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[期刊] 华北农学报  [作者] 胡小利  马庆  包海柱  范瑞  孙希利  马蓉  
为建立食用向日葵分子标记反应体系,以食用向日葵四叶期叶片为DNA模板提取材料,采用单因素试验和正交试验设计,对SSR-PCR反应体系中的6因素(10×PCR Buffer、Mg2+、d NTPs、引物、Taq DNA聚合酶和DNA模板)在5水平上进行正交优化试验,并比较了不同浓度Mg2+、Taq DNA聚合酶、模板DNA对扩增效果的影响,结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响为Mg2+>Taq DNA聚合酶(引物)>DNA模板>10×PCR Buffer>d NTPs。最终建立食用向日葵SSR-PCR最佳反应体系为:在总体系为20μL的SSR-PCR反应体系中包括10×PCR Buffer ...
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 闫丽君  王红霞  黄芳芳  何长青  梁艳  徐刚标  
以伯乐树叶片为材料,利用单因素试验及正交试验对影响伯乐树SSR-PCR扩增的主要因素进行了优化。结果表明,伯乐树SSR-PCR最佳反应体系(20μL)为:Mg2+1.25 mmol/L,d NTP 0.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.5U,引物0.3μmol/L,DNA 90 ng。这为利用SSR标记进一步开展伯乐树种群遗传多样性研究奠定了前期实验基础。
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 李显煌  高丽云  王娟  张贵良  唐军荣  叶鹏  雷瀚  辛培尧  
以云南金花茶为试验材料,利用试剂盒法、SDS法及CTAB法3种方法提取其DNA,并对3种方法的提取结果进行比较;经初筛合成云南金花茶EST-SSR引物,并对影响SSR-PCR体系的Mg~(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物及模板DNA这5个因素进行L_(16)(45~)正交实验,以期建立较为稳定的云南金花茶SSR-PCR体系。试验结果表明:试剂盒法提取得到的云南金花茶DNA质量最好且符合SSR分子标记试验。各因素对PCR扩增效果的影响程度为:Mg2+>引物> Taq DNA聚合酶> dNTP>模板DNA。试验最终确定的金花茶SSR-PCR最佳反应体系(20μL)为:2.0μL Taq Buffer、1.5μL Mg2+(25 mmol/L)、0.3μL dNTP(10 mmol/L)、0.2μL Taq DNA聚合酶(5 U/μL)、前后引物各0.4μL(10μmol/L)、0.5μL模板DNA(50 ng/μL)、14.7μL ddH_2O。建立和优化云南金花茶SSR反应体系,可为云南金花茶不同种群的遗传变异研究提供基础。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 任鹏鸿  韩睿  马胜超  李莉  
本研究通过单因子优化试验和L16(45)正交试验设计的方法,对菊芋SSR-PCR反应体系进行优化。结果表明,20μl最佳反应体系:10×PCR扩增缓冲液,2.5 mmol/L Mg2+,0.20 mmol/L dNTPs,0.30μmol/L正反引物,0.2 U Taq DNA聚合酶和50 ng模板DNA。利用该优化体系,从100个SSR引物组合中筛选出12个清晰且多态性高的引物组合对3个品种的菊芋DNA序列进行扩增,得到58个位点,其中多态性位点39个,多态率为67.2%;建立3个菊芋品种分子识别卡,用2对引物组合的6个多态性位点即可将其分开。本研究为后续应用SSR分子标记技术对菊芋进行种质...
[期刊] 林业科学研究  [作者] 王芳  廖柏勇  李培  刘明骞  李俊成  吴琳瑛  林玮  陈晓阳  
[目的]借鉴以往楝属文献报道的SSR引物,筛选高度多态性、稳定性高、重复性好的苦楝SSR引物,为苦楝遗传图谱构建、QTL定位和分子标记辅助选择育种等研究领域应用奠定基础。[方法]本研究采用单因素法和正交试验设计进行SSR-PCR反应体系优化,并利用该体系以8个不同种源的苦楝基因组DNA为模板,从135对候选SSR引物中进行引物筛选。[结果]苦楝SSR-PCR最优反应体系为:1.0μL 50 Ng·μL~(-1)模板DNA,1.2μL 100μmoL·L~(-1)引物,1.0μL 10 mmoL·L~(-1)D NTPS,0.8μL 25 mmoL·L~(-1)mg~(2+),0.15μL 5 ...
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 黄芳芳  何长青  闫丽君  汪灵丹  徐刚标  
在单因素试验基础上,采用正交试验优化影响观光木SSR-PCR扩增的5种主要影响因素,获得最佳反应体系(10μL)为:Mg2+1.0 mmol,d NTP 0.20 mmol,引物0.25μmol,Taq DNA聚合酶0.75 U,模板DNA 60ng。利用优化SSR-PCR扩增体系,从12对引物中筛选出5对多态性高、重复性好的引物。这为进一步开展观光木种群遗传多样性研究奠定了前期实验基础。
[期刊] 华北农学报  [作者] 白锦荣  潘会堂  张启翔  
采用L16(54)正交设计和二因素完全随机试验,分析了月季SSR-PCR反应体系的主要成分TaqDNA聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度d、NTP浓度以及引物浓度对扩增结果的影响,建立了适合月季的SSR反应体系。研究结果表明:在20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶宜加入1.5 U,样本最适宜浓度为30~40 ng,Mg2+的最适浓度为1~1.5 mmol/L,dNTP最适浓度为0.2 mmol/L,单引物的最适浓度均为1μmol/L。用建成的反应体系对19对引物筛选,对12个月季品种扩增,3%的琼脂糖凝胶电泳检测,品种间DNA谱带多态性丰富,证明该体系稳定可靠。
[期刊] 华北农学报  [作者] 苏辉  李志刚  宋书宏  
以大豆(Glycine maxL.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量。以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大豆SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响。大豆SSR-PCR优化反应体系为:2.0μL10×PCRBuffer,30 ng模板DNA,150μmol/LdNTP,0.4μmol/LSSR引物,1.5 UTaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L Mg2+,加ddH2O至终体积20.0μL...
