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[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨桂香 彭险峰 曾振灵 陈杖榴
根据雌激素类化合物在机体内的作用机理,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因构建了4个启动子不同的表达载体(pERE-SV-EGFP,pERE-TA-EGFP,pERE-CMV-EGFP,pERE-TK-EGFP)。以这些表达载体瞬时转染MCF-7细胞,报告基因的基础表达与启动子的强度相关。以17β-雌二醇(E2,10-9mol·L-1)诱导表达载体瞬时转染的MCF-7细胞,发现在表达载体pERE-TA-EGFP、pERE-TK-EGFP、pERE-SV-EGFP转染的MCF-7细胞中,E2能诱导2倍以上的报告基因的表达。这表明在这些瞬时表达系统中报告基因的表达是雌激素依赖性的,因此这...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张国升 左敬 甘瑞 朱峰伟 孙燕 王鲜忠 张家骅
【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH(50 ng.mL-1)和17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
左敬 甘瑞 张国升 张姣姣 朱峰伟 孙燕 王鲜忠 张家骅
【目的】确定雌激素是否通过雌激素受体以及在cAMP-细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下,未成熟仔猪睾丸支持细胞中cyclinA2 mRNA的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加雌激素受体抑制剂以及各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinA2 mRNA的相对表达量。【结果】17beta-雌二醇(10-9 mol.L-1)以时间依赖的方式促进了cyclinA2 mRNA的表达(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
包图雅 曹贵方 凃勇 杜晨光
【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRN...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘青 魏华 张高峰 吴楠
研究了环境激素壬基酚(4-NP)在雌鲫体内的对雌激素受体的表达和雌二醇水平的影响。雌鲫腹腔注射1、50、100 mg.kg-1的4-NP或1 mg.kg-1的E2,分别在24 h和48 h提取肝脏RNA用RT-PCR查看α型雌激素受体(ER-α)和CYP1A的表达情况和提取血清用荧光免疫法测定E2浓度。结果表明:1 mg.kg-1E2处理组的ER表达在24 h和48 h有显著性增加(P<0.05),但...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
李惠云 刘鹏威 魏华
运用定量PCR技术和免疫荧光法研究了内分泌干扰物双酚A(BPA)对雌鲫的雌激素效应。以不同浓度的BPA[质量分数分别为1 mg/kg,50 mg/kg,100 mg/kg(注射剂量/鱼体重)]对雌鲫进行腹腔注射,然后分别于24 h和48 h检测肝脏中的α型雌激素受体(ERα)mRNA表达以及血清雌二醇(E2)水平。结果表明1 mg/kg和50 mg/kg BPA处理组ERαmRNA水平与对照组相比在48 h内均没有明显变化;100 mg/kg BPA处理组ERαmRNA水平在注射后24 h显著上调(P
关键词：
内分泌干扰物 双酚A α型雌激素受体
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
崔培 宋爽 王尧尧 王瑞瑞 王云 蒋书东 方富贵 李福宝
为研究雌二醇(Estradiol,E2)对大鼠下丘脑神经激肽B(Neurokinin B,NKB)表达的影响,采用免疫组化PV-9003二步法以及DAB显色技术,对外源性E2处理组(E2组)、花生油处理组(C组)、卵巢摘除+E2组(OVX+E2组)和卵巢摘除组(OVX组)大鼠下丘脑的NKB进行检测。结果表明:大鼠阴门开启时间E2组(29.00±0.707)与OVX+E2组(30.20±0.084)早于对照组(43.60±2.074)(P<0.01)。NKB主要分布于所有大鼠下丘脑的弓状核、腹内侧核和室旁核,且OVX组和C组室周核上也有少量表达(P<0.05),但各组间NKB的平均光密度值有差异...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王步勇 问荣荣 马玲 周天华 张萌
