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[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 周光宏  韩正康  陈杰  
给8只樱桃谷肉鸭静脉灌注β-肾上腺素能激动剂克伦特罗(clenbuterol简称CL),观察了肉鸭血清尿酸、游离脂肪酸(FFA)和谷丙转氨酶(GPT)活性在CL处理后的变化。试验鸭由翅静脉血瘘管灌注CL0.5mg,对照鸭灌注生理盐水。结果CL使肉鸭血清尿酸水平下降,FFA大幅度提高,灌注后5~48h,尿酸降低了35%~50%,FFA上升了35%~180%;此外,CL提高了血清GPT活性。说明β-肾上腺素能激动剂CL促进了肉鸭机体脂肪的分解,并降低蛋白质的分解
[期刊] 中国水产科学  [作者] 孟雨潇  秦婷  习丙文  陈凯  谢骏  潘良坤  
QseBC是一种普遍存在于细菌的双组分调控系统(two-component regulatory system,TCS),能感应细胞外环境因子信号,在调控细菌毒力中发挥着重要作用。为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)QseC在识别和响应宿主应激激素去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)及其对毒力因子表达的调控作用,本实验首先构建了嗜水气单胞菌NJ-35缺失突变株ΔqseC与互补株qseC+,分析了在NE诱导下野生株和突变株的体外毒力因子表达和鱼体死亡率的变化。结果表明,qseC的缺失抑制了NE对嗜水气单胞菌的促生长作用,降低了NE对生物膜形成能力和溶血活性的增强作用及其对罗非鱼的致死率,而对运动性、脂肪酶与蛋白酶活性没有产生显著影响。本实验明确了嗜水气单胞菌QseC能够响应NE,从而调节菌株的毒力,对全面认识嗜水气单胞菌的致病机理及其与宿主的互作机制有着重要意义,并为探索疾病防控新技术奠定相关理论基础。
[期刊] 水产学报  [作者] 秦婷  习丙文  谢骏  潘良坤  
为探明嗜水气单胞菌QseB在病原菌对鱼体应激激素去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)的识别和响应过程中的作用,实验采用同源重组方法构建了嗜水气单胞菌NJ-35的qseB缺失突变株(ΔqseB),比较分析了NE诱导后,野生株和突变株之间的生物膜形成能力、溶血活性和运动能力等与细菌毒力有关的生物学功能,以及对鱼体致病力的变化。结果显示,qseB的缺失显著降低了NE对嗜水气单胞菌的生长、生物膜形成、溶血活性的促进作用,减弱了嗜水气单胞菌对奥利亚罗非鱼的致死率,而对细菌运动能力和脂肪酶活性无显著影响。研究表明,NE对嗜水气单胞菌NJ-35生物膜形成和溶血活性的增强作用可能依赖于QseB,表明QseB在病原菌与宿主相互作用中发挥着重要作用。本研究进一步揭示了嗜水气单胞菌的致病机理,并为细菌与宿主相互作用的研究提供了新的理论基础。
[期刊] 水产学报  [作者] 王涛  李琪  
为了得到壳型规则、大小均一的单体牡蛎,本研究采用肾上腺素对岩牡蛎单体苗种生产的诱导条件进行研究,阐明了岩牡蛎单体苗种的最适诱导浓度、诱导时间和诱导密度。结果显示,肾上腺素能显著诱导岩牡蛎幼虫的不固着变态,最适诱导浓度为5×10–5 mol/L,最适诱导时间为1 h,提高诱导浓度和延长诱导时间导致岩牡蛎幼虫的不固着变态率、稚贝壳高和存活率显著降低;肾上腺素对低于8个/mL幼虫密度的诱导效果差异不显著,但稚贝壳高和存活率在8个/mL的培育密度下显著低于0.5~4个/mL,研究表明利用肾上腺素诱导岩牡蛎单体时,可大批量处理眼点幼虫,但稚贝充气培养的最适培养密度应不高于4个/mL。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王健  王静  王淼  孔祥雅  祝凤彬  邵小雪  
【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β2AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β2AR核苷酸序列(AF000134),设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 陈刚  周光宏  刘清  丁俊龙  
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 高峰  江芸  周光宏  韩正康  
