2021年春季，从湖南省怀化市中方县正清制药青风藤基地和湖南农业大学试验基地分别采集青风藤叶枯病病叶，利用组织分离法获得病原菌，并进行柯赫氏法则验证。借助形态学鉴定和分子系统学分析，明确青风藤叶枯病病原为交链隔孢(Alternaria alternata)。利用菌丝生长速率法对5种药剂(95%苯醚甲环唑、98%咪鲜胺、96%己唑醇、96.5%丙硫菌唑、98%嘧菌酯)进行筛选，结果显示95%苯醚甲环唑抑菌效果最好，EC_(50)为0.043 6 mg/L;98%嘧菌酯抑菌效果最差，EC_(50)值为8.447 3 mg/L。

2021年春季，从湖南省怀化市中方县正清制药青风藤基地和湖南农业大学试验基地分别采集青风藤叶枯病病叶，利用组织分离法获得病原菌，并进行柯赫氏法则验证。借助形态学鉴定和分子系统学分析，明确青风藤叶枯病病原为交链隔孢(Alternaria alternata)。利用菌丝生长速率法对5种药剂(95%苯醚甲环唑、98%咪鲜胺、96%己唑醇、96.5%丙硫菌唑、98%嘧菌酯)进行筛选，结果显示95%苯醚甲环唑抑菌效果最好，EC_(50)为0.043 6 mg/L;98%嘧菌酯抑菌效果最差，EC_(50)值为8.447 3 mg/L。

为了查明浙江省温州市瑞安大面积杨梅枝条枯死的主要原因,采用组织分离法对枯死的杨梅枝条进行病原分离,获得1种主要真菌分离物HN01。根据分离物的培养性状、孢子大小,结合显微镜检测和分子生物学ITs序列测定,该菌株被鉴定为聚多拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sydowiana)。对菌株进行柯赫氏法则验证,证明聚多拟盘多毛孢是导致杨梅枝条枯死的病原菌。筛选4种杀菌剂对该病原菌进行室内毒力测定,结果50%咪鲜胺可湿性粉剂的防效较好,EC50值为1.21mg/L。

为了查明浙江省温州市瑞安大面积杨梅枝条枯死的主要原因,采用组织分离法对枯死的杨梅枝条进行病原分离,获得1种主要真菌分离物HN?01。根据分离物的培养性状、孢子大小,结合显微镜检测和分子生物学ITs序列测定,该菌株被鉴定为聚多拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sydowiana)。对菌株进行柯赫氏法则验证,证明聚多拟盘多毛孢是导致杨梅枝条枯死的病原菌。筛选4种杀菌剂对该病原菌进行室内毒力测定,结果 50%咪鲜胺可湿性粉剂的防效较好,EC50值为1.21 mg/L。

【目的】明确喜树叶斑病病原菌，并探究不同杀菌剂对病原菌的室内抑菌活性，为防治大田喜树叶斑病提供科学依据。【方法】通过常规组织块分离法分离喜树叶斑病病原菌并进行致病性测定，结合形态特征观察及rDNA-ITS序列分析鉴定病原菌的分类地位；采用菌丝生长速率法测定12种常见杀菌剂对病原菌的室内毒力。【结果】从广西农业职业技术大学中草药园的喜树叶斑病上分离到一株真菌，菌株命名为XS-1，经致病性测定、形态学观察和分子鉴定，确定多主棒孢霉（Corynespora cassiicola）是引起喜树叶斑病的病原菌，为国内首次报道，将该病害命名为喜树棒孢霉叶斑病。杀菌剂室内毒力测定结果表明，12种杀菌剂对菌株XS-1菌丝生长均有较强的抑制作用，其中，20%苯甲咪鲜胺微乳剂的抑制作用最强，其EC_(50)为0.0980 mg/L，其次是20%戊菌唑水乳剂、50%多菌灵可湿性粉剂、20%抑霉唑水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和10%苯醚甲环唑水分散粒剂，其EC_(50)分别为0.3737、0.4557、0.4878、0.5746和0.5956 mg/L。【结论】经致病性测定、形态特征观察及分子鉴定，确定引起喜树叶斑病病原菌为多主棒孢霉（C. cassiicola）；20%苯甲·咪鲜胺微乳剂、20%戊菌唑水乳剂、50%多菌灵可湿性粉剂、20%抑霉唑水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和10%苯醚甲环唑水分散粒剂对喜树棒孢霉菌丝生长均具有较强的抑制作用，可作为喜树棒孢霉叶斑病田间防治参考用药。

