闹羊花素 Ⅲ (Rhodojaponin Ⅲ ,简称R Ⅲ )能显著降低 5龄菜青虫血淋巴和肌肉海藻糖含量。R Ⅲ以每虫 1～ 10 μg处理试虫后 6 0h ,血淋巴海藻糖酶活性明显受抑制。R Ⅲ对肌肉海藻糖酶活性的影响依剂量不同而异。处理后 6 0h内 ,10 μg处理时无明显影响 ,3～ 5 μg处理则有可逆性激活作用 ,1μg处理则在 6 0h内保持激活作用

【目的】研究海藻糖及海藻糖酶在B型烟粉虱寄主谱扩张及与温室粉虱的竞争适应过程中的作用。【方法】以番茄饲养的B型烟粉虱与温室粉虱转移取食嗜好(棉花、甘蓝)或非嗜好(玉米)寄主植物后,其体内海藻糖含量及海藻糖酶活性的变化和响应。【结果】改变寄主会使B型烟粉虱和温室粉虱的海藻糖含量降低,其中棉花的作用最为明显,分别比对照减少了33%和25%;将植物种类转换为B型烟粉虱嗜好、温室粉虱亦可利用的寄主棉花或B型烟粉虱嗜好而温室粉虱非嗜好的寄主甘蓝,两种粉虱海藻糖含量的变化基本一致,而在两种粉虱非嗜好寄主玉米上B型烟粉虱(112.6%)较温室粉虱(60.8%)的恢复能力强、稳定性能好。尽管改变寄主对两种粉虱...

测定了闹羊花素-Ⅲ对斜纹夜蛾4龄幼虫的拒食、触杀和胃毒作用。结果表明:闹羊花素-Ⅲ的杀虫方式主要以拒食和胃毒作用为主,触杀作用较弱;闹羊花素-Ⅲ处理斜纹夜蛾4龄幼虫24 h后,叶碟法测得的AFC50为16.63μg/mL,以叶片夹毒法测得的LC50为66.56μg/mL,以点滴法测得LD50为每头30.72μg,Potter喷雾法测得的LC50为590.35μg/mL。观察结果还表明,闹羊花素-Ⅲ能显著降低斜纹夜蛾幼虫的取食量、幼虫总糖量和血淋巴总糖含量。

【目的】海藻糖酶（ｔｒｅｈａｌａｓｅ）可专一性地将一分子海藻糖水解成为两分子葡萄糖，在昆虫能量代谢和几丁质合成过程中发挥重要作用，因此，海藻糖酶已成为害虫控制的潜在靶标。本研究以重要农业害虫飞蝗（ｌｏｃｕｓｔａ ｍｉｇｒａｔｏｒｉａ）为材料，探讨海藻糖酶基因的分子特性及生理功能，为飞蝗的有效治理提供理论依据。【方法】通过搜索飞蝗转录组和基因组数据库，获得４个海藻糖酶基因ｃＤＮａ全长序列，运用ｂｌａｓｔ、ｔｍｈｍｍ和ｓｉｇＮａｌＰ等相关软件分析其序列特征；利用ｃｌｕｓｔａｌＷ进行海藻糖酶全长氨基酸序列比对，ｍｅｇａ７构建海藻糖酶的系统进化树；运用ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａＮｓｃｒｉＰｔｉｏＮ－ｑｕａ．．．

海藻糖作为柞蚕体内的血糖，能够与蛋白质形成稳定复合物，越冬期保护机体蛋白质免受损伤，并参与营养储存与代谢过程，对柞蚕滞育-越冬生理进程具有重要意义。测定了柞蚕蛹解除滞育后海藻糖含量、相关酶活力及基因表达量，比较不同保存温度对柞蚕越冬蛹海藻糖含量的影响，旨在通过改变环境条件，增加育种选择压，获得海藻糖含量更高的育种材料。结果表明：“J”材料在低温保存的海藻糖含量高于常规保存，表明“J”的海藻糖受温度变化影响更大，而“D”材料变化不明显，雄蛹海藻糖含量大于雌蛹；海藻糖酶活性在低温保存环境高于常规保存环境，“D”材料在不同保存环境下表现出雄蛹海藻糖酶活力大于雌蛹的规律。“J”材料正好相反，不同保存环境下表现出雌蛹大于雄蛹的规律；ApTreh1A,ApTreh1B和ApTreh2和ApTPS这4种基因表达量测定结果显示，低温保存环境下，只有“D”材料的雄蛹体内ApTreh1A的表达量和雌蛹的ApTreh1B较其他处理有差异，其他基因差异不显著，但“D”相对表达量更高。试验结果证明改变保存温度能够影响海藻糖等物质的含量，达到提高育种选择压的目的，有利于筛选海藻糖含量高的柞蚕材料及亲本组配形式，为柞蚕新品种选育提供技术辅助。

