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[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱友峰 岳寿松 宋爱荣 游银伟 尤升波 王翠萍
利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda。结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30～40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH 7.0～9.5的范围内具有较好的稳定性。金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2+、Fe3+能完全抑制酶活;1%巯基乙醇对酶具有明显激活作用。EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶。
关键词：
角蛋白酶 嗜麦芽窄食单胞菌 性质 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
黄小丽 汪开毓 耿毅 苏秀梅 陈德芳
采用硫酸铵盐析,DEAE Sephadex A-50凝胶层析等方法从嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物中提纯了一种分子量为45.7ku的单一多肽蛋白酶。该酶对小鼠和斑点叉尾鮰具有明显的致死作用,其LD50分别为4.33μg.g-1体重和3.49μg.g-1体重。酶的最适温度为20℃,热稳定性差,100℃作用15min酶活完全丧失,最适pH为9.0,PMSF对酶活无影响,部分金属离子如Ca2+、Hg2+、Cu2+能使酶活性明显下降,而Co2+对酶有一定程度的激活作用,EDTA能完全抑制酶活性,表明该酶为一种金属蛋白酶。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
柯野 谢天涵 梅颖诗 张敏 黄湘 屈奇奇
从羽毛废弃物的排水沟污泥中采集污泥样品,通过富集培养、分离、纯化、发酵筛选,获得一株降解羽毛效果最佳的RM菌株.对该菌株进行形态特征、16S rDNA序列以及生理生化试验初步鉴定RM菌株为Deinococcus actinosclerus.该菌株在4%羽毛含量条件下,培养7 d后对羽毛的降解率高达60%,且羽毛水解产物含有多种氨基酸,如丝氨酸、天冬氨酸.RM菌株产生的胞外蛋白酶以丝氨酸蛋白酶为主,也含有天冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶.粗酶液最适反应温度为45℃,最适pH为10.0;金属离子Cu~(2+)、Mg~(2+)能够提高蛋白酶活性,而Ca~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)及蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟、乙二胺四乙酸、亮抑蛋白酶肽对酶活性有抑制作用.通过以上结果可知,RM菌株对羽毛的高效降解具有较高的潜在应用价值.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
许佳惠 尹雅洁 李欣悦 柳凯 梁运祥 赵述淼 胡远亮
将Brevibacillus brevis US575角蛋白酶基因kerUS进行密码子优化,并在毕赤酵母GS115中表达,以提高角蛋白酶产量。结果表明:优化的基因可在毕赤酵母中成功表达,重组角蛋白酶的分子质量约30 ku,最佳反应条件为pH 9.5和60℃,1 mmol/L的Mn~(2+)、Ba~(2+)对角蛋白酶活性有促进作用。此外,重组角蛋白酶易降解干酪素和β角蛋白(羽毛粉),酶促反应最大速度v_(max)=0.019 g/(L·min),K_m=4.64 g/L,比活力=440 U/mg。研究获得的产角蛋白酶重组毕赤酵母具有较好的应用前景。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李焕荣 陈怀青 陆承平
嗜水气单胞菌（Ａｈ）Ｊ－１株的液体培养物上清在５６℃或与乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）作用，其胞外蛋白酶（ＥＣＰａｓｅ）的活力有不同程度的下降。将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后，加ＡｈＪ－１上清作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，３７℃原位消化，染色，显示上清中存在至少５种分子量不同的蛋白酶。ＡｈＪ－１株的培养上清经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析，获得一种纯化的蛋白酶。不经２－巯基乙醇处理后，分子量约为５４０００，而经２－巯基乙醇处理的样品，分子量为３５０００，且酶活性丧失。该酶对热稳定，ＥＤＴＡ可抑制其活性，ＰＭＳＦ对其无影响。...
关键词：
嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 纯化 特性分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
季金殿 岳寿松 黄亦钧 游银伟 尤生波 葛海涛 牛钟相
从长期堆积羽毛废弃物的土壤中分离到1株高效降解羽毛角蛋白的菌株JJD-1,该菌株能在以羽毛为唯一碳氮源的培养基上生长。克隆了该菌的16S rDAN序列(GenBank接受号:FJ765512),并以其同源性为基础构建了相关属种的系统发育树。结果表明,16S rDAN序列全长1489 bp,BLAST显示该菌株与微杆菌属同源;JJD-1菌株在进化关系上也与微杆菌属(Microbacterium)聚成一族。特别是与Microbacteriumsp.YK18的同源性最高,其序列相似性达99%。结合形态学、生理生化特征,将其鉴定为微杆菌属,命名为Microbacteriumsp.JJD-1。该研究结果...