从感染褐腐病的嵊州桃形李果实中分离得到1株病原菌TXLHFJ–2，利用内转录间隔区(ITS)、延伸因子(TEF–1α)基因、β–微管蛋白基因序列比对和形态学进行鉴定，发现该菌株为美澳型核果褐腐菌(Monilinia fructicola)，该菌株最适生长温度为22.5℃。在PDA培养基上，加入6种杀菌剂(戊唑醇、甲基硫菌灵、异菌脲、苯醚甲环唑、啶酰菌胺和代森锌)进行室内防效试验，发现5.0 mg/L戊唑醇、5.0 mg/L甲基硫菌灵、5.0 mg/L异菌脲、25.0 mg/L苯醚甲环唑、90.0 mg/L啶酰菌胺、100.0 mg/L代森锌均可完全抑制褐腐菌生长，经杀菌剂处理后，再用健那绿B和线粒体红色荧光探针染色发现，经杀菌剂处理的菌丝的绿色和红色荧光强度均显著低于对照组的；再经碘化丙锭(PI)染色发现，杀菌剂处理后的菌丝的红色荧光强度均比对照组的强，说明6种杀菌剂处理均可使褐腐病病原菌的细胞膜完整性受损，降低线粒体膜电位形成，从而抑制菌落生长。甲基硫菌灵、戊唑醇和苯醚甲环唑对病原菌表现出良好的田间防效，分别为81.63%、80.49%和79.98%，但三者无显著差异，基于农药管理办法，建议使用苯醚甲环唑防控桃形李果实褐腐病。

从感染褐腐病的嵊州桃形李果实中分离得到1株病原菌TXLHFJ–2，利用内转录间隔区(ITS)、延伸因子(TEF–1α)基因、β–微管蛋白基因序列比对和形态学进行鉴定，发现该菌株为美澳型核果褐腐菌(Monilinia fructicola)，该菌株最适生长温度为22.5℃。在PDA培养基上，加入6种杀菌剂(戊唑醇、甲基硫菌灵、异菌脲、苯醚甲环唑、啶酰菌胺和代森锌)进行室内防效试验，发现5.0 mg/L戊唑醇、5.0 mg/L甲基硫菌灵、5.0 mg/L异菌脲、25.0 mg/L苯醚甲环唑、90.0 mg/L啶酰菌胺、100.0 mg/L代森锌均可完全抑制褐腐菌生长，经杀菌剂处理后，再用健那绿B和线粒体红色荧光探针染色发现，经杀菌剂处理的菌丝的绿色和红色荧光强度均显著低于对照组的；再经碘化丙锭(PI)染色发现，杀菌剂处理后的菌丝的红色荧光强度均比对照组的强，说明6种杀菌剂处理均可使褐腐病病原菌的细胞膜完整性受损，降低线粒体膜电位形成，从而抑制菌落生长。甲基硫菌灵、戊唑醇和苯醚甲环唑对病原菌表现出良好的田间防效，分别为81.63%、80.49%和79.98%，但三者无显著差异，基于农药管理办法，建议使用苯醚甲环唑防控桃形李果实褐腐病。