2个系列试验研究小麦日粮添加非淀粉多糖酶制剂对雏鸡生长及血液中血糖、尿酸和某些激素水平的影响。试验1将7日龄雏鸡72羽随机分为3组,即小麦基础日粮组、小麦日粮加0.15%浙江酶-1组和小麦日粮加0.15%赤峰酶组。试验2将7日龄雏鸡248羽,随机分为8组,即玉米基础日粮组、小麦基础日粮组、小麦日粮加0.1%、0.2%、0.5%浙江酶-2组和小麦日粮加0.1%、0.2%、0.5%芬兰酶组。试验1结果表明,和小麦组相比,添加0.15%浙江酶-1组雏鸡增重显著提高(P0.05);而添加0.15%赤峰酶组增重提高,料重比下降,但均未达到显著(P>0.05)。试验2...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 索德成  魏书林  肖志明  王培龙  王瑞国  李阳  
【背景】饲用血液制品是一种非常规动物源性饲料原料,由家畜或家禽的血液凝成块后经高温蒸煮,压除汁液、晾晒、烘干后粉碎而成,主要用于畜牧养殖。但由于动物养殖过程中存在非法使用β-受体激动剂的现象,一些含有β-受体激动剂的血液制成饲用血液制品可能成为对人类健康潜在的危害源头。为了降低安全风险,研究饲用血液制品中β-受体激动剂的方法是十分必要的。β-受体激动剂检测方法主要有酶联免疫吸附分析(ELISA)法、高效液相色谱(HPLC)法、气质联用(GC-MS)法和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法等。目前所有方法或标准大多针对商业成品饲料或动物源性食品,缺乏对饲用血液制品中β-受体激动剂的检测技术进行相关的研究。【目的】为了研究和监控饲用血液制品中β-受体激动剂的情况,研究建立了固相萃取结合液相色谱-串联质谱检测饲用血液制品中18种β-受体激动剂的方法。【方法】称取2 g(精确至0.01 g)血液制品样品于50 mL离心管中,准确加入20 mL乙酸铵提取液(pH=5.2)和50μLβ-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶,漩涡混合均匀,于37℃水解过夜(应大于16h),然后8 000 r/min离心5 min,取5 mL上清液转移至另一离心管中,加入0.5mL高氯酸溶液,漩涡混合30 s,然后于8 000r/min离心5min,上清液备用。PCX固相萃取小柱依次用3 mL甲醇,3 mL水活化。取上清液过柱,用3 mL水和3 mL甲醇淋洗,抽干,用3 mL氨水甲醇溶液洗脱,洗脱液于50℃氮气吹至近干,用1.0 mL 0.1%甲酸水+乙腈溶液(95+5)溶解,过0.22μm滤膜。进Waters TQ液相色谱串联质谱仪检测,使用ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm,2.1 mm,1.7μm)色谱柱。乙腈和0.1%甲酸溶液做流动相,梯度洗脱。质谱电离方式采用电子喷雾离子源,正离子检测方式,多反应监测(HRM)。喷雾电压为3.5 kV;雾化气温度为480℃;源温度为150℃;雾化气流速为600L·h-1;锥孔气流速为5 L·h-1。脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气。【结果】18种β-受体激动剂在5—100μg·L-1呈良好的线性关系,相关系数在0.99—0.999之间。在血粉、血浆蛋白粉、血球蛋白粉三种基质中在5、10和50μg·kg-1三个添加水平上的平均回收率为65.1%—110%之间,相对标准偏差小于15%,批间变异系数小于20%。检出限为低于5ng·g-1。【结论】从方法回收率、精密度结果及实际样品的检测结果来看,该方法适用于血液制品中β-受体激动剂的监测。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 翁梦薇  计徐  郑卫江  姚文  
[目的]本研究旨在探讨生产中普遍存在的急性应激因素对细菌耐药基因水平转移的可能影响。[方法]选取分离自断奶香猪粪便的2株喹诺酮类敏感型大肠杆菌作为试验菌株,通过测定D600值比较菌株在添加不同浓度去甲肾上腺素培养液中的生长曲线,确定去甲肾上腺素对于大肠杆菌的最佳促生长浓度;分离自断奶香猪粪便的7株携带质粒喹诺酮类耐药基因(aac(6')-lb-cr、oqx AB、qnr S)的大肠杆菌,采用滤膜接合法,计算去甲肾上腺素诱导和未诱导的大肠杆菌分离株(供体菌)与大肠杆菌J53(受体菌)的接合转移率;PCR检测
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 钱庄  朱怀森  吕英军  刘红林  鲍恩东  
[目的]本文旨在确定应激对母猪排卵后黄体组织的正常发育及其功能的影响。[方法]采用注射促肾上腺皮质激素(ACTH)的方式模拟应激状态,利用RT-q PCR和免疫组织化学法研究新生黄体的类固醇合成能力和组织发育状况。[结果]ACTH组母猪血浆中皮质醇含量明显高于对照组母猪,新生黄体内胆固醇侧链裂解酶P450(P450scc)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达量比对照组母猪明显下调;ACTH组母猪基质金属蛋白(MMP)和血管内皮生长因子(VEGFa)的表达量明显低于对照组母猪;组织学检测结果也显示
