【目的】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)自2018年首次暴发于我国沈阳后,迅速扩散至全国,对我国养猪业造成了沉重打击。研究针对其病原非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)建立一种快速核酸检测技术,为及时发现、准确处理ASF疫情提供一种快速诊断方法。【方法】针对ASFV保守的B646L(p72)基因,设计并筛选合适的引物、探针组合,利用基于重组酶-聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)的实时荧光RPA方法,对反应体系、反应条件、样品处理步骤等进行优化;利用质控品,对检测方法的特异性和灵敏度进行评价。对1 009份临床样品进行检测,并利用OIE推荐的实时荧光定量PCR方法(qPCR)和病毒分离,进一步验证该方法的检测结果。【结果】筛选得到一套合适的引物、探针,建立了针对ASFV p72基因的实时荧光RPA检测方法,优化后的反应体系总体积为25μL,在实时荧光定量PCR仪器上,最适反应条件为39℃10 s,39℃20 s,40个循环,扩增反应时间约20 min;室温裂解法可取代传统核酸提取方法作为本检测的样品处理方法;使用优化后的条件,可在30 min内实现样品处理、核酸扩增和结果判定的整个过程,特异性评价结果显示本方法对猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、圆环病毒1型/2型(PCV1/2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)样品扩增结果均为阴性;敏感性评价结果显示本方法对基因I型、II型、IX型ASFV的模拟样品均可检出,对II型ASFV阳性模拟血样品可检测至10拷贝/μL,对已知阳性临床组织样品可检至1:103.0稀释度,与OIE推荐的实时荧光定量PCR(qPCR)方法的检测灵敏度一致。通过对1 009份临床样品进行检测,实时荧光RPA诊断方法检出17份阳性,其结果与qPCR方法完全一致;病毒分离获得17份阳性培养物。【结论】建立的实时荧光RPA核酸检测方法操作简便,耗时短,具有较高的灵敏度和特异性,为临床提供了一种新型、简单、特异、快速诊断非洲猪瘟的方法。

1999年 1月至 3月武汉市某种猪场发生了以高热、高死亡率为特征的传染病。哺乳仔猪的发病率为6 6 .7% ,死亡率为 5 8.3 % ;断奶仔猪的发病率为 5 3.6 % ,死亡率为 12 .3 % ,造成巨大经济损失。经流行病学调查 ,病理变化观察和免疫荧光抗体检查 ,确诊该种猪场所暴发的传染病为猪瘟。此外 ,用间接血凝试验对 2 1日龄超前免疫仔猪的血清中猪瘟抗体水平进行了检测 ,结果表明仔猪的免疫合格率为 78.9%

【目的】建立一种能够实际应用于猪瘟兔化弱毒疫苗中猪瘟病毒含量检测的荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中登录号为AF091507的猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒株的全长基因组序列,在其5′非编码区设计2对特异性引物(标准品引物、定量引物)和1条探针(qPCR-P),通过标准品引物进行RT-PCR扩增及T7 RNA聚合酶体外转录构建标准品RNA。对荧光定量PCR方法的各项条件进行优化,建立猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR检测方法,并采用该法对成品猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量进行检测。【结果】成功构建了体外转录的标准品RNA,建立了检测猪瘟兔化弱毒的荧光定量PCR方法。该方法检测灵敏度可达10拷...

猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度接触性传染性疾病,传染性强、死亡率高,是严重危害养猪业的重大传染病,是世界动物卫生组织(OIE)规定的必需报告的疫病,我国将其列为一类动物疫病,也是我国政府计划消灭的重大动物传染病之一。CSF呈全球分布,目前流行于大部分亚洲(包括中国)、中美洲和南美洲、部分东欧国家、加勒比和非洲国家,偶尔散发于部分中欧和西欧国家。根据OIE截止到2018年5月的报告,已有35个国家、巴

