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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈少宇 袁莉刚 杨大鹏 王华 张勇
[目的]分析降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在牦牛附睾中的转录水平及蛋白分布特点,探究其对精子运输及成熟的功能。[方法]采集6头3～4岁健康成年牦牛的附睾,将其解剖为头、体、尾三部分,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blotting分别检测CGRP mRNA和蛋白在附睾的头、体、尾中的表达水平;采用H.E染色法分析附睾组织结构特点;采用免疫组化和免疫荧光技术分析附睾各部分CGRP的分布及表达情况。[结果]RT-qPCR结果表明,CGRP在牦牛附睾头的相对表达量显著高于附睾体和附睾尾(P<0.05),附睾尾表达量最低(P<0.05)。显微镜下观察表明,牦牛附睾组织纤毛长度从头部至尾部逐渐降低,差异显著;附睾头间质组织的间质平滑肌层厚度显著低于附睾体和附睾尾(P<0.05);基细胞和晕细胞在附睾尾分布显著,上皮厚度亦在附睾尾显著降低。免疫组化及免疫荧光分析发现,CGRP主要分布于附睾上皮、基底膜及附睾间质小血管,附睾上皮晕细胞的表达强度最高。[结论]CGRP主要分布于牦牛附睾上皮和间质小血管,提示CGRP对牦牛附睾间质小血管的收缩发挥调节作用。牦牛附睾尾晕细胞数量最多,晕细胞中CGRP的高强度表达提示其可能参与附睾尾的免疫调节。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卢德章 范宏刚 胡魁 马海鲲 张建涛 李静 王洪斌
【目的】研究小型猪复合麻醉剂对小型猪血浆内皮素(endothelin,ET)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)含量及部分心肺指标的影响。【方法】14头实验用小型猪肌肉注射小型猪复合麻醉剂0.15mL·kg-1,并在注药前及注药后5、10、30、45、60、80、100、120min分别进行无创血压和心率(heart rate,HR)的监测并同步采取前腔静脉血样。采用放射性免疫分析法测定小型猪血浆中ET和CGRP的含量,并分析他们之间的相关性。【结果】无创血压、HR主要是在注药后5-10min及80min时变化明显(P<0.01或P<0...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
涂秋云 赵玲玲 汤建萍 周春山 陈茹
为观察连翘木脂素对小鼠脑缺血再灌氧自由基损伤的保护作用,探讨连翘木脂素的抗氧化作用机制与降钙素基因相关肽的关系,建立脑缺血再灌小鼠模型.将供试小鼠随机分为缺血再灌组(IR组,分再灌后1,6,24,120 h 4个时间点),连翘木脂素治疗组(连翘组,分24,120 h 2个时间点),假手术组(ShO组),测定各组小鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)和降钙素基因相关肽(CGRP)含量.结果表明,小鼠脑缺血再灌血浆中SOD活性降低,MDA含量升高,CGRP含量降低,连翘木脂素治疗组血浆SOD活性增强,MDA含量降低,CGRP的含量升高,表明自由基形成和脂质过氧化是小鼠脑缺血再灌注...
[期刊] 水产学报
[作者]
周启苓 马骞 王刘永 毛非凡 杨二军 陈刚
【背景】miRNA作为一类非编码小RNA分子，在脊椎动物骨代谢的分子调控网络中占有重要地位。【目的】本研究旨在探究钙调节因子对硬骨鱼类骨组织miRNA表达水平的影响。【方法】采用鲑降钙素(salmon calcitonin， sCT)对虹鳟幼鱼进行腹腔注射，并在注射24 h后采集鳞组织，利用高通量测序技术和生物信息学方法对其中的miRNA表达谱进行分析。【结果】注射组及对照组样品miRNA测序分别获得14 051 631和15 816 147条高质量miRNA序列(18～26 nt)，并分别从中鉴定出568和592种成熟miRNA。注射sCT后的虹鳟鳞组织中共筛选出24个差异表达miRNA(differentially expressed miRNAs， DEMs)(9个表达上调，15个表达下调)。随后，从中随机选取8个miRNA进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR， qRT-PCR)检测，其检测结果与高通量测序结果一致。GO注释和富集分析结果显示，DEMs的预测靶基因主要被注释在金属离子结合、钙离子结合、G蛋白偶联受体信号通路、Wnt信号通路和经典Wnt信号通路等功能上，靶基因主要在NF-kappaB输入细胞核的负调节、IL-1β分泌的负调节和TGF-β结合等功能上显著富集。KEGG富集分析结果显示，DEMs的靶基因显著富集在Toll样受体和雌激素等信号通路中。【结论】基于上述分析结果，本研究筛选出omy-miR-29a-5p、omy-miR-30d-5p、omy-mir-125b-2-p3、omy-miR-138、omy-miR-199b-5p和omy-miR-200b等多个可能参与虹鳟骨代谢调控过程的miRNA。【意义】筛选出的差异miRNA可为硬骨鱼类骨代谢调控机制研究提供素材。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王刘永 周启苓 马骞 毛非凡 杨二军 陈刚
