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[期刊] 水产学报
[作者]
吴玟静 李振兴 金科 郑礼娜 王邦平 林洪
选择青岛地区喜食的阿拉斯加狭鳕、蓝点马鲛、大黄鱼、真鲷、鲑、大菱鲆、鲤等7种鱼为研究对象,利用鱼类过敏患者血清,通过SDS-PAGE及免疫印迹方法对每种鱼的过敏原蛋白进行鉴定。利用兔抗鲅鱼小清蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA和抑制性ELISA等对7种鱼的小清蛋白之间的交叉反应进行探讨。结果表明,青岛地区居民鱼类过敏原主要为48～57、33～41、28及17 ku的蛋白,和传统公认的小清蛋白为主要过敏原的共识不同。而针对小清蛋白的交叉反应研究也表明,不同鱼类蛋白之间存在强烈的交叉反应。因此,虽然鱼类过敏原可能不同,但如果对以上7种鱼中的一种鱼过敏,最好不要食用其他任何一种鱼。
关键词：
鱼 过敏原 鉴定 交叉反应
[期刊] 水产学报
[作者]
李振兴 林洪 李明华 曹立民
The consumption of seafood is widespread in China.The increase in the rate of seafood allergies,as well as their persistence and severity,become an important food safety issue.To improve seafood allergy patients' life quality,it is important to find a kind of seafood which has little or even none al...
关键词：
过敏 虾类 过敏原性 食品安全
[期刊] 水产学报
[作者]
王晓斐 李振兴 林洪 杜亚楠
以中国对虾为研究对象,旨在获得有关中国对虾过敏原的基础数据,为水产品中过敏原的控制提供依据。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对中国对虾过敏原组分进行分析,经免疫印迹鉴定其主要过敏原。然后利用高效液相色谱法纯化中国对虾的主要过敏原,并用β消去、紫外扫描、肽质量指纹图谱和红外光谱等方法对其理化性质进行研究。表明中国对虾主要过敏原为分子量36ku的糖蛋白,糖含量为4.4%,存在O-型糖肽键,其二级结构主要为α-螺旋,与其他甲壳类过敏原之间存在很高的同源性。
关键词：
中国对虾 过敏原 鉴定 肽质量指纹图谱
[期刊] 水产学报
[作者]
孙妙 李振兴 曲欣 林洪 吴丽莎
为制备一种能够缓慢释放的鱼类过敏原——小清蛋白的海藻酸钠微球,采用离子凝胶法制备出形态完好的海藻酸钠-小清蛋白微球,利用傅里叶红外光谱、差式扫描量热法、扫描电子显微镜等对其结构进行表征,并初步探究微球中小清蛋白在模拟肠液pH环境中的释放动力学参数。测得海藻酸钠对小清蛋白的包埋率为69.24%,蛋白装载率为21.06%,微球表面粗糙并分布有大量的微小孔洞,体外释放实验测得前5 h小清蛋白释放迅速,而后逐渐达到最大值,其释放动力学符合Higuchi模型和Ritger-Peppas模型。结果表明,海藻酸钠可以作为包埋小清蛋白的载体并实现小清蛋白的缓慢释放,其释放机理符合骨架溶蚀蛋白扩散机制。
关键词：
过敏原 海藻酸钠 缓释 动力学
[期刊] 水产学报
[作者]
刘光明 黄园园 蔡秋凤 翁凌 苏文金 曹敏杰
采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)方法,通过模拟肠胃液消化实验分析淡水鱼类肌肉中主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)的消化特性。Tricine-SDS-PAGE结果显示,纯化的鲫、鲢PV在模拟胃液消化实验中反应5～30min明显分解,而在模拟肠液消化实验中4h仍未见明显分解。鲫、鲢肌浆蛋白在模拟胃液消化实验中,肌浆蛋白中的PV比纯化PV的分解时间明显延长,消化30～60min仍未被完全分解,而其它肌浆蛋白消化10～30min就完全分解。采用抗PV多克隆抗体的Western-blot显示,...