【目的】明确高温对截形叶螨（Tetranychus truncatus）海藻糖转运蛋白基因的影响，为有害生物的绿色防控提供理论依据。【方法】根据高温诱导下的截形叶螨转录组数据获取两条海藻糖转运蛋白基因TtTret1-like和TtTret1的CDS序列和蛋白氨基酸序列；利用ExPASy、ProScale、MEGA等分析工具对TtTret1-like和TtTret1进行生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术分析TtTret1-like和TtTret1在截形叶螨不同发育阶段及不同高温（38、42、46、50℃）处理下的表达特性；采用微量法测定不同高温处理下截形叶螨的海藻糖含量；利用RNA干扰（RNAi）技术沉默TtTret1-like和TtTret1，探究其在应对高温中的功能。【结果】生物信息学分析表明，TtTret1-like和TtTret1的CDS全长分别为1 389和1 569 bp，分别编码463和523个氨基酸，预测的蛋白分子量分别为50 189.03和57 358.10 Da，等电点分别为8.87、8.70。TtTret1-like和TtTret1均为碱性氨基酸和疏水性氨基酸且同属于不稳定蛋白；二级结构预测为螺旋和卷曲结构；两个海藻糖转运蛋白均具有协同转运蛋白超家族（major facilitator superfamily,MFS）的保守结构域及12个跨膜结构域。氨基酸序列相似性和系统发育分析表明，TtTret1-like和TtTret1与蛛形纲其他物种海藻糖转运蛋白序列的一致性较高，尤其与二斑叶螨（T. urticae）的亲缘关系最近。TtTret1-like在卵期、幼螨期和成螨期的表达量较高；TtTret1在幼螨期高表达。随处理温度的升高，TtTret1-like的表达量大致呈上升趋势，在50℃时表达量最高；而TtTret1的表达量随处理温度的升高先上升后下降，在42℃时表达量达到最高；高温胁迫后截形叶螨体内的海藻糖含量显著升高。沉默TtTret1-like和TtTret1 48 h后，截形叶螨体内整体海藻糖含量上升，但血淋巴海藻糖含量下降；用50℃高温处理截形叶螨2 h，然后恢复至96 h时，截形叶螨存活率分别为11%和46.67%，显著低于对照组。【结论】截形叶螨TtTret1-like和TtTret1在其抵御高温胁迫过程中具有重要的作用。

用闹羊花素 -Ⅲ处理菜粉蝶 5龄幼虫后 ,观察试虫血淋巴总量及其蛋白质、总糖、甘油酯含量的变化。结果表明以每虫 1～ 5 μg处理后 6 0h ,血淋巴总量和蛋白质含量均降低 4 0 %～ 5 0 % ,总糖含量降低 14 %～30 % ,甘油酯含量可降低 77%。

对不同滞育阶段麦红吸浆虫海藻糖酶和山梨醇脱氢酶的活性进行了测定。结果表明,麦红吸浆虫落土滞育前,其幼虫的海藻糖酶活性最高,入土后其活性迅速下降,到9月中旬活性开始上升,随后呈下降趋势,之后又迅速升高至滞育年周期中的最高水平;不同滞育阶段麦红吸浆虫从脱离麦穗到当年11月以前,一直未检测到山梨醇脱氢酶活性,翌年2~4月,山梨醇脱氢酶的活性急剧增加,至04-20达到整个滞育期间的最高值(0.504 2OD/(mL.m in));相同滞育阶段,裸露幼虫海藻糖酶活性和山梨醇脱氢酶活性较结茧幼虫略高,并表现出相同的变化趋势;不同滞育年限麦红吸浆虫海藻糖酶活性和山梨醇脱氢酶活性无明显差异。

【目的】西花蓟马（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）是中国的重要外来入侵和检疫性害虫，对各地的蔬菜和花卉造成了巨大的经济损失。明确极端高温（４５℃）对西花蓟马存活率、繁殖力以及体内海藻糖、山梨醇含量的影响，为西花蓟马的防治提供理论依据。【方法】设置４５℃条件下高温热激西花蓟马当代成虫、２龄若虫２ｈ，经过２４ ｈ变温模式２２℃（４ ｈ）－２５℃（８ ｈ）－２８℃（４ ｈ）－２５℃（８ ｈ）培养后再进行一次４５℃２ ｈ的热激处理。研究热激处理后其亲代、Ｆ＿１代和Ｆ＿２代的种群参数（亲代各虫态存活率、雌成虫寿命，Ｆ＿１和Ｆ＿２代种群数量、存活率、性比）以及２龄若虫和成虫体内海藻糖．．．

