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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
Jun Sangcheol Kim Kyunghoon Choi Hyoung T Kim Kyujoong
白腐担子菌Trametes versicolor在加入0.05％Tween 80,(NH4)2-tatrate和80 mg/kg Mn-SO4的Kirks培养基上能够高活性地分泌Mn-过氧化物酶。在该培养基中培养10 d,活性达到最高。通过DEAE-Sepharose CL-6B,SP-Sepharose和离子交换柱分离纯化,获得2种类型的Mn-过氧化物酶同工酶,并对这2种酶的酶动力学,N-端的氨基酸序列及其编码基因的核酸序列做了研究。
关键词：
白腐菌 Mn-过氧化物酶 同工酶
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
边银丙 周茂繁
聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明，湿地松健康嫩茎组织过氧化物酶同工酶酶谱中有４条酶带，刺伤组织较健康组织新增加３条酶带。分别用松色二孢菌华中型（ＨＺ型）代表菌株ＪＨ－１和华南型（ＨＮ型）代表菌株ＢＹ－２接种被刺伤的湿地松嫩茎，接种弱致病力的菌株ＢＹ－２后，感病组织的过氧化物酶同工酶酶谱中比刺伤对照新增加１条酶带；接种强致病力的菌株ＪＨ－１后，感病组织的过氧化物酶同工酶酶谱中较刺伤对照新增加３条酶带。２个供试菌株在侵染寄主后导致寄主的过氧化物酶同工酶酶谱上出现差异的表现，与它们在形态特征、产孢条件和致病力等方面存在显著差异的表现相同。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈聪 曹福祥 龙绛雪 董旭杰
研究培养基组分及培养条件对木质层孔菌产锰过氧化物酶(MnP)的影响.对培养条件进行优化,采用正交设计对培养基组分进行优化.结果表明,pH5,温度34℃,装液量150mL,葡萄糖与蛋白胨质量浓度之比20∶1,Mn2+1.5mmol/L,ABTS0.5mmol/L,转速160r/min时,最高酶活力可达1042.76U/L.
关键词：
木质层孔菌 锰过氧化物酶 培养条件
[期刊] 林业科学
[作者]
张玉龙 池玉杰 闫洪波
采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基用4种不同的底物处理方式,对白腐菌偏肿栓菌在28℃下进行静止培养,得到不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测在470,420,310nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为其木质素降解酶系统锰过氧化物酶(MnP)、漆酶和木质素过氧化物酶(LiP)产生的依据。结果表明:偏肿栓菌可产生MnP(必须在Mn2+存在的条件下)和漆酶(不依赖于Mn2+),但不产生LiP;在培养液内添加底物木屑和2,6-DMP后可显著提高2种酶的分泌量...
[期刊] 林业科学
[作者]
张玉龙 池玉杰 冯连荣
【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条带切割,采用Nano液相色谱-电喷雾串联质谱法联用(Nano LC-ESI-MS/MS)多肽测序技术对蛋白氨基酸序列进行测定。利用该SDS-PAGE图谱,建立蛋白分子量与迁移率的标准直线,从标准直线上求出MnP纯酶样品的表观分子量;参照酶活测定方法检
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨金水 袁红莉 刘庆洪 阮芳勇 王贺祥 陈文新
木素过氧化物酶是降解木素类物质的主要酶类。使用硫酸铵盐析、DEAE 纤维素和CM 纤维素离子交换层析、SephadexG 10 0凝胶过滤等分离与纯化技术 ,从斜卧青霉菌P6 (PenicilliumdocumbensP6 )发酵培养 7d的液体培养液中分离纯化得到电泳纯的木素过氧化物酶 ,经SDS PAGE鉴定为单一条带 ,表观相对分子质量为 4 6 3× 10 3 。以藜芦醇为底物测定了该酶的Km,vmax,作用的 pH和温度范围 ,结果为Km0 5 6 5mmol·L-1,vmax0 0 88mmol·(L·min) -1,pH 4～ 9,温度 2 5～ 5 5℃。N末端序列为VL...
关键词：
斜卧青霉菌 木素过氧化物酶 分离纯化
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
周德明 冯友仁 梁帅
利用低能N+注入,对产木质素过氧化物酶(Mnp)和锰过氧化物酶(Lip)活力均较高的菌株N1023进行诱变,研究了不同能量和不同剂量N+离子诱变后菌株的存活率与突变率、突变菌株的产酶活力及遗传稳定性.结果表明:不同能量和不同N+离子剂量注入对菌株有显著影响,诱变菌株N1023j产Mnp和Lip双酶活力分别提高了27.29%和22.58%,同时诱变菌株N1023j有很好的遗传稳定性.