为探明鲑降钙素(salmon calcitonin, sCT)对鱼类骨组织钙代谢过程的调节机制,对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)幼鱼进行sCT腹腔注射,并在注射后24 h采集鳞组织进行转录组测序,分析其中长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)表达水平的变化。结果显示,注射sCT后的虹鳟鳞组织中共鉴定出847个差异表达的lncRNA,其中247个表达上调, 600个表达下调。GO注释结果显示,差异表达lncRNA靶基因主要被注释到转录调控、运输、信号转导、膜、细胞质、金属离子结合和核苷酸结合等功能中。KEGG通路富集结果显示,差异表达lncRNA靶基因在硫胺素代谢通路、炎症介质对TRP通道调节、血小板活化、谷氨酸能突触、神经营养因子通路、ARVC通路和NF-kappa B信号通路等通路中显著富集。利用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qRT-PCR)对随机选取的6个差异表达lncRNA的表达量进行验证,结果显示, qRT-PCR与RNA-Seq结果一致。基于上述结果,本研究筛选到MSTRG.68909.2、MSTRG.39805.1、MSTRG.121429.1、MSTRG.9137.1和MSTRG.43721.1共5个可能参与虹鳟钙代谢的关键lncRNA,这些关键基因的筛选鉴别可为探明硬骨鱼类骨代谢的调控机理提供新的切入点,为虹鳟养殖生产实践提供参考。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李娟 郑姚 王利
为鉴定牦牛水通道蛋白7(AQP7)基因,分析其在不同组织中的表达水平及蛋白定位,采用RT-PCR方法克隆九龙牦牛AQP7基因,并进行生物信息学分析,采用RT-qPCR方法检测AQP7基因在九龙牦牛8种不同组织中的表达量,并用免疫组织化学染色方法对AQP7蛋白进行组织表达及定位分析。结果表明,九龙牦牛AQP7基因CDS区序列长度为993 bp,编码330个氨基酸,生物信息学分析发现,AQP7为稳定的疏水性蛋白。进化树结果显示,九龙牦牛AQP7基因与黄牛的亲缘关系最近,同源性为99.7%。AQP7基因在九龙牦牛心脏和肌肉表达量较高,极显著高于肾脏、肝脏、脾脏、肺脏、小肠和瘤胃(P<0.01)。免疫组化结果显示,AQP7蛋白主要分布在九龙牦牛心脏和肌肉的肌细胞以及肾脏近曲小管中,且在心脏、肌肉和肾脏中的表达显著高于肝脏、脾脏、肺脏、小肠和瘤胃(P<0.05)。结果为深入研究AQP7基因在牦牛低氧适应性中的生理功能和能量代谢机制提供了基础数据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
殷实 王斌 曲尼拉姆 杨柳青 袁钰洁 李键
旨在克隆牦牛HDAC2(Histone deacetylase 2)基因,预测分析HDAC2蛋白的结构和特性,并检测HDAC2的mRNA在牦牛不同组织以及不同发育阶段睾丸中的表达。将牦牛按年龄划分为幼年组(0.5～1岁)、成年组(4～5岁)及老年组(7～9岁),采集成年组牦牛肝脏、肾脏、肺、胃、脾脏、脑、心脏和卵巢组织以及3个时期的牦牛睾丸组织,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得牦牛HDAC2的基因序列,使用生物信息学的方法预测该基因的序列同源性以及其编码蛋白质的氨基酸序列和结构;通过实时荧光定量PCR检测HDAC2的mRNA在牦牛不同组织中的表达,通过RT-PCR检测HDAC2的mRNA在牦牛不同发育阶段睾丸中的表达,利用色素原位杂交技术检测HDAC2 mRNA在成年牦牛睾丸中的定位。结果表明,HDAC2基因的开放阅读框包含1 467个碱基,编码488个氨基酸,其基因序列在哺乳动物中高度保守。结构预测表明,HDAC2是一个脂溶性疏水蛋白,具有一个组蛋白去乙酰化酶结构域。该基因的mRNA在卵巢和睾丸中的表达较高。HDAC2的mRNA在幼年期牦牛睾丸中的表达显著高于其他时期,在牦牛睾丸中HDAC2的mRNA定位在除精细胞之外的各类细胞中。克隆得到牦牛HDAC2基因序列并明确了该基因在睾丸中的时序表达模式,对于深入探讨HDAC2在牦牛睾丸发育及精子发生中发挥的作用提供了一定的试验数据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
符梅 熊显荣 兰道亮 李键
【目的】克隆与表达牦牛β-防御素5(BNBD5)基因,检测其重组蛋白的体外抗菌活性。【方法】采用RT-PCR方法从牦牛肺组织中扩增BNBD5基因成熟肽编码区,根据已发现的哺乳动物β-防御素5和部分禽β-防御素5的序列构建遗传进化树。将BNBD5基因亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)的BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET32a-BNBD5。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG于37℃进行诱导表达,SDSPAGE检测融合蛋白的表达情况,并对该重组蛋白进行纯化,测定其体外抑菌活性。【结果】克隆得到了BNBD5基因成熟肽编码片段,其长度为138bp,编码45个氨基酸...