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染家猪和野猪引起的一种烈性传染病,急性型临床上表现为高热、沉郁、厌食、皮肤发绀、各脏器出血,发病率和病死率可高达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病,是我国重点防范的外来动物疫病之一。ASF在撒哈拉以南的非洲地区、意大利撒丁岛、高加索地区以及俄罗斯和东欧部分国家流行,给疫区国家的养猪业造成巨大的经济损失,并严重冲击畜产品的国际贸易。2018年8月,ASF首次传入我国,随后迅速大范围蔓延,对我国养猪业构成重大威胁,防控形势异常严峻。随着经济全球化发展,ASF呈全球流行态势,持续传入我国的风险极高。鉴于目前无商业化的ASF疫苗,亟需研发可实现现场快速检测的早期诊断技术,做到对疫情早发现、早控制。由于ASFV具有庞大的基因组结构和复杂的免疫逃逸机制,使得研制有效的疫苗十分困难。目前研制的灭活疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗不能提供免疫保护或仅能提供部分保护,而减毒活疫苗和基因缺失疫苗可以诱导完全的同源保护和部分的交叉保护。未来需要深入解析病毒毒力相关基因和免疫保护性相关抗原,并着力研制基因缺失疫苗和弱毒疫苗,解决其安全性、稳定性和免疫效力等难题。本文就ASF的流行病学、诊断技术和疫苗研发等方面的最新研究进展及防控面临的挑战进行综述,并提出防控策略及建议,以期为我国ASF的防控提供参考。

面临非洲猪瘟疫情、环保等新形势挑战,中国生猪产业的生产、消费结构、猪肉贸易、价格周期等发生深刻变革。能繁母猪产能快速下降,生猪供给偏紧特征明显,生猪价格快速进入新一轮上涨周期,猪肉进口预期创新高。近期国务院以及农业农村部等部委相继出台稳定生猪生产促进转型升级的政策措施,以支持生猪生产发展,保障猪肉供给,猪价涨幅将逐步回落。预计生猪生产恢复支持政策在今年第四季度将会逐渐发挥效力,生猪产能将会止跌回升,2020年下半年生猪供给将会逐步恢复,猪价将会回归合理水平,同时生猪产业的生物安全水平、规模化水平、屠宰产能和产销区合作机制也将会进一步优化。

西班牙是历史上为数不多成功根除非洲猪瘟的国家之一,其根除非洲猪瘟的经验被国际社会视为经典。本文全面研究了西班牙的经验做法,提出完善中国非洲猪瘟疫情防控政策措施的建议。

1非洲猪瘟的早期预警1.1非洲猪瘟的症状非洲猪瘟(ASF)是由一种猪DNA囊膜病毒(直径200nm)引起,首先通过钝缘软蜱传播的疾病(节肢动物媒介病毒,非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属)。存在钝缘软蜱的国家要采取相应的防治措施。非洲猪瘟病毒基因组可以编码一些调控宿主免疫应答的蛋白,这些免疫逃避机制使疫苗研发变得复杂。病毒不易突变,因此遗传稳定性高。有效的消毒剂应该能够破坏病毒的脂质囊膜(如以甲酸或过氧乙酸为基础的商品化消毒剂,甚至氢氧化钠溶

该文设计了非洲猪瘟影响猪肉价格动态的大数据分析综合数学实验项目。首先运用网络爬虫和文本挖掘技术建立了非洲猪瘟舆情语料库，综合运用LDA主题模型、机器学习情感分类算法和TF-IDF权重算法构建了非洲猪瘟舆情指数，建立了猪肉价格与舆情指数的VAR模型，并对其进行了Grange因果关系检验、脉冲响应分析和方差分解分析。结果表明，非洲猪瘟疫情对猪肉价格存在冲击和影响，是猪肉价格波动的Grange原因，且不同时期对猪肉价格的冲击大小存在差异。该实验设计涵盖了文本大数据的挖掘技术、Python编程、VAR模型的构建与解释、动物疫情、生猪养殖和农业经济学等，有益于提高学生在大数据环境下综合运用多种分析工具和统计知识解决实际问题的能力。

【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,...

非洲猪瘟疫情对中国生猪产业和社会经济发展造成了巨大打击。非洲猪瘟疫病的预防和控制成为当前中国亟待解决的重要问题。养殖户是非洲猪瘟防控的重要主体，其防控行为在整个非洲猪瘟防控体系中发挥着重要作用。本文基于扑杀补助政策下养殖户对非洲猪瘟防控行为的决策机理分析，利用黑龙江、贵州和陕西三个省513份生猪养殖户的问卷调查数据，实证分析了扑杀补助对养殖户非洲猪瘟疫情上报意愿和预防投入的影响，比较了不同补助形式的政策效果，通过数值模拟分析找出激励相容的扑杀补助水平。研究结果表明：扑杀补助水平的提高有利于激励养殖户上报疫情，但同时也降低养殖户的预防投入；相比于“按大小”补助形式，激励不相容现象在“一刀切”补助形式下更为明显。政府的监管和养殖户自身对非洲猪瘟疫病的认知能改善养殖户的防控行为。在一个确定的非洲猪瘟防控环境(一定的政府监查力度、风险偏好等)下，略高于偷售收益的补助水平能够增强养殖户的疫情上报意愿的同时又不会降低他们的预防投入水平。本文的研究结论为政府改进和优化非洲猪瘟扑杀补助政策提供决策参考。