[期刊] 水产学报
[作者]
林娜 马德蓉 刘志东 倪玲 段蕊 张俊杰
为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot (WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白；通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原；采用SDS-PAGE及WB分析南极磷虾主要过敏原的耐热性及对模拟胃肠液的消化稳定性。结果显示，南极磷虾肌浆蛋白(SP)和肌原纤维蛋白(MF)电泳条带丰富且分子量范围广。南极磷虾蛋白与虾蟹过敏患者血清能发生免疫反应，其中至少有4个蛋白条带发生了阳性反应；免疫反应最强烈的蛋白分子量约为35 ku，能够被所有的患者血清识别，经液质联用鉴定此过敏蛋白为南极磷虾原肌球蛋白(TM)。硫酸铵分级盐析纯化TM的最佳饱和度为50%；分离纯化后得到了纯度较高的TM，其等电点为4.4，热稳定性好，能与虾蟹过敏患者血清发生强烈的免疫反应。TM随着模拟胃液消化时间的延长，主条带分子量逐渐降低，最后稳定在33 ku左右，并且分子量为15和12 ku的降解片段含量逐渐增多且稳定存在；这些降解条带仍然能与过敏患者血清发生较强的免疫反应。随着模拟肠液消化时间的延长，TM原始片段逐渐减少直至消失，最后完全降解成分子量更小的多肽；TM经肠液消化后其降解产物免疫活性大大降低。研究表明，南极磷虾中存在过敏原，TM是其最主要的过敏原，且具有免疫反应性。TM还具备了过敏原的一般特性，比如耐高温、耐胃蛋白酶消化、对胰蛋白酶消化部分稳定。研究结果对于阐明南极磷虾潜在致敏问题的预警和防控具有现实意义，也为南极磷虾加工利用及过敏原消减技术构建提供基础信息。
[期刊] 水产学报
[作者]
郑礼娜 林洪 刘一璇 李钰金 李振兴
选取煮(100℃)、蒸(100℃)、高压(121℃,0.1 MPa)这3种常见热加工方法,分别处理刀额新对虾不同的时间,通过检测总可溶性蛋白、主要过敏原含量和免疫活性的变化,分析3种热加工方式对虾类过敏原免疫活性的影响,并通过质地剖面分析,研究虾肉经过处理后组织结构的变化。经过3种热处理后,分子量为36 ku的主要过敏原蛋白仍然存在,免疫印迹的结果显示其免疫活性有不同程度的下降,高压对免疫活性的降低程度最大,30 min时免疫活性降低了97%;在25～35 ku区域出现一条新的IgE结合蛋白。质构分析结果显示,经过高压热处理后,虾肉的硬度和咀嚼度都有很大程度的降低,口感变差。结果表明:热高压处...
[期刊] 水产学报
[作者]
蔡秋凤 王锡昌 刘光明 罗志湖 曹敏杰
原肌球蛋白(TM)是甲壳类动物的主要过敏原,其氨基酸序列具有很高的保守性。本研究以口虾蛄为研究对象,旨在探明TM是否是其主要过敏原并对其相关性质进行研究。利用过敏患者血清通过免疫印迹法确定口虾蛄的主要过敏原分子量约为36ku。通过制备丙酮粉、等电点沉淀、硫酸铵盐析及加热等方法纯化了该主要过敏原。采用抗中华绒螯蟹TM多克隆抗体进行免疫学性质分析表明该蛋白为TM。抑制性免疫印迹和抑制性ELISA实验表明口虾蛄TM与凡纳滨对虾和锯缘青蟹等甲壳类动物的TM具有较强的免疫交叉反应,但与贝类动物杂色蛤的免疫交叉性较低。通过ELISA方法对甲壳类动物的TM进行定量测定,结果表明,口虾蛄肌肉中TM的含量约只有...
