- 科技(18612)
- 科研(18573)
- 创(18444)
- 发(18269)
- 成果(17981)
- 创新(17469)
- 大学(16132)
共检索到186846条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
罗家琴 王加启 卜登攀 李旦 王丽 魏宏阳 周凌云
【目的】建立鉴定饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR方法,进一步完善现有的动物源性饲料检测方法。【方法】根据牛、羊、猪、鸡、鱼以及马的mtDNA的16SrRNA基因序列选用了一对通用引物,初步检测出含有动物源性成分的样品;然后针对牛、羊、猪、鸡4种动物线粒体mtDNA中的保守序列,分别选用了4对特异性引物对检测出的样品进行PCR扩增,扩增的目的片段大小分别为271、274、149和266bp。【结果】通过利用通用引物、优化PCR反应体系及其条件,建立了从未知样品中简便而快速的检测出是否含有动物源性成分的PCR方法;利用所选的针对不同动物的特异性引物,建立了鉴定牛、羊、猪、鸡这4种动物源性成分的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
金红 赵昕 吴疆 韦东胜 刘梦颖 王永
针对宠物饲料、奶牛饲料和浓缩饲料等不同类型饲料的特点,采取相应的不同DNA提取方法,通过对组成饲料的所有作物成分相应内源基因的检测,确定待测饲料样品的作物组成成分,并建立了各类饲料中转基因成分的检测技术。有针对性地论述了饲料检测中可能出现的问题、技术难点和关键技术,为实际检验工作提供可借鉴的建议。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
翟晓虎 李翎旭 陈小竹 蒋怀德 贺卫华 姚大伟
【目的】建立一种快速、准确的肉中猪源性成分定量检测方法。【方法】首先从GenBank数据库中筛选猪特异性的微卫星DNA，根据微卫星DNA核酸序列设计引物，对常见10种动物基因组DNA进行PCR扩增，通过有无扩增产物判断筛选的微卫星DNA对猪源性成分的特异性。然后根据微卫星DNA核酸序列，设计特异性引物和探针，建立猪源性成分Real-time PCR检测方法，采用双标准曲线分别对猪源性成分和总动物源性成分进行定量，计算猪源性成分的百分含量。【结果】筛选到猪特异性微卫星DNA(Accession EF172428)，根据其序列设计的引物SEQ-sus2-F/R只能从猪基因组DNA中扩增出目的条带，其他动物的基因组均无目的条带扩增。建立的Real-time PCR检测方法灵敏度为0.02 ng/25μL反应体系。该方法能够准确检测出混合DNA样品中猪源性成分和混合肉样品中猪源性成分，百分误差分别约为1.32%和1.06%—7.12%。【结论】本研究利用Real-time PCR技术建立的定量猪源性成分的检测方法可以用来检测猪源性成分在混合样品中的百分含量。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴虎虎 彭麟 季辉 刘晓晓 滕佩 江善祥
[目的]本文旨在建立检测饲料中氢溴酸常山酮含量的固相萃取-反相高效液相色谱法。[方法]在鸡饲料中添加一定浓度氢溴酸常山酮,经100 g·L(-1)碳酸钠溶液碱化后用乙酸乙酯提取饲料中氢溴酸常山酮,0.125 mol·L(-1)乙酸铵缓冲液萃取,HLB柱净化后供HPLC测定。流动相为体积比5∶3∶12的乙腈、0.25 mol·L(-1)乙酸铵缓冲液、水溶液(冰乙酸调pH4.3),检测波长243 nm。[结果]该方法对鸡饲料中氢溴酸常山酮的检测限为0.05μg·g(-1),定量限为0.2μg·g(-1)。在0
关键词：
氢溴酸常山酮 鸡饲料 反相高效液相色谱法
[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖淑敏 李国清 李韦华 周荣琼 杨建伟
【目的】建立牛源环孢子虫套式PCR检测方法并初步应用于临床检测。【方法】根据牛源环孢子虫18S rDNA序列,设计1对保守引物和1对特异性引物,建立牛源环孢子虫套式PCR检测方法。通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验。并对168份临床样品进行了检测。【结果】该套式PCR能特异性地扩增出牛源环孢子虫基因组DNA中相应片段,与艾美耳球虫、隐孢子虫、贾第虫等10种相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到2.85×10-2fg的阳性参照DNA;对临床样品检测结果表明PCR技术检查阳性者显微镜检查都为阳性。【结论】建立的套式PCR方法具有高度的特异性和敏感性,有较好的临...