关键词：
羽毛角蛋白降解菌 鉴定 系统发育分析
[期刊] 中国水产科学
[作者]
于安澜 王力 陈子末 雷明滔 陶青燕 王岩
本研究评价了利用羽毛粉作为大黄鱼(Larimichthyscrocea)饲料鱼粉替代蛋白源的潜力,并探讨了角蛋白酶(DP-100)和γ射线辐照对替代效果的影响。采用双因素实验设计,基础饲料BD鱼粉含量为35%,饲料I0E0利用水解羽毛粉替代BD中30%的鱼粉。在饲料I0E0中,添加1%DP-100 (饲料I0E1),或用γ射线辐照羽毛粉替代水解羽毛粉(饲料I1E0),或同时添加1%DP-100和用γ射线辐照羽毛粉替代水解羽毛粉(饲料I1E1)。在1 m×1 m×2 m的实验网箱中进行10周饲养实验。实验鱼初始体重为(19.7±0.2) g (x±SD, n=15),放养密度为每口网箱40尾鱼。实验结果表明,添加1%DP-100显著影响实验结束时鱼体重(FBW)、增重(WG)和摄食量(FI)(P0.05)。添加DP-100、用辐照羽毛粉替代水解羽毛粉以及二者交互作用对饲料系数(FCR)、饲料贮积效率(氮:NRE;磷:PRE;能量:ERE)、肥满度、肝体比(HSI)、脏体比(VSI)、全鱼组成、单位鱼产量鱼粉消耗量(RCP)以及养殖废物(氮和磷)排放量无显著影响(P>0.05)。添加DP-100的E1组(I0E1和I1E1)鱼的FI、FBW和WG高于未添加DP-100的E0组(I0E0和I1E0)(P<0.05)。摄食饲料BD的鱼的WG高于摄食饲料I0E0和I1E0的鱼(P0.05);摄食饲料I0E0、I1E0、I0E1和I1E1的鱼RCP低于摄食饲料BD的鱼(P0.05)。上述结果表明添加DP-100有利于改善大黄鱼对饲料中羽毛粉的利用,而γ射线辐照处理未明显改善水解羽毛粉作为鱼粉替代蛋白源的效果。在添加1%DP-100的前提下,通过添加8.5%的水解羽毛粉可将大黄鱼饲料鱼粉含量降低至24.5%。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈吉祥 刘霜 李筠 王祥红 杜宗军 于德华 纪伟尚 徐怀恕
从山东省莱州海区自然发病的花鲈 (Lateolobraxjapanicus)体内分离到 1株致病性鳗弧菌 ,经硫酸铵盐析、DEAE SepharoseFastFlow和Sephadex G10 0凝胶层析等方法从其培养液中分离纯化了 1种胞外蛋白酶。用SDS PAGE电泳测得蛋白质的分子量为 36 7kD ,酶的最适温度为 5 0℃ ,对热不稳定 ,70℃ 15min完全失去活力 ;最适pH为 7 0 ;1mmol/L的PMSF对酶活性无影响 ,部分金属离子如Cu2 + 、Fe2 + 、Fe3 + 、Zn2 + 对酶活力有抑制作用 ,而Ca2 + 对酶有一定程度的激活作用 ,1mmol/LE...
关键词：
鳗弧菌 胞外蛋白酶 分离纯化 理化性质
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
舒伟学 马怡茗 李晓霞 张晋龙 柯欣 颜霞 颜华 贾良辉
【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物，为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法，以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选，筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA序列分析，对菌株进行分类鉴定，并探讨其最适发酵条件。利用硫酸二乙酯（DES）和亚硝基胍（NTG）对目的菌株进行诱变，确定最适诱变条件，并进行原生质体融合，通过基因组改组选育角蛋白酶高产菌株。【结果】分离筛选到1株具有较强羽毛降解能力的菌株，该菌落圆形凸出，革兰氏染色呈阳性
关键词：
角蛋白酶 节杆菌属 诱变 基因组改组
[期刊] 水产学报
[作者]
王海英 薛长湖 孙谧 王跃军 王清印
以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2+可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2+、Zn2+、Ag+、Fe3+则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂...