关键词：
牦牛 β-防御素5 重组蛋白 抑菌活性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
徐业芬 孙宏宇 索朗斯珠 牛家强 贡嘎 郭敏 王玉恒 张鹏宇 张雷 旦巴次仁 王刚 罗润波
为了解牦牛BoLA-I基因mRNA组织表达谱,并探索可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,利用RT-PCR技术对牦牛BoLA-I基因mRNA在牦牛肝、脾、肺、肾、肌肉、卵巢、小肠、下颌淋巴结、大肠和肠系膜淋巴结等10种组织的表达谱进行分析,再通过Targetscan和miRBase软件来预测可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,检测其在10种牦牛组织中的表达情况。结果表明:BoLA-I基因mRNA在检测的10种牦牛组织中均有表达,尤其在免疫器官组织中广泛表达,在牦牛的肠系膜淋巴结组织表达水平极显著高于小肠和大肠组织(P<0.01);预测到的可能靶定牦牛BoLA-I基因的miRNA共有28个,从中选择了6个进行组织表达谱分析,发现bta-miR-759、bta-miR-142-5p、bta-miR-665、bta-miR-2322-5p、bta-miR-199a-3p与牦牛BoLA-I基因共表达;除卵巢外,bta-miR-219-5p在其他组织中均有表达,且在肝脏组织中的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01)。bta-miR-142-5p在肠系膜淋巴结中表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。由此推测,牦牛BoLA-I基因及其预测的miRNA可能在牦牛组织中起重要作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
柴志欣 王会 王吉坤 王嘉博 钟金城
牦牛与普通牛的种间杂种犏牛雄性不育机理一直是畜牧科学研究的热点之一,对牦牛、犏牛睾丸组织特异表达基因的比对分析,可为犏牛雄性不育分子调控机制提供基因参考。通过对牦牛及杂种犏牛TB-RBP基因进行克隆,并利用实时荧光定量PCR技术对候选基因进行组织表达差异分析。结果表明,克隆获得牦牛TB-RBP基因CDS全序列873 bp,犏牛TB-RBP基因部分CDS区序列587 bp;系统进化树显示不同物种TB-RBP基因编码区序列高度保守,遗传相似性较高;蛋白功能预测TB-RBP蛋白属于Translin结合蛋白家族,对精子发生等生物过程具有重要调控作用。TB-RBP基因在犏牛和牦牛的睾丸组织中均有表达,TB-RBP基因的表达水平在牦牛与犏牛组间差异显著(0.01
[期刊] 华北农学报
[作者]
向娅 柴志欣 王吉坤 信金伟 王会 王嘉博 武志娟 钟金城 姬秋梅
为了克隆TNNI基因家族,预测其蛋白结构和功能,并分析其在牦牛不同组织中的表达差异,以0.5岁健康的类乌齐牦牛为试验材料,采用RT-PCR技术克隆牦牛肌钙蛋白Ⅰ基因家族的CDS区序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术检测TNNI基因家族各成员的mRNA表达水平。结果表明,TNNI1、TNNI2和TNNI3基因CDS区大小分别为564,549,639 bp,分别编码187,182,212个氨基酸残基。预测分析结果显示:TNNI基因家族编码的蛋白质均为偏碱性蛋白,蛋白结构不稳定,均无跨膜结构域,无信号肽,属非分泌型蛋白;二、三级结构均以α-螺旋为主,均含有肌蛋白超家族保守结构域。系统进化树分析表明:类乌齐牦牛TNNI1基因与水牛的亲缘关系最近,其次是绵羊、黄牛,与小鼠亲缘关系最远;TNNI2和TNNI3均与黄牛、水牛的亲缘关系较近,与其他亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果显示,TNNI1和TNNI2基因在臀肌中的相对表达量最高,且TNNI1基因在心脏、肝脏和肺脏中的表达量显著高于TNNI2基因(P<0.05),TNNI3基因在心脏中表达量较高,而在肺脏、臀肌和肝脏中表达量低。
关键词：
牦牛 肌钙蛋白Ⅰ基因家族 克隆 组织表达
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王立斌 王强龙 潘阳阳 黄振华 赵天 丁天翊 刘敏清 崔燕 余四九
【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor,DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径<3 mm,直径3～8 mm,直径>8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(q RT-PCR)检测DBI基因m RNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting,WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry,IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因m RNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P<0.05),表达量随着牦牛卵泡直径的增大而显著上升。DBI蛋白在牦牛成熟卵泡中的颗粒细胞、卵丘细胞均有分布;在卵母细胞中主要定位于细胞质、细胞核。【结论】DBI在类固醇激素合成与卵母细胞成熟过程中具有重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