【目的】为了明确番木瓜炭疽病主要病原菌种类及适宜的防治药剂。【方法】从海南采集番木瓜炭疽病病果,采用柯赫氏法则对病原菌进行分离、纯化、致病性测定,根据病原菌的形态特征,结合其rDNA-ITS区域的序列分析对病原菌进行鉴定,并采用生长速率法测定17种杀菌剂对该病原菌生长的抑菌活性。【结果】从分离的炭疽菌中,得到2种强致病菌(代表菌株分别为C1和G1),其中C1菌株与辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)形态特征相似,G1菌株和胶孢炭疽菌(C.gloeospcrides)形态特征相似。通过采用引物ITS1/ITS4对2个病原菌序列扩增并测序,将2个菌株rDNA-ITS序列与GenBank中相关菌株的ITS序列进行同源性比较,发现C1菌株与辣椒炭疽菌(C.capsici)同源性达到了99%,G1菌株与胶孢炭疽菌(C.gloeospcrides)的同源性同样达到99%。【结论】500 mg/mL咪鲜胺水分散粒剂对2菌株的抑菌效果最好,平均EC_(50)值仅为0.03μg/mL,其次为300 mg/mL咯菌腈悬浮剂和250 mg/mL丙环唑乳油,平均EC_(50)值分别为0.04和0.11μg/mL,确定番木瓜炭疽病主要由辣椒炭疽菌(C.capsici)和胶孢炭疽菌(C.gloeospcrides)引起,500 mg/mL咪鲜胺水分散粒剂、300 mg/mL咯菌腈悬浮剂和250 mg/mL丙环唑乳油对番木瓜炭疽菌抑菌效果好。

[目的 ]鉴定引起万州区香樟叶斑病的病原菌，明确病原菌菌丝生长特性，筛选出有效抑制叶斑病病原菌的杀菌剂，为该病的防治提供理论基础。[方法 ]采用组织分离法分离和纯化病原菌，用柯赫氏法则进行致病性测定，通过形态特征及ITS、tub2、GAPDH、ApMat多基因联合分析鉴定其病原菌种类；用菌丝生长速率法研究其菌丝生长特性，并进行杀菌剂的筛选。[结果 ]分离菌株在PDA培养基上培养3 d呈现灰褐色，边缘灰白色，后期有橘红色孢子堆出现，分生孢子呈长椭圆形、两端钝圆、透明无色、为独立的单胞，测量其孢子大小为(9.8～18.6)μm×(4.2～6.0)μm；用两种方法对优势菌株ZT-1进行致病性检验，均能引起香樟叶片发病；代表菌株ZT-1和ZT-5与胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）聚在一支，支持率达100%；菌落的最适生长温度为28℃，最适pH值为6.0，马铃薯葡萄糖琼脂培养基利于菌丝生长，最适碳源和氮源分别为葡萄糖、甘氨酸，最适的光照条件是全黑暗；在化学和生物杀菌剂中，15%三唑酮可湿性粉剂、1%蛇床子素水乳剂的室内毒力较强，对C. gloeosporioides的抑制效果明显，其EC50值均小于10μg·mL~(-1)。[结论 ]C. gloeosporioides是万州区香樟炭疽病的病原菌，15%三唑酮可湿性粉剂可作为防治的杀菌剂。

【目的】探明香榧藻斑病的病原种类及其生物学特性，筛选对香榧藻斑病具有良好防治效果的药剂，为香榧藻斑病防治提供科学依据。【方法】在浙江省香榧主产区采集藻斑病病叶，结合传统形态学方法与分子生物学手段对从病叶中分离获得的香榧绿藻进行鉴定，明确病原藻的生物学特性，通过室内毒力测定和林间防治试验筛选防治香榧藻斑病的优良药剂。【结果】1）从香榧藻斑病病叶中分离获得3种病原绿藻类群，结合藻株形态学特点以及SSU-ITS区间序列分析，3种绿藻类群分别被鉴定为链带藻、软克里藻和Tritostichococcus corticulus，均为香榧病原新记录种。3种香榧绿藻的培养条件相似，均适宜在初始pH 11、温度25℃、光照/黑暗为12 h/12 h光周期下的BG-11培养基中生长。2）以混合藻为靶标进行室内毒力测定试验显示，12%松脂酸铜悬浮剂灭藻效果最好，EC_(50)可达8.33 mg·L~(-1)，显著低于其他药剂（P<0.05），其后依次为33.5%喹啉铜悬浮剂、80%波尔多液、20%噻菌铜悬浮剂和45%石硫合剂。林间防治试验表明，施药30天后，12%松脂酸铜和33.5%喹啉铜悬浮剂的防治效果分别达78.11%和71.62%。【结论】从浙江省香榧上新发现3种病原绿藻类群，藻群生物学特性类似。室内毒力测定和林间防治试验表明，12%松脂酸铜和33.5%喹啉铜悬浮剂对香榧藻斑病有较好防治效果。