为探索柞蚕蛹糖代谢与种茧耐贮性之间的关系，以期为选育适宜的二化一放品种提供理论依据，以1个一化性品种（辽8）和7个二化性品种（大9、凤久、抗大、辽蚕527、辽蚕582、墨玉和青黄1号）的种茧为试验材料，分阶段连续测定并比较分析在低温贮藏期种茧蛹体脂肪体糖原和血淋巴海藻糖含量的变化情况。结果表明：低温贮藏期，糖类含量变化趋势在各化性品种间表现较为一致，血淋巴海藻糖含量呈上升-下降-上升的波动变化，峰值出现时间及水平各化性品种间具有显著性差异，脂肪体糖原的变化状态与之呈现明显的此消彼长；相较于春制种出库期，二化一放制种出库期各化性品种种茧血淋巴海藻糖含量均发生显著下降，一化性品种下降后含量水平显著高于二化性品种，二化性品种间也存在显著性差异；皮尔逊相关系数表明脂肪体糖原和血淋巴海藻糖含量之间呈线性相关关系，一化性品种呈极显著负相关，二化性品种呈显著性负相关，判定系数进一步表明二化性品种间二者相关的密切程度也具有差异，说明海藻糖含量及其在低温贮藏期与糖原含量的相关程度可作为衡量柞蚕种茧耐贮性的指标，以之为参考指标，测试的二化性品种中，大9、凤久、辽蚕527较为耐低温贮藏。

采用比色法测定闹羊花素 Ⅲ (简称R Ⅲ )对菜粉蝶 5龄幼虫血淋巴和中肠酯酶的活性 ,并分析了酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱。活体试验结果表明 ,R Ⅲ以每虫 5 μg定量饲喂或以 2 0mg/L浸渍叶碟后饲喂试虫 ,能显著降低血淋巴和中肠酯酶比活力 ,以每虫 1～ 3μg处理或 5mg/L浸叶饲喂处理时 ,对酶活性的影响取决于处理剂量和时间。PAGE表明 ,R Ⅲ以每虫 5 μg处理 ,酯酶酶谱发生明显变化 ,主酶带明显抑制

建立癸氧喹酯壳聚糖-海藻酸钠微囊中癸氧喹酯的HPLC含量测定方法。采用破囊液(0.2 mol/L NaHCO3和0.06 mol/L Na3C6H5O7·2H2O,pH=7.8~8.2)对癸氧喹酯壳聚糖-海藻酸钠微囊进行破囊,破囊后用甲醇和三氯甲烷混合溶液(4∶1)超声提取癸氧喹酯。HPLC检测方法采用Agilent ZORBAX 80A Extend-C18色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸水溶液(75∶25)为流动相;检测波长为267 nm;流速为1 mL/min。结果表明,所采取的破囊方法破解效率高,微囊破解完全。方法精密度与准确度表明,癸氧喹酯浓度在0.05~10μg/mL的范围内线性关系良...

【目的】在前期克隆了绿盲蝽水溶性海藻糖酶(ALTre-1)基因的基础上,以获得具有酶活性的重组蛋白,明确酶促反应的最佳pH值及最适温度,为绿盲蝽海藻糖酶分子调控机制及其抑制剂的应用研究奠定基础。【方法】将含有绿盲蝽ALTre-1基因的T载体经Nde I和Not I双酶切,构建ALTre-1基因原核表达载体(pET28a-ALTre-1),表达载体经诱导表达和蛋白纯化,获得ALTre-1功能区纯化蛋白。在蛋白浓度为0.3 mg·mL-1的条件下,以海藻糖为底物,对纯化得到的重组Tre-1蛋白进行活性检测,确定其酶促反应的最佳pH值和最佳温度。【结果】ALTre-1基因在大肠杆菌中BL21中能够高...

【目的】昆虫海藻糖酶能够调控几丁质代谢并控制蜕皮过程。本研究通过TRE表达被抑制后,检测褐飞虱(Nilaparvata lugens)蜕皮状况、几丁质含量及几丁质合成酶(chitin synthase,CHS)和几丁质酶(chitinase,Cht)基因表达情况,探究不同的海藻糖酶(trehalase,TRE)在褐飞虱表皮中对几丁质代谢的调控作用。【方法】采用RNAi技术,以实验室饲养种群褐飞虱为材料,通过向其体内注射双链RNA(dsRNA)分别抑制单个海藻糖酶基因或同时抑制多个海藻糖酶基因,注射48 h

【目的】克隆小峰熊蜂(Bombus hypocrita)可溶型海藻糖酶基因(soluble trehalase,Tre-1)全长c DNA序列,预测该基因及其编码蛋白的理化性质,明确该基因在小峰熊蜂不同组织及不同发育时期的表达特性,为研究该基因在小峰熊蜂生长发育中的生物学功能奠定基础。【方法】根据地熊蜂(B.terrestris)和B.impatiens可溶型海藻糖酶基因Tre-1编码蛋白的保守区序列,利用Primer Premier 5.0设计简并引物扩增得到小峰熊蜂保守区片段;随后根据该片段设计基因特异性引物,用RACE方法获得5'端和3'端片段。在此基础上,根据RACE扩增所得片段和保守...