栗瑞兰 张通 范晓梅 欧阳效晴 张春强 曹俊伟 张家新
【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶－５（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｔｙｐｅ－５，ｇｐｘ５）在成年绵羊附睾的表达特征以及ｇｐｘ５蛋白在附睾中的定位，为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于－８０℃冰箱，采用实时荧光定量ｐＣｒ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ的方法，对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的ｇｐｘ５表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于４％多聚甲醛溶液中２４ｈ，按照石蜡切片的方法制作组织切片。用ｇｐｘ５特异性抗体孵育组织切片，利．．．
关键词：
绵羊 附睾 GPX5 基因表达 蛋白定位
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高绍帅 唐紫雯 黎汕 程华琴 殷实 李键
[目的]克隆麦洼牦牛干扰素-τ(IFN-τ)基因,并检测其在麦洼牦牛不同组织和不同发情周期卵巢组织中的表达水平。[方法]采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆麦洼牦牛IFN-τ基因,测序后采用不同的生物信息学软件分析其同源性,并预测IFN-τ蛋白的结构和功能。以GAPDH基因为内参基因,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测麦洼牦牛心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、肌肉组织和处于不同发情周期(卵泡期、红体期、黄体期)卵巢组织中IFN-τ基因mRNA的表达水平。[结果]通过RT-PCR扩增得到长598 bp的麦洼牦牛IFN-τ基因,其开放阅读框大小为564 bp,编码氨基酸187个。IFN-τ蛋白二级结构中占比最大的为α-螺旋(50.8%),共有15个磷酸化位点,为整体带负电荷、不稳定的亲水性蛋白,其基因序列与大额牛、黄牛有较高的同源性。组织表达谱分析结果表明,麦洼牦牛小肠、肝脏组织中IFN-τ基因mRNA表达水平显著高于其他组织(P<0.05),卵泡期卵巢组织IFN-τ基因mRNA表达水平显著高于红体期和黄体期(P<0.05)。[结论]克隆了麦洼牦牛IFN-τ基因,该基因在麦洼牦牛卵泡期卵巢组织中的表达水平最高,提示其可能在卵巢早期发育过程中有一定作用。
关键词：
干扰素-τ 麦洼牦牛 卵巢 组织表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
岳永起 华永琳 贾逸格 李键 熊燕 熊显荣
以牦牛为试验对象,旨在克隆牦牛CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha(CEBPα)基因,预测其蛋白结构和功能,同时分离得到牦牛脂肪细胞,并检测CEBPα在牦牛不同组织中的表达及牦牛脂肪细胞诱导分化过程中的表达。采集成年牦牛(4岁)的心、肝、脾、肾、胃、小肠、皮下脂肪、内脏脂肪和肌肉组织,利用PCR技术获得CEBPα基因序列,得到其CDS序列;生物信息学的方法预测该基因的序列同源性及蛋白结构;通过实时荧光定量PCR检测CEBPα在牦牛不同组织的表达;通过胶原酶消化法,分离得到牦牛前体脂肪细胞;RT-PCR检测CEBPα在诱导分化0,3,6,9 d的表达模式。结果表明,牦牛CEBPα基因的CDS序列长度为645 bp,编码214个氨基酸。牦牛CEBPα基因与普通牛(Bos taurus)的同源性相对较高,核酸同源性为99.73%,氨基酸同源性为99.19%。构建系统进化树的结果显示,牦牛与普通牛和绵羊的相似性较高。CEBPα蛋白为具有跨膜结构、发生磷酸化/去磷酸化的不稳定亲水性蛋白,蛋白质的二级结构以α螺旋(27.10%)和无规则卷曲(67.29%)为主。qRT-PCR结果显示,CEBPα基因在牦牛皮下脂肪组织中表达最高,在肾、脾和内脏脂肪组织中低表达。CEBPα在牦牛脂肪细胞诱导分化过程中表达量逐渐升高。本试验克隆获得了CEBPα的CDS区序列,确定了其在牦牛各个组织中的表达量并明确了该基因在牦牛脂肪细胞诱导分化过程中的表达模式。为揭示CEBPα基因在牦牛脂肪组织和脂肪细胞中的功能提供基础数据。
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