关键词：
大菱鲆 肠蛋白酶 纯化 性质
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李冰峰 权静 顾浩 王益明
为探讨均四甲苯的微生物处理方法,研究了本实验室筛选的蛋白酶生产菌J6对均四甲苯的降解特性。将J6接入装有50mL发酵液的250mL摇瓶中,发酵液中均四甲苯含量为50g.L-1。将摇瓶置于30℃,180r.min-1的摇床中培养,分析均四甲苯对微生物生长进程的影响,以及微生物生长过程中均四甲苯的含量变化。结果表明:该菌在含有均四甲苯的培养基中能稳定生长,且比不含均四甲苯的培养基具有更长时间的稳定生长期(在实验室条件下长达200h);对发酵液的分析表明,该菌在发酵11h后,发酵液中均四甲苯的含量迅速降至0.746g.L-1,24h内降解率达91.6%。可见,J6菌能有效降解均四甲苯,有望将该菌用于...
关键词：
均四甲苯 蛋白酶生产菌 废水处理 降解
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王秋影 廖美德 王刘庆 李俊彬 林志峰 陈志强
【目的】对淡紫拟青霉PL-HN-16角蛋白酶的酶学特性进行初步研究。【方法】以鸡毛(黄色和黑色)、鹅毛、猪毛角蛋白为发酵底物,并作为培养基中的惟一氮源,观测发酵液的变化及培养液中的角蛋白酶活性,同时以鹅毛为发酵底物,对淡紫拟青霉角蛋白酶粗酶的最适作用温度和pH进行了初步研究。【结果】PL-HN-16对鸡毛、鹅毛、猪毛均能降解,PL-HN-16角蛋白粗酶最适作用温度为40℃、最适pH为8.0。【结论】在最佳作用温度与pH条件下,PL-HN-16角蛋白酶活性为41U/mL,PL-HN-16对不同发酵底物的降解活性不尽相同。
关键词：
淡紫拟青霉 角蛋白酶 酶学特性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孟喜龙 刘永杰 陆承平
对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化。结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量。嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g.L-1,蔗糖5 g.L-1,NaCl 2.5 g.L-1,K2HPO42.0 g.L-1,Tween-80 1 g.L-1,初始pH为7.5,28℃培养48 h。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林建城 王国玲 闵志勇
【目的】从日本鳗鲡(Anguilla japonica)肠道中分离纯化蛋白酶并分析其酶学性质,为日本鳗鲡饲料的科学研制提供理论依据。【方法】通过硫酸铵沉淀分级分离及Sephadex G-100和Sephadex G-75两级凝胶柱层析纯化日本鳗鲡肠道蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定蛋白酶纯度和亚基分子质量,利用凝胶层析法测定酶的分子质量,用等电聚焦电泳法测定酶的等电点,并研究以酪蛋白为底物时蛋白酶催化反应的动力学参数及pH、温度、金属离子和修饰剂对蛋白酶活力的影响。【结果】日本鳗鲡肠道蛋白酶亚基分子质量为65.3ku,酶分子质量为260.3ku,等电点为8.23;...
关键词：
日本鳗鲡 蛋白酶 分离纯化 酶学性质
[期刊] 淡水渔业
[作者]
耿毅 汪开毓 陈德芳 黄小丽
采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A50离子交换层析和Sephadex G100凝胶层析对嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的溶血素进行了分离、纯化并对其生物学活性进行了研究。结果显示:嗜麦芽寡养单胞菌产生一种分子量为20.76 KD的单一多肽溶血素。该溶血素对斑点叉尾、云斑、鲫、人、小白鼠和兔等多种动物红细胞具有溶血活性;家兔肠袢试验显示其能致兔回肠积液,具有肠毒性;致Vero细胞形态改变,具有细胞毒性,对Vero细胞的TCID50为0.126μg。
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