应用BLAST比对技术,在松材线虫基因组数据中鉴定得到模式线虫pdk–1的同源基因Bxpdk–1。结合RT–PCR技术进行Bxpdk–1基因完整蛋白编码区(CDS)扩增,得到CDS区全长2298bp。Bx PDK–1蛋白含有"STKc_PDK1""PH_PDK1"2个保守结构域,属于磷酸肌醇激酶超家族。序列比对及进化树分析显示,松材线虫Bx PDK–1蛋白与捻转血矛线虫PDK–1蛋白(CDJ88126.1)同源性为50%,进化树聚在同一小分支上,亲缘关系较近。原位杂交试验表明,Bxpdk–1基因主要在线虫的头部神经元及咽部神经处表达。q PCR结果分析显示,Bxpdk–1基因表达响应鱼藤酮药剂胁迫处理。RNAi试验显示,Bxpdk–1在dsRNA处理12 h时,基因表达量显著下降,基因被沉默。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
刘学英 乌云塔娜
利用花药绒毡层特异BoA9基因启动子及类细胞毒素基因BoCysP1创造雄性不育,利用雌蕊特异表达S12-RNase基因启动子启动BoCysP1基因创造雌性不育,构建了雌雄不育植物表达载体BoA9pro-CysP1-PpS12pro-CysP1-pB I101.2,该载体可用于雌雄同株及雌雄异株的雌株进行转基因,生产无果无籽的园林绿化新品种,为果实、种子污染空气、地面的园林绿化树种的改良提供了崭新的平台和思路,也可为园林绿化树木育种提供新途径。
关键词：
经济林学 雌性不育 雌雄不育 基因工程
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙琪 丛霞 索佳佳 曹荣峰 姜忠玲 崔凯 高善颂 田文儒
为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)随机分为39℃和41℃热处理组(分别处理0.5,1,1.5,2 h)和常温对照组(37℃),测定各组细胞CaMKⅡ和HSF1 mRNA的量。此外,将培养的细胞分为37℃和39℃CaMKⅡ特异性抑制剂(myr-AIP)处理组和相应的空白对照组,分别测...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
上官宵兆 刘美玲 毛颖睿 王晓强 王雅昱 汪桂玲 李家乐
本实验通过RACE技术、实时荧光定量（qRT-PCR）技术，原位杂交和17β-雌二醇注射来探究17β-HSD11基因在三角帆蚌性腺发育和性激素合成中的表达特性和作用。结果显示17β-HSD11基因的cDNA全长为1134 bp， 其中5' UTR 40 bp，开放阅读框（ORF）923 bp，3' UTR 171 bp，编码307个氨基酸。17β-HSD11基因在肝胰腺、性腺中表达量较高，且卵巢极显著高于精巢（P < 0.01）。原位杂交结果显示雌性三角帆蚌卵母细胞、滤泡膜和卵膜上均存在杂交信号。注射不同浓度17β-雌二醇之后发现17β-HSD11基因在雌雄性腺中的相对表达量均被抑制，其中低浓度注射后，17β-HSD11基因的表达量在卵巢中下降33.38%，在精巢中下降37.74%。而高浓度注射后，17β-HSD11基因的表达量在卵巢中下降57.78%，在精巢中下降61.31%。由此推测17β-HSD11可能与三角帆蚌性腺发育和雌激素合成相关。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
吴丹 胡兰
为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
毕聪明 张仕强 彭树英 吕宁 张涌
为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。
关键词：
A型精原细胞 基因重组 hTERT 牛
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
白丁平 陈静 谢璐娜 刘敏 陈玉林
以陕北白绒山羊毛囊生长期皮肤组织cDNA为模板,扩增出Lhx2基因的CDS区,成功构建了以KAP6.1为启动子表达Lhx2基因的绿色荧光表达载体pIRES2-KAP-LHX-EGFP.并利用脂质体介导转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得了稳定转染的细胞系,经PCR检测显示外源基因已整合到细胞基因中.研究结果为进一步开展Lhx2基因对绒山羊毛囊发育的影响和转Lhx2基因绒山羊的生产提供了前期研究基础.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安静 张雪梅 刘晨曦 刘明军
【目的】克隆绵羊IGF-1基因CDS区,构建绵羊IGF-1基因慢病毒表达载体,分析IGF-1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA,通过RT-PCR方法获得IGF-1全长CDS序列,经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接,构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒,并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞,并用重组慢病毒使其感染,建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线,分析过表达IGF-1对绵羊成肌细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518bp的IGF-1CDS区序列。成功构建...
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