关键词：
环孢子虫 奶牛 套式PCR 检测
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
童敬 饶钦雄 郭平 李海燕 丁双阳
建立了猪饲料中螺旋霉素、替米考星和泰乐菌素3种大环内酯类药物的HPCE检测方法。确定了该过程中缓冲溶液的pH、缓冲溶液类型及离子强度等电泳条件,同时对毛细管长度、内径及分离电压等仪器参数进行优化,得到分离的最优条件:在毛细管有效长度50 cm、内径75μm,分离电压25 kV,40 mmol/L磷酸氢二钠-20mmol/L柠檬酸(pH2.5)缓冲液条件下,3种药物在15 min内得到完全分离。3种药物在10~100μg/g范围内线性良好,R>0.9993;饲料中螺旋霉素检测限为3.0μg/g,替米考星检测限为5.0μg/g,泰乐菌素检测限为8.0μg/g,添加回收率在74.5%~87.4%,方...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张小敏 周斌 何丹妮 庞然 赵津 陈溥言
根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间...
关键词：
猪源Mx1 实时荧光定量PCR 标准曲线
[期刊] 水产学报
[作者]
何浩斌 叶嘉文 梁冠宇 黄燕华 周萌 梁日深
鱼粉是水产饲料重要原料之一，其昂贵的价格导致市场上存在严重的掺杂、掺假现象，尼罗罗非鱼是其中常见掺杂原料。为快速准确检测出鱼粉中尼罗罗非鱼源性成分，本研究以尼罗罗非鱼特异性基因片段为基础，设计荧光定量PCR特异性引物，建立鱼粉尼罗罗非鱼源性成分荧光定量PCR检测方法。利用不同鱼类及虾蟹类组织DNA验证引物特异性，以尼罗罗非鱼DNA梯度稀释及纯鱼粉中掺不同含量尼罗罗非鱼粉进行灵敏度测试，最后针对市售8种鱼粉样品进行检测，确定方法的适用性和检测能力。结果显示，该方法对尼罗罗非鱼源性成分检测具有较高的特异性，在其他鱼类及虾蟹类样品中均无扩增信号。方法灵敏度高，可以检出浓度0.1000 ng/μL的尼罗罗非鱼源DNA，在自制混合鱼粉样品中可检出含量为0.0100%的尼罗罗非鱼成分。研究表明，利用该方法对8种市售鱼粉样品进行检测，其中有4种鱼粉检出一定含量的尼罗罗非鱼成分。本研究可以针对鱼粉中尼罗罗非鱼源性成分进行快速有效的检测。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张帆帆 宋德平 周信荣 黄冬艳 李安琪 彭棋 陈燕君 吴琼 何后军 唐玉新
【目的】猪Ｄｅｌｔａ冠状病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｄｅｌｔａｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，ＰＤｃｏｖ）是近年来新发现的可引起猪只，特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒，其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率，是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现ＰＤｃｏｖ ｒｔ－Ｐｃｒ检测方法，并调查当前江西腹泻猪群中ＰＤｃｏｖ的感染情况。【方法】通过对Ｇｅｎ Ｂａｎｋ数据库中ＰＤｃｏｖ全基因组序列的比对分析，找出保守序列，用Ｐｒｉｍｅｒ ３．０在线软件设计１对扩增ＰＤｃｏｖ核衣壳（ｎ）蛋白基因片段的特异性引物，基于该引物建立ＰＤｃｏｖ ｒｔ－Ｐｃｒ检测方法；用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品，挑选阳性扩增产物进行克．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
魏德宝 鲍恩东
为了建立检测饲料中阿维拉霉素的标准方法,建立了测定饲料中阿维拉霉素的固相萃取-反相高效液相色谱法。饲料经乙腈提取,硅胶固相萃取小柱富集净化后,以乙腈-0.01 mol.L-1乙酸铵溶液(体积比43∶57)为流动相,在C18色谱柱上,紫外检测器(波长295 nm)下分离检测。该方法有很好的线性关系,在添加浓度范围内,阿维拉霉素A和B的平均回收率分别为82.6%~96.6%和81.4%~99.7%,相对标准偏差分别为2.00%~3.65%和2.85%~6.54%。经验证该方法灵敏度高,准确性和重现性良好。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王蕾 鲍恩东