[期刊] 华北农学报  [作者] 贾新平  孙晓波  梁丽建  邓衍明  苏家乐  周建涛  
为了建立适合绣球的SSR-PCR反应体系,采用正交设计L25(56)对影响SSR-PCR反应体系的5个主要因素(Mg2+、d NTPS、引物、dNA模板和TAq聚合酶)在5个水平上进行优化,筛选出每个因素的最佳水平,建立适合绣球的SSR-PCR反应体系。结果表明,20μL的SSR-PCR反应体系中,dNA模板用量为60 Ng,Mg2+浓度为1.5 MMoL/L,d NTPS浓度为0.3 MMoL/L,引物浓度为0.4μMoL/L,TAq聚合酶用量为0.8 U。扩增程序为:94℃预变性5 MiN;94℃变性1 MiN,最佳温度退火40 S,72℃1 MiN,33个循环;72℃延伸10 MiN,4...
[期刊] 华北农学报  [作者] 李素萍  安玉麟  聂惠  高淑青  
文章研究了食用向日葵杂交种、常规种在不同生长时期施用不同硼肥对产量因素的影响。结果表明:不同硼肥处理对食用向日葵产量、千粒重、结实率增效明显;不同硼肥处理对食用向日葵常规种的产量、千粒重、结实率增效更显著;不同硼肥处理对食用向日葵产量的增加是通过增加其千粒重、结实率来实现的。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 段永红  渠云芳  王长彪  毕红园  王玉庆  孙毅  杨武德  
为有效利用SSR-PCR技术对药用植物苦参进行遗传多样性分析,采用正交设计L16(45)对影响苦参SSRPCR体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,PCR结果用DPS数据处理软件分析,筛选出各因素的最佳水平,建立适宜苦参SSR-PCR的反应体系和扩增程序,并选用内蒙古苦参对该体系进行稳定性验证。结果表明:在10μL的苦参SSR-PCR体系中,模板DNA的用量为20.0ng,Taq DNA聚合酶的用量为0.2~0.6U,Mg2+的浓度为2.5mmol/L,dNTPs浓度为0.1mmol/L,引物的浓度为0.6μmol/L。扩增程序为:94℃预变性3...
[期刊] 北京林业大学学报  [作者] 张冬梅  杨娅  沈熙环  茹广欣  
油松是我国特有的重要乡土针叶树种,开发合适的油松PCR-SSR引物并建立优化的反应体系,是开展油松天然群体和种子园人工群体遗传研究的基础.该研究以油松总DNA为材料,分析了Taq聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度以及引物浓度对PCR-SSR扩增结果的影响,筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物12对,建立了稳定的、可重复的油松PCR-SSR最佳反应体系及PCR扩增参数.研究结果表明:在15μL SSR-PCR反应体系中,样本最适宜浓度为30 ng,Mg2+的最适浓度为0.25 mmol/L,dNTP最适浓度为0.2 mmol/L,单引物的最适浓度均为250 nmol/L;Taq聚...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 安玉麟  李素萍  聂惠  李巧枝  于海峰  
利用自育的75个食用向日葵杂交组合以及引进的8个食葵杂交种对食用向日葵进行籽粒产量、生育期、形态的10个性状与4个品质性状进行相关分析.结果表明:食用向日葵的产量、籽仁率、结实率、单盘粒数、生育期与粗脂肪含量均呈极显著正相关;与粗蛋白质呈极显著或显著负相关;与油酸、亚油酸相关不显著.千粒重与粗脂肪和亚油酸含量呈极显著负相关,与粗蛋白质和油酸呈极显著正相关.生育期与粗脂肪和亚油酸含量呈极显著正相关,与粗蛋白质和油酸呈极显著负相关.
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 李素萍  安玉麟  聂惠  李巧枝  于海峰  
食用向日葵杂交种的产量与双亲一般配合力和特殊配合力呈显著正相关,并主要受基因的非加性效应与特殊配合力控制;千粒重以加性方差和一般配合力方差为主;籽仁率、单盘粒数2个性状的加性效应与非加性效应同等重要;结实率主要受基因的加性效应和一般配合力控制.
[期刊] 林业科学研究  [作者] 湛欣  鲁好君  赵帅  陈晓阳  邓小梅  
[目的]本研究旨在建立红椿SSR-PCR最佳反应体系,并筛选适于红椿SSR分析的高多态性引物。[方法]通过L16(45)正交试验设计,确立红椿SSR-PCR最佳反应体系;利用优化后的体系对来自楝科植物的135对SSR引物,在6个不同的红椿居群中进行扩增,筛出能有效扩增的引物并进一步筛选出适于红椿的高多态性引物。[结果](1)10μL基于荧光d UTP的SSR-PCR体系中包含:10×bUffeR 1.0μL,Taq酶(5 U·μL-1)0.1μL,Mg CL2(25MMoL·L-1)0.8μL,d NTP(200 MMoL·L-1)0.025μL,荧光d UTP(1 NMoL·μL-1)0.0...
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