[期刊] 中国水产科学  [作者] 陈凯  习丙文  滕涛  王亚冰  高金伟  梁利国  谢骏  
促肾上腺皮质激素释放激素受体(corticotropin-releasing hormone receptor,crhr)是鱼类下丘脑–垂体–头肾调控轴上的重要应激调节因子。本研究通过c Dna末端快速扩增(race)技术成功克隆出团头鲂(megalobrama amblycephala)crhr1 m rna全长序列,应用生物信息学方法对其序列特征进行解析;同时采用荧光定量pcr技术分析了团头鲂crhr1的组织分布图谱及外源性皮质醇注射模拟应激处理下团头鲂crhr1 m rna的表达变化。研究结果表明,crhr1 m rna序列开放阅读框(open reaDing frame,orf)为12...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 潘灿平  陈馥衡  王道全  谷口荣二  桑野荣一  
以章鱼胺能系统为靶标,设计并合成了72个取代苄基亚胺基-2-(口恶)唑烷和取代苯胺基2-(口恶)唑啉化合物。测定了目标化合物对美州大蠊神经索腺苷酸环化酶的活化作用。结果发现配体取代基的变化可引起对章鱼胺受体活性的较大幅度改变。邻氯苄基亚胺基-4-苯基-2-(口恶)唑啉显示与 OA 受体的较高亲和力(V_(max)=33.39,Km=0.33μmol·L~(-1)。应用 Hansch-Fujita 方法、RSA、MFA、药效团分析和分子模型技术等计算机辅助设计方法对它们的结构活性关系进行剖析并建立了一些可信度高的模型。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王璐  刘红改  于得水  李晶  刘慧  赵慧英  
【目的】探讨G蛋白耦联雌激素受体(G-protein-coupled estroGen receptor,Gper)激动剂对卵巢表皮生长因子受体(epidermal Growth factor receptor,eGfr)表达的影响,为阐明Gper和eGfr在卵巢功能维持中的作用奠定基础。【方法】取间情期小鼠,将其分为40,200,1 000nG/只G-1腹腔注射组和对照组(腹腔注射等体积生理盐水),每组20只,各组小鼠进行相应的处理。注射G-1后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠各5只,脱颈处死,迅速取出卵巢,采用免疫组织化学sp法和实时定量rt-pcr法,研究不同剂量Gper激...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王瑞  曹旭敏  徐军  李锐  高海侠  张泽宇  苏扣  孙晓亮  李木子  秦立德  王晓茵  王淑婷  李琳  赵思俊  
[目的]建立β_2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β_2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。[方法]以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗与妥布特罗等12种β_2-受体激动剂类药物的间接竞争ELISA检测方法。[结果]建立的β_2-受体激动剂类药物间接竞争ELISA检测方法的最佳反应条件为:37℃,抗原以1:10 000倍包被1 h,抗体以1:40 000稀释作用40 min,酶标抗体以1:20 000稀释作用40 min。采用建立的间接竞争ELISA最佳反应条件对猪尿中的β_2-受体激动剂类药物残留进行检测,结果表明12种β_2-受体激动剂类药物在0.1~20μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为0.15μg/L,定量限为0.5μg/L;在0.5与1.0μg/L的添加浓度下,回收率为68.4%~114.2%,批内、批间RSD分别为0.4%~10.1%和0.4%~12.5%。[结论]所建立的β_2-受体激动剂类药物残留ELISA检测方法操作简单、快速,灵敏度高,适用于猪尿中β_2-受体激动剂药物的筛选与检测。
[期刊] 山西财经大学学报  [作者] 郭庆春  张咏梅  任一鑫  
文章对静脉产业下资源供给从供给过程、供给机理及供给渠道三方面进行了分析,根据所建立的资源需求平衡模型,得出了未来资源供给渠道由静脉产业与动脉产业共同构成的结论,以此为基础对产业结构及功能、外贸及税费政策、生产及消费方式等方面受到的影响及策略调整进行了分析预测。
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