为检测饲料中硝基呋喃类药物,建立呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮和呋喃他酮4种硝基呋喃类药物检测的高效液相色谱法。采用乙腈提取饲料中4种呋喃类药物,将提取液浓缩后用上样液溶解残渣,经过HLB固相萃取柱净化后,以乙腈-乙酸铵溶液为流动相,反相色谱柱分离,在Waters Sunfire C18色谱柱上,紫外检测器365 nm波长下分离检测,外标法定量。结果表明:4种硝基呋喃类药物的标准曲线回归系数均在0.999 7以上,线性范围在0.2~30.0μg/mL;不同添加浓度的加标回收率≥70%~98%,回收率标准偏差≤10%;呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮和呋喃它酮的检测限依次为0.020、0.020、0....
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
屈小玲 毕丁仁
用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ，ＭＧ）种内菌株的特异性ＤＮＡ片段，并用该法对人工感染鸡及野外鸡群进行了ＭＧ感染的分子流行病学调查。结果表明，通过基因扩增及电泳，仅ＭＧ出现特异性扩增条带，最低能检出１８ｐｇＭＧＤＮＡ，说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染６０只鸡，３ｄ后即可用ＰＣＲ查出ＭＧ阳性，６ｄ后１００％为阳性，对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。ＰＣＲ对野外鸡群的ＭＧ检出率为１０．５％～３５％，平均为２０％（１６／７９），与血清学检查结果基本一致；从ＰＣＲ阳性鸡中，有６１．５％（６／１３）能分离到ＭＧ。这说明ＰＣＲ在ＭＧ感染的分...
关键词：
鸡毒霉形体 多聚酶链反应 基因扩增
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱小甫 张志 李晓成 陈德坤 吴旭锦
为了优化猪瘟病毒的RT-nested PCR检测方法,对福建省猪瘟流行情况进行了调查。根据GenBank上发表的猪瘟病毒Shimen株基因序列设计并合成了2对引物,优化了猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的RT-nested PCR检测方法,并对所优化的RT-nested PCR特异性进行了检验。结果表明,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为1×10-7ng/mL,只有CSFV扩增出了272 bp的目的条带,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)阳...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
曹胜波 陈焕春 肖少波 何启盖 徐引弟 刘军发
根据国外已发表的猪环状病毒 2型 (PCV 2 )的全基因组序列 ,设计一对 2型特异性引物 ,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD 18 T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中 ,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,证明扩增出了PCV 2的目的片段。将测序结果与GenBank收录的PCV 2序列进行比较 ,发现同源性均在90 %以上。用该PCR方法在 43份可疑病料中检测到了 12份PCV 2阳性病料 ,表明该病在我国已有流行
关键词：
猪环状病毒2型 检测方法 聚合酶链反应
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
付苗苗 刘梅英 牛智有
收集403个配合饲料样本,利用高光谱成像仪对样本进行图像采集,获取配合饲料样本的可见/近红外光谱信息。采用光谱杠杆值和学生残差法剔除异常样本,利用CG法、SPXY法和K-S法按3∶1的比例进行样本集划分,采用均值中心化、标准化、一阶导数、二阶导数、正交信号校正、多元散射校正和标准正态变量变换、去趋势变换,以及其组合方法对光谱进行预处理;采用相关系数法获取特征波段,建立基于高光谱图像技术的配合饲料中粗蛋白、粗灰分、水分、总磷、钙含量的偏最小二乘法(PLS)定量分析模型。通过验证,粗蛋白验证集决定系数R2V为
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
