为了解烟草根部内生细菌多样性,采用改进的CTAB法提取烟草根部总DNA,利用细菌16 S rDNA基因通用引物对烟草根总DNA进行16 S rDNA扩增,构建烟草根部内生细菌16 S rDNA克隆文库;挑取具有不同酶切谱型的克隆进行测序、比对并构建16 S rDNA基因系统发育树。构建的烟草根部内生细菌16 S rDNA克隆文库中,155个克隆分属于36个不同的分类单元,Blast结果表明,大部分克隆与已知细菌的16 S rDNA序列相似性较高,分别属于变形菌门(Proteobacteria)的Alpha、Gamma、Beta亚群,放线菌门(Actinobacteria),拟杆菌门(Bacte...

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑菌效果均在66%以上.根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌.

【目的】研究根结线虫生防菌ZK7和IPC菌株在烟草根表及皮层的定殖情况。【方法】利用光学显微镜和扫描电子显微镜观察了生防菌ZK7和IPC菌株在烟草根表和根内的定殖部位、定殖方式、生长和繁殖等。【结果】生防菌ZK7和IPC菌株能以菌丝方式稳定定殖于烟草根表的根冠区、伸长区、根毛区、成熟区等不同部位,而在根内的定殖仅局限于根表皮层较深的细胞组织,不能侵入烟草根部的韧皮部和木质部组织。【结论】生防菌ZK7和IPC菌株与烟草并非病原物与寄主的关系,而更类似于菌根菌或内生菌与植物间的共生关系。

【目的】解析保山植烟土壤罹患烟草青枯病病株根际土壤可培养细菌种群多样性特征，揭示烟草青枯病害发生与根际可培养微生物种群间的关系，为利用微生物功能多样性防控烟草青枯病提供理论支撑。【方法】采集隆阳区和施甸县10个乡（镇）、30个村的30份患病烟株根际土壤样品和30份健康烟株根际土壤样品，利用稀释涂布平板法获得可培养细菌种群，基于Illumina-MiSeq高通量测序结果，分析健康烟株和患病烟株根际土壤可培养细菌种群结构组成和多样性的差异。【结果】健康烟株和患病烟株根际土壤可培养细菌的OTU数量和α多样性指数间差异不显著。与健康烟株相比，在门分类水平上，患病烟株根际Proteobacteria和Bacteroidetes的相对丰度提高，Firmicutes和Actinobacteria的相对丰度降低；在纲分类水平上，γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）和拟杆菌纲（Bacteroidia）的相对丰度提高；杆菌纲（Bacilli）和放线菌纲（Actinobacteria）的相对丰度降低；在属分类水平上，假单胞菌属（Pseudomonas）、无色杆菌属（Achromobacter）和剑菌属（Ensifer）的相对丰度提高；假节杆菌属（Pseudarthrobacter）、赖氨酸芽胞杆菌属（Lysinibacillus）和土壤芽孢杆菌属（Solibacillus）的相对丰度降低。鞘脂单胞菌目（Sphingomonadales）、鞘脂单胞菌科（Sphingomonadaceae）、苯基杆菌属（Phenylobacterium）、假诺卡氏菌目（Pseudonocardiales）和假诺卡氏菌科（Pseudonocardiaceae）是健康烟株根际土壤中富集的细菌种群，而Chitinophaga＿sp＿＿MHS12、Azospirillaceae、Azospirillum和Flavitalea则是患病烟株根际土壤中富集的细菌种群。【结论】保山健康烟株与患病烟株土壤根际可培养细菌群落呈分化趋势，烟草青枯病的发生发展可能与烟株根际细菌种群丰度变化有关，利用有差异的可培养细菌种群可进行烟草青枯病的生物防控。