[期刊] 世界农业
[作者]
刘欣 姚晗珺
随着人类对自身安全意识的增强,对过敏原进行严格管理将成为工业食品的重要发展趋势。而中国目前还未对这方面进行系统研究和规范,因此,本文通过对欧盟、美国、日本、韩国、澳大利亚、新西兰以及中国香港等国家和地区有关过敏原的法规和管理机制进行对比分析,并提出完善中国食品过敏管理的建设性意见。
关键词：
主要贸易国 食品过敏原 启示
[期刊] 水产学报
[作者]
刘一璇 林洪 吴丽莎 陈瑜 王国英 李振兴
选取冻干、烘干、虾丸化以及油炸4种加工方式处理刀额新对虾,通过检测可溶性蛋白、主要过敏原含量和免疫活性的变化以及体外模拟胃液消化实验,分析加工方式对虾类过敏原免疫活性及抗酶解能力的影响。结果表明经过不同的加工处理后,分子量为35 ku左右的主要过敏原蛋白仍然存在,免疫印迹显示其免疫活性有不同程度的下降,其中虾丸化处理对免疫活性的降低程度最大,达87%,冻干处理的影响最小,仅达6.8%;而主要过敏原蛋白抗酶解能力变化不明显。结论:不同的加工方式对虾过敏原活性的降低有比较大的差异,但对于抗酶解能力影响不大。
关键词：
刀额新对虾 加工 过敏原 过敏活性
[期刊] 水产学报
[作者]
刘光明 史千玉 蔡秋凤 潘冰青 翁武银 苏文金 曹敏杰
以日本鳗鲡皮与肌肉组织为研究对象,采用碱溶、酸溶、盐析、冻干等方法纯化得到胶原蛋白,采用加热、饱和硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析等方法纯化得到两种亚型的小清蛋白(PV-Ⅰ和PV-Ⅱ),纯化的目标蛋白经动物特异性抗体的免疫印迹实验确证。酶联免疫吸附测定和免疫印迹分析结果显示,纯化的胶原蛋白和小清蛋白分别与鱼类过敏患者阳性血清发生特异性反应,且二者之间无免疫交叉反应。体外模拟胃液消化实验和SDS-PAGE分析结果显示,胶原蛋白和小清蛋白均具有较高的消化稳定性。结果提示,日本鳗胶原蛋白和小清蛋白具有较高的消化稳定性和免疫原性,二者可引发不同患者的IgE介导特异性超敏反应。
[期刊] 水产学报
[作者]
吴丽莎 李振兴 刘一璇 陈瑜 林洪
采用凡纳滨对虾为研究对象,分别将过敏原提取物在-3,-20和-80℃的贮存条件下反复冻融1～5次,通过测定每次冻融后的蛋白浓度,过敏原免疫原性等探讨过敏原在不同温度循环下的变化,分析冻融循环对过敏原提取物活性的影响。结果表明,虾过敏原提取物在-80、-20、-3℃冻融循环5次时,蛋白浓度分别下降33.1%、30.0%和24.2%;在-80和-20℃冻融循环4次时,主要过敏原条带发生降解,-3℃冻融循环5次,主要过敏原条带不会发生变化。在-80和-20℃冻融循环5次以及在-3℃冻融3次时,过敏活性降低;在-80和-20℃冻融5次,主要过敏原的免疫印迹条带消失,在-3℃冻融的免疫印迹条带没有变化。...
关键词：
凡纳滨对虾 过敏原 冻融 免疫原性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
布冠好 郑喆 郑海 罗永康
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法(ELISA)。确定了包被抗原质量浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000。结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05~1.00μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李梦瑶 王枫 侯喜林 蒋倩 王镇 马静 熊爱生
以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别编码159个氨基酸,二者有2个核苷酸位点的差异,编码的氨基酸有1个位点差异。‘津南实芹’和‘美国西芹’的过敏原蛋白Api g 1与胡萝卜、欧芹等植物的过敏原蛋白相似度较高,在保守区域有7个甘氨酸残基,空间结构上由3个螺旋和7个折叠组成。实时定量PCR表达分析显示,该基因在主根中表达较高,茎其次,其他部位表达较弱,具有明显的组织特异性...
[期刊] 水产学报
[作者]
阮密密 蔡秋凤 刘光明 曾伶俐 苏文金 曹敏杰
小清蛋白(parvalbumin,PV)是鱼类的主要过敏原,为分析淡水鱼PV的序列及结构特征,采用RT-PCR方法,从鲫和鳜肌肉中分别克隆得到2种小清蛋白的基因序列。生物信息学分析结果显示,4种基因的序列长度均为330 bp,编码109个氨基酸残基,推导分子量在11.6 ku左右,等电点为4.45~4.69。氨基酸序列分析表明,克隆得到的这4种PV序列均含有丙氨酸-14、亮氨酸-16、半胱氨酸-19、苯丙氨酸-67、谷氨酰胺-69以及苏氨酸-79等β型PV特征性残基序列,表明克隆的目的基因均为β型PV。鲫的2种PV序列相似性为80.73%,鳜的2种PV的序列相似性为83.49%。对克隆得到的P...
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