2020年春季,于重庆市长寿区柑橘园内采集大雅柑典型枯斑病果实,采用组织块分离法分离得到菌株CS11,对其进行形态学和分子生物学鉴定,确定CS11为Stagonosporopsis cucurbitacearum。向健康的柑橘盆钵苗喷洒CS11孢子悬液可致植株患病,从患病样品中分离得到菌株CS11,确认CS11是致病病原菌;CS11对大雅柑(Citrus reticulata.cv. dayagan)、有核沃柑(Citrus rtemple×Dancy)、塔罗科血橙(Tarocco blood orange(Citrus sinensis(L.)Osbeck))和尤力克柠檬(Citruslimon)的叶、枝、果实均具有致病性。室内药剂筛选结果显示,75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂、60%唑醚·代森联可湿性粉剂、450 g/L咪鲜胺乳油、37%苯醚甲环唑可湿性粉剂、11.5%吡唑嘧菌酯乳油5种杀菌剂对CS11有较好的抑制作用,其中75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂、60%唑醚·代森联可湿性粉剂、37%苯醚甲环唑可湿性粉剂、11.5%吡唑嘧菌酯乳油等4种药剂的EC50值均小于10 mg/kg。

2020年春季,于重庆市长寿区柑橘园内采集大雅柑典型枯斑病果实,采用组织块分离法分离得到菌株CS11,对其进行形态学和分子生物学鉴定,确定CS11为Stagonosporopsis cucurbitacearum。向健康的柑橘盆钵苗喷洒CS11孢子悬液可致植株患病,从患病样品中分离得到菌株CS11,确认CS11是致病病原菌;CS11对大雅柑(Citrus reticulata.cv. dayagan)、有核沃柑(Citrus rtemple×Dancy)、塔罗科血橙(Tarocco blood orange(Citrus sinensis(L.)Osbeck))和尤力克柠檬(Citruslimon)的叶、枝、果实均具有致病性。室内药剂筛选结果显示,75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂、60%唑醚·代森联可湿性粉剂、450 g/L咪鲜胺乳油、37%苯醚甲环唑可湿性粉剂、11.5%吡唑嘧菌酯乳油5种杀菌剂对CS11有较好的抑制作用,其中75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂、60%唑醚·代森联可湿性粉剂、37%苯醚甲环唑可湿性粉剂、11.5%吡唑嘧菌酯乳油等4种药剂的EC50值均小于10 mg/kg。

[目的]为了明确黄河故道地区造成梨树根腐病的病原菌的种类,研究18种常用杀菌剂对该病原菌的抑制效果。[方法]通过对梨树根腐病发病根系样品病原菌的分离和单孢纯化,根据代表性菌株形态学观察、rDNA-ITS序列分析和致病性试验,进行病原菌的种类鉴定,对菌丝生长和孢子萌发有效抑制的化学药剂进行筛选,并对部分药剂进行田间防效试验。[结果]从发病根系样品中分离纯化得到4个菌株,经形态学和rDNA-ITS序列分析,鉴定为同一致病菌;结合致病性试验结果,确定该致病菌是腐皮镰刀菌(Nectria haematococca