非洲猪瘟疫情对中国生猪产业和社会经济发展造成了巨大打击。非洲猪瘟疫病的预防和控制成为当前中国亟待解决的重要问题。养殖户是非洲猪瘟防控的重要主体,其防控行为在整个非洲猪瘟防控体系中发挥着重要作用。本文基于扑杀补助政策下养殖户对非洲猪瘟防控行为的决策机理分析,利用黑龙江、贵州和陕西三个省513份生猪养殖户的问卷调查数据,实证分析了扑杀补助对养殖户非洲猪瘟疫情上报意愿和预防投入的影响,比较了不同补助形式的政策效果,通过数值模拟分析找出激励相容的扑杀补助水平。研究结果表明:扑杀补助水平的提高有利于激励养殖户上报疫情,但同时也降低养殖户的预防投入;相比于“按大小”补助形式,激励不相容现象在“一刀切”补助形式下更为明显。政府的监管和养殖户自身对非洲猪瘟疫病的认知能改善养殖户的防控行为。在一个确定的非洲猪瘟防控环境(一定的政府监查力度、风险偏好等)下,略高于偷售收益的补助水平能够增强养殖户的疫情上报意愿的同时又不会降低他们的预防投入水平。本文的研究结论为政府改进和优化非洲猪瘟扑杀补助政策提供决策依据。

【目的】建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具。【方法】在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探针,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件,进行特异性、灵敏度和临床样本符合检验。【结果】该方法在100～10-7范围内线性相关系数为0.998,检测极限达5.3×10-2pg病毒核酸;对24个质控样本检测结果显示,该方法能检测除猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)以外的猪瘟流野毒株,其它猪相关致病病原检测阴性;对122份疑似猪瘟样本检测的结果与本实验室建立的RT-nP...

【背景】非洲猪瘟（ASF）于2018年8月在中国首次出现，对养猪业造成了巨大危害，损失惨重。目前尚无安全有效的疫苗用来预防ASF，于是建立快速特异的检测方法对于防控ASF提供了有效的手段。【目的】制备非洲猪瘟病毒（ASFV）特异性单克隆抗体，建立ASF快速特异性的检测方法。为ASF的检测和防控提供借鉴技术手段。【方法】构建表达载体pET-28a-P30，通过原核表达系统获得ASFV P30重组蛋白，以纯化的P30蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经过细胞融合和细胞亚克隆制备出ASFV P30蛋白特异性杂交瘤细胞株；对P30蛋白进行截短表达，利用Western Blot和间接酶联免疫吸附试验（iELISA）鉴定单克隆抗体所对应的抗原表位；并利用制备的单克隆抗体建立非洲猪瘟阻断ELISA抗体检测方法。【结果】通过双酶切和PCR验证，结果显示构建出重组载体pET-28a-P30，经测序其序列未发生突变；IPTG诱导后，P30重组蛋白主要表达在包涵体中，分子量约为33 kD。纯化的P30蛋白与弗氏佐剂1:1混合免疫小鼠，3次免疫后，小鼠血清效价达到1:102 400，说明表达的蛋白具有良好的免疫原性。经细胞融合和亚克隆，获得8株P30蛋白特异性杂交瘤细胞，Western Blot和间接免疫荧光试验（IFA）检测获得的8株单抗均具有良好的反应性。叠加试验显示8株单克隆抗体均针对相同的抗原位点；截短表达P30蛋白不同片段，选取制备的2-12B单克隆抗体与不同的截短P30蛋白反应，显示单克隆抗体的抗原表位区为187—194aa。利用2-12B单克隆抗体并经过条件优化，成功建立了ASF阻断ELISA抗体检测方法，检测了190份临床样品，并与商品化非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒进行对比，两方法阳性符合率为90.91%，总符合率为96.32%。【结论】本研究成功获得ASFV P30蛋白，经过iELISA、Western Blot和IFA筛选出反应性良好的特异性单克隆抗体8株，抗原识别表位区为187—194aa。并利用制备的单克隆抗体建立了特异性高，敏感性好的ASFV阻断ELISA抗体检测方法，为ASF的检测及其防控提供了手段和支撑。

根据GenBank上猪GAPDH基因的序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了Real-time PCR方法。以阳性重组质粒为标准品,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点。研究结果为GAPDH作为内参基因用于猪相关基因定量表达分析奠定了基础。