为了筛选具有生防价值的拮抗烟草青枯雷尔氏菌的内生细菌,从湖南长沙、永州、郴州烟草青枯病发病区的健康烟株采集茎秆,采用稀释平板分离法获得150个内生菌株。抑菌结果表明,21个内生菌株对烟草青枯雷尔氏菌2316菌株有拮抗效果,占总菌株数的14.0%。拮抗菌株中,F1菌株24 h对烟草青枯雷尔氏菌株2316抑菌圈直径达6.5 mm,其抗菌谱研究表明,该菌株对辣椒白绢病菌等5种植物病原真菌和柑橘溃疡病菌等5种病原细菌的生长均有抑制作用。采用形态学、生理生化鉴定及16S rDNA序列系统发育分析,F1菌株为莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。

植物寄生线虫是危害植物的重要病原物,为了筛选到能在烟草体内稳定定殖并且对线虫具有明显杀线虫活性的烟草内生生防细菌,从127株烟草内生细菌中筛选出5株对全齿复活线虫(Panagrellus redivivus)具有明显杀线虫活性的细菌。这5株细菌的发酵液稀释5倍处理线虫12 h后,线虫的死亡率均达90%以上;24 h后,死亡线虫虫体发生消解或渗漏。5株杀线虫细菌发酵液的杀线虫活性在12 h内随处理时间的延长而升高,随着稀释倍数的增加而降低。通过16S r DNA序列同源性分析将这5株杀线虫细菌中的4株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其余1株鉴定为苏云...

【目的】为探明生物炭施用量对烟草旺长期根际土壤真菌种群结构、多样性和生态功能的影响，以期为改善烟草根际土壤微生态环境以及为生物炭在植烟土壤中的应用提供参考。【方法】研究以烟草品种“红花大金元”为试验材料，在施肥减量10%的前提下，设置施用生物炭250 g/株（A_(1)）、300 g/株（A_(2)）和350 g/株（A_(3)）3种处理，并以常规施肥为对照。采用Illumina MiSeq高通量测序技术对不同处理旺长期烟株根际土壤真菌ITS1基因进行测定。【结果】施用生物炭可以改变土壤真菌α多样性和种群结构，在所有土壤样品中A_(3)处理真菌多样性及丰富度最高。门水平上，各处理主要优势菌门为子囊菌门（Ascomycota）、担子菌门（Basidiomycota），子囊菌门相对丰度与生物炭施用量呈负相关，担子菌门相对丰度与生物炭施用量呈正相关。纲水平上，施用生物炭降低了粪壳菌纲（Sordariomycetes）和散囊菌纲（Eurotiomycetes），提高了伞菌纲（Agaricomycetes）和银耳纲（Tremellomycetes）的相对丰度。属水平上，施用生物炭显著降低了青霉菌属（Penicillium）、枝孢瓶霉属（Cladophialophora）、螺旋聚孢霉属（Clonostachys）等真菌相对丰度；提高了镰刀菌属（Fusarium）、Saitozyma、锥盖伞属（Conocybe）、附球菌属（Epicoccum）等真菌相对丰度。FUNGuild真菌功能预测发现，各样本根际土壤真菌的功能类型以腐生营养型与腐生营养型—共生营养型为主。生物炭处理中植物病原相对丰度均低于对照。【结论】施用生物炭350 g/株烟株有效改善了根际土壤真菌群落结构，有利于维持土壤真菌的多样性和丰富度、降低土壤病原真菌的丰度，可为植烟区合理施用生物炭提供技术指导。

采用研磨组织稀释分离法分离烟草植株中的内生细菌,对云南省不同品种、不同种植地区、不同组织器官、不同生长期的烟草内生细菌的菌群密度进行研究。结果表明,烟株的根、茎、叶中均存在大量的内生细菌,烟草内生细菌的分布存在品种差异、生长期差异、组织部位差异。有的内生细菌为常住菌群,有的为暂居菌群。在整个生育期中,以成熟期的内生细菌的数量最多。内生细菌的数量在云烟85、KRK26、K326、红花大金元植株不同器官中的分布规律依次为:根>叶>茎,叶>根>茎,叶>根>茎,根>叶>茎。4个品种烟草生长期总带菌量平均值波动幅度为2.6~4.96 log cfu/g.fw。种植在不同地区的同一烟草品种,内生细菌数量不...