【目的】明确广东省番木瓜果实疑似炭疽病病害的致病菌,并筛选防控该病害的适宜化学药剂,为番木瓜炭疽病的诊断和有效防治提供科学依据。【方法】在广东省广州市番木瓜果园采集番木瓜果实水渍状炭疽病疑似病果,对番木瓜病果进行组织分离及致病性测定,利用传统形态学和分子生物学方法鉴定病原菌;采用菌丝生长速率法测定8种杀菌剂对该病原菌的室内毒力。【结果】从病果样品中分离出5个形态特征相似的菌株(C1～C5),随机选取C1作为代表性菌株进行致病性测定和鉴定。致病性分析发现,番木瓜果实接种C1病原菌2 d即可表现出明显的水渍状病斑,从表现症状的部位可以重新分离到该病原菌。形态学观察发现,C1初生菌丝为白色辐射状,随后变灰白色,菌丝体上覆盖着一些橘红色分生孢子盘;孢子梗透明,有分隔;分生孢子透明,单细胞,细胞壁光滑,两端圆,形状规则呈圆柱形,壁薄,内含物呈颗粒状;分生孢子大小为13.2μm×5.1μm。这些形态学特征与短孢炭疽菌(Colletotrichum brevisporum)一致。分子生物学鉴定结果显示,供试菌株C1核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β微管蛋白(β-tubulin,TUB2)和肌动蛋白(actin,ACT)基因序列与短孢炭疽菌(C. brevisporum)模式菌株BCC 38876对应基因的序列一致性分别为100%,93%,98%和100%。系统发育树分析结果表明,供试菌株C1与短孢炭疽菌单独聚为一支。结合形态学、分子生物学、致病性及发病特征明确了导致广东省番木瓜炭疽病的病原菌为短孢炭疽菌。室内毒力测定结果显示,在8种杀菌剂中,45%咪鲜胺水乳剂对C1菌株的抑制效果最明显,抑制中浓度(EC_(50))为0.082 0 mg/L,其次为250 g/L丙环唑乳油和40%苯醚甲环唑悬浮剂,EC_(50)分别为0.263 5和9.714 3 mg/L。【结论】在中国大陆首次鉴定了番木瓜果实炭疽病的致病菌短孢炭疽菌。45%咪鲜胺水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和40%苯醚甲环唑悬浮剂对番木瓜短孢炭疽菌具有明显的抑制作用。

【目的】明确造成南宁植物园青秀山苏铁园内苏铁叶片干枯的病因，研究防治手段，为有效保护苏铁种质资源提供理论基础。【方法】采集不同发病苏铁植株上的枯萎叶片样本113个，使用平板培养及稀释分离法将病原真菌进行分离纯化，通过柯赫氏法则测定分离菌株致病力，依据形态学及分子生物学鉴定等手段对所获得分离株进行物种鉴定，选取代森锰锌、啶氧菌酯、苯甲·丙环唑、苯甲·嘧菌酯、氟菌·肟菌酯、氯氟醚·吡唑酯和百菌清等7种杀菌剂对病原菌进行室内药效试验。【结果】通过对枯萎组织的微生物分离纯化，共获得72株分离菌株，经ITS序列分析发现分别来自炭疽菌属、镰刀菌属、链格孢菌属、拟盘多毛孢属、叶点霉属、黑孢霉属、枝孢菌属、球毛壳菌属、炭团菌属、炭角菌属、葡萄座腔菌属、曲霉属及小新壳梭孢属等13个不同属。对其中的真菌进行致病力测定发现，镰刀菌属的GX2210菌株经针刺接种到苏铁羽片会产生枯萎病斑；进一步采用CaM、bTUB、RPB2和TEF1a基因序列分析，确定该菌株为变红镰孢菌（Fusarium incarnatum）；药效试验显示，代森锰锌是抑制该菌株的最有效药物，抑制中量（ID_(50)）为0.3577 mg/L。【结论】造成南宁植物园苏铁叶枯病的病原菌为变红镰孢菌。代森锰锌对变红镰孢菌具有较好的抑制作用，可考虑用于苏铁叶枯病防治。