[期刊] 林业科学
[作者]
张玉龙 池玉杰 冯连荣
【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶(MnP)的分级纯化,以期得到L.gibbosa MnP的纯品和进行后续酶学性质研究。【方法】在对L.gibbosa所产MnPs进行优化培养、获得大量MnPs粗酶液的基础上,通过硫酸铵(NH4)2SO4分级盐析、聚乙二醇(PEG)沉淀进行粗酶液浓缩、在起始缓冲液中进行透析、经DEAE-琼脂糖CL-6B离子交换柱层析进行梯度洗脱和葡聚糖G-75凝胶过滤柱层析等方法对MnPs粗酶液进行纯化,并对分级纯化方法进行优化,对纯化浓缩后的纯酶
[期刊] 中国农业科学
[作者]
秦国政 田世平 刘海波 徐勇
Pichiamembranefaciens能有效抑制桃果实采后软腐病。笔者观测和比较接种拮抗酵母菌P .mem branefaciens和软腐病菌Rhizopusstolonifer对采后桃果实多酚氧化酶 (PPO)、过氧化物酶 (POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的诱导情况。试验结果表明 ,桃果实接种P .membranefaciens +R .stolonifer 2 4h后 ,PPO和PAL活性开始升高 ,并在整个试验过程中一直保持较高的水平。只接种R .stolonifer也能诱导桃果实PPO和PAL活性的增加 ,但效果不如接种拮抗菌 +病原菌的好。然而 ,接种拮抗菌 +病原菌和只...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
程杰 吕子豪 林同
为阐明硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因的表达模式并研究温度胁迫对其表达的影响,从黄野螟(Heortia vitessoides)成虫转录组文库中筛选获得黄野螟硫氧还蛋白过氧化物酶Tpx基因全长cDNA,命名为HvTpx(GenBank:MF521978)。序列分析显示,该序列开放阅读框长度为588bp,共编码195个氨基酸。HvTpx属于典型2-Cys类Tpx。HvTpx的氨基酸序列与棉铃虫(Helicoverpa armigera)同源性最高,为87%,与其他昆虫的同源性在75%以上。黄野螟与棉铃虫处在系
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑晓鹰 黄为平
用聚丙烯酰胺均匀胶和等电聚焦电泳技术，分析了甜椒种子及种苗的过氧化物同功酶谱和种子水溶蛋白图谱。在过氧化物酶谱带的两个位点ＰＲＸ－１和ＰＲＸ－２上，自交系亲本与Ｆ１杂交种有明显的差异。水溶蛋白的一个位点ＰＲＯＴ亲本与Ｆ１有明显差异。供试甜椒组合的过氧化物酶和蛋白的图谱，分别具有这些位点。利用这些鉴别图谱，对甜椒商品种子样品进行的杂交种纯度检验，纯度范围在８％～９９％，与田间检测结果一致。这一电泳检测技术可以有效地用于甜椒杂交种纯度的检验
关键词：
甜椒,同功酶,水溶蛋白,纯度鉴定
[期刊] 林业科学研究
[作者]
尹立伟 池玉杰
为提高猴头菌菌株CB1锰过氧化物酶(MnP)基因的表达产量,采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法,将携带有He-mnp1的重组质粒pLB01/He-mnp1转入到构巢曲霉尿嘧啶尿苷营养缺陷菌株TN02A7的原生质体中,获得了转化子菌株TN02A7-He-mnp1,并在乙醇脱氢酶启动子alcA(p)控制下实现了异源表达。将TN02A7-He-mnp1、TN02A7、构巢曲霉野生型菌株WJA01、猴头菌菌株CB1在相同的木质素环境下进行培养并检测MnP酶活性,结果表明:转化子菌株TN02A7-He-mnp1在0.05 g.L-1血红素的情况下、诱导96 h后酶活性最高为38.31 U.L-...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
梁军 王媛 张星耀
为了从细胞水平上研究过氧化物酶在杨树与溃疡病菌互作过程中的作用、过氧化物酶在细胞器中的定位与活性变化,以及过氧化物酶在杨树与溃疡病菌互作中的机制,该文以抗性不同的毛白杨(高抗种)和北京杨(高感种)为研究材料接种溃疡病菌葡萄座腔菌,利用DAB细胞化学染色技术研究过氧化物酶在细胞中的分布及活性。通过分析酶活性区域的电子密度发现:无论抗病种还是感病种,接种后均发现细胞中有过氧化物酶活性反应;抗病种过氧化物酶活性不仅明显高于该种未接种的对照,也明显高于接种处理后的感病种,并且定位更广泛,在细胞壁、细胞间隙、叶绿体膜、线粒体膜及质膜上均有大量定位;感病种酶反应产物主要分布于细胞壁上,在质膜、局部核膜上有...
[期刊] 林业科学
[作者]
于存 池玉杰
锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,一色齿毛菌MnP最大酶活为18.4 U·L-1。在酶活检测的基础上,为了深入研究MnP降解木质素的功能,根据已知的MnP基因保守区序列设计引物,以一色齿毛菌菌株CB1的基因组DNA为模板,采用染色体步移技术,克隆到该菌株一个编码MnP1蛋白的全长DNA基因(GenBank登录号JQ782578.1),命名为Cu-mn...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
孔令营 郭道森 赵博光 李荣贵
本文研究了松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A的培养液经硫酸铵分级沉淀后,各组分中木质素过氧化物酶(LiP)的活性及各组分对黑松悬浮细胞的毒性;还对GcM5-1A菌株胞外LiP进行了初步纯化,并对纯化后的酶学性质进行了研究。结果表明:LiP活性主要出现在50%～70%沉淀组分中;0～20%沉淀组分和50%～70%沉淀组分对黑松悬浮细胞的毒性很强;GcM5-1A菌株培养液经硫酸铵分级沉淀以及DEAE-SepharoseFF两步纯化后,其LiP的比活力从0.81U/mg提高到21.30U/mg;其最适温度为35℃,最适pH为4.0;在15～35℃、pH6.0～9.0范围内,酶活力保持相对稳定;...
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