采用Ashby和Nfb无氮培养基从巨菌草成熟期根部分离得到1株具有高效固氮性能的内生固氮菌GN02,其在分离的菌落中所占比例最高,且酶活性较高.经16S rDNA序列鉴定,该菌株与克雷伯氏菌属各菌株同源性关系可达99%,结合其形态、生理生化特征,初步鉴定为变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola).在含氮源的KP培养基中菌株GN02的生长情况明显优于无氮源的Ashby培养基.菌株GN02在KP培养基中的最优培养条件为:温度37.1℃,pH 5.6,蔗糖25.6 g·L~(-1),在此条件下其D_(600 nm)能达到1.48,比优化前提高了22.31%.响应面优化所得到的培养条件重复性好,准确、可靠.

【目的】通过研究根结线虫病患病烟株与健康烟株根际土壤真菌群落结构及多样性，明确烟草根结线虫病发生的微生态机制。【方法】利用Illumina MiSeq高通量测序技术分析根结线虫病患病烟株与健康烟株根际土壤真菌群落结构和土壤养分变化特征。【结果】根际土壤真菌OUTs数健康烟株与病株分别为2120个和1170个，健康烟株土壤真菌OUTs数是病株的1.81倍，特有OTUs数是病株的3.31倍；病株根际土壤的Shannon、ACE和Chao1等指数分别较健康烟株降低了12.16%、52.96%、50.40%。病株根际土壤中桑尼被孢霉（Mortierellasarnyensis）、未分类被孢霉菌属（unclassified＿g＿＿Mortierella）、未分类真菌界（unclassified＿k＿＿Fungi）和未分类青霉菌属（unclassified＿g＿＿Penicillium）的相对丰度较健康烟株分别增加了139.01%、134.83%、203.27%和361.94%，且差异均达到显著水平（P＜0.05）；根际土壤真菌群落组成的PCoA分析结果表明，健康烟株与病株根际土壤真菌物种组成存在明显差异。烤烟根际土壤真菌群落结构与土壤养分变化存在一定相关性，其中土壤pH与土壤常见病原菌镰刀菌属（Fusarium）呈显著负相关，水解氮、有效磷和速效钾等土壤养分与土壤有益微生物被孢霉属（Mortierella）呈极显著正相关。【结论】烟草根结线虫病发生明显降低了真菌OUT丰度，影响烟株根际土壤真菌群落的分布和相对丰度。根际土壤真菌群落与土壤养分互作，共同影响根结线虫病的发生。

【目的】探究桉树非培养内生细菌的激活,为应用内生细菌防治桉树青枯病提供参考。【方法】选用恶臭假单胞杆菌WCS358r、荧光假单胞杆菌WCS374r及其嗜铁素缺失突变体JM218和Mut2,荧光假单胞杆菌WCS417r及其脂多糖缺失突变体WCS417OA-(B4)作为外源激活菌株,在限菌系统中采用尾叶桉无菌实生苗与外源菌共培养方法,外源菌作为激活因子对桉树非培养内生细菌进行激活,使植物体内非培养内生细菌恢复可培养状态,并依次利用抗利福平检测、革兰氏染色反应和分子鉴定方法对分离到的内生细菌进行鉴定。【结果】3种外源菌WCS358r、WCS374r和WCS417r分别与同源同代桉树苗共培养后,WCS358r和WCS417r处理的桉树苗中均获得被激活的细菌。WCS358r可定殖于桉树体内,且在不同部位激活出2株解淀粉芽孢杆菌;WCS417r可在桉树根、茎和叶内定殖,且在根和茎内的定殖量显著高于叶片,但不能激活桉树体内的非培养内生细菌。不同种子桉树苗经WCS358r激活后,分离到的菌株种类存在差异,分别激活出链霉菌、苏云金杆菌、解淀粉芽孢杆菌和其他芽孢杆菌,且WCS358r在根、茎内的定殖量表现为根>茎,在叶部未发现WCS358r定殖。外源菌浓度低于10~2 CFU·mL~(-1)时不能激活桉树苗体内的非培养内生细菌;浓度达到10~9 CFU·mL~(-1)时,桉树苗体内能够分离到被激活的解淀粉芽孢杆菌和芽孢杆菌。3种外源菌的突变体JM218、Mut2和WCS417OA-(B4)均不能定殖于桉树体内,也不能激活桉树体内的非培养内生细菌。【结论】桉树非培养内生细菌的激活受外源菌种类、浓度以及桉树苗种子的影响,外源菌的定殖情况受细菌种类影响较大,外源菌的嗜铁素和脂多糖突变体菌株分别失去野生型菌株原有的激活和定殖能力,嗜铁素是恶臭假单胞杆菌WCS358r激活桉树非培养内生细菌的关键因子,脂多糖是影响荧光假单胞杆菌WCS417r定殖的关键因子。

为了研究云南不同地区烟草内生细菌的多样性及分布特征。在全省4个不同区域采集相同烟草品种33个样品,通过分离培养烟草内生细菌、16S r DNA序列分析获得不同烟区烟草内生细菌的多样性特征。从不同地区烟草叶片中共分离得到内生细菌372株,分别归属于11个属。以Bacillus属为优势菌群,已鉴定出7个种,包括B.pumilus,B.amyloliquefaciens,B.cereus,B.subtilis,B.flexus,B.simplex,B.megaterium;B.pumilus和Pantoea agglomerans类群细菌是4个地区共同的优势菌群;香农多样性指数由大到小依次为文山、大...

【目的】为了对施用生物炭后的烟叶细菌的种类变化进行全面而准确的调查。【方法】以烟叶为研究对象,设置4个处理:处1理为施用生物炭50 g/株(Y4.1);处理2为施用生物炭100 g/株(Y5.1);处理3为施生物炭150 g/株(Y6.1)和处理4不施用生物炭作为对照(Y1.1)。应用Illumina测序平台的Mi Seq高通量测序仪对施用生物炭后烟叶内生细菌的16S r DNA-V4区扩增子进行测序。并应用Qiime和Mothur等软件整理和统计样品序列数目和操作分类单元(OTUs)数量,分析物种的丰度

【目的】旨在研究有机肥和微生物菌剂对烟草根际细菌群落结构的影响，挖掘关键响应菌群，探索烟草根际细菌对不同肥料施加的动态响应机制。【方法】聚焦烟草根际细菌对化学肥料、有机肥料和植物促生微生物(PGPMs)处理下的反应机制。通过Illumina MiSeq高通量测序技术对不同肥料处理下烟草根际细菌16S rRNA基因V3～V4区测序并对操作分类单位（OTU）进行聚类，分析处理间细菌菌群多样性特征，通过机器学习算法建立模型，将根际菌群与施肥处理相关联，同时建立细菌共现网络，解析施肥响应的关键调控菌群。【结果】与化学肥料相比，有机肥和微生物菌剂施用显著增加烟草根际细菌丰度，但降低了细菌分布的均匀性。基于模型挖掘到15个与施肥关联的指示性细菌类群，其中泛菌属（Pantoea）和寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）细菌为微生物菌剂处理下特定菌群结构的指示性细菌。另外，从化肥、有机肥到微生物菌剂处理，根际细菌共现网络结构从松散状态转变为紧密且复杂调控状态，微生物菌剂作用下优势菌群调控增强，与周围菌群联系紧密。【结论】有机肥和微生物菌剂显著改变烟草根际细菌群落结构及根际细菌响应网络，其中泛菌属和寡养单胞菌属等微生物菌剂处理下的指示性细菌具有进一步纯化培养和商业开发价值。

烟草内生菌种类丰富,其在烟草病害生物防治中的作用近年来日益受到关注。本文从烤烟品种K326叶片中分离的内生细菌ZY-9-13菌株对供试的6种植物病原真菌均有拮抗作用,表现出对真菌病原菌的广谱抗菌活性。菌株ZY-9-13发酵液对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cuben)、腐皮镰孢菌(F.solani)、黄瓜枯萎病菌(F.omysporum f.sp.cucumerinum)、小麦赤霉病菌(Gibberella sanbinetti)和立枯丝核病菌(Rhizoctonia ...