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[期刊] 水产学报
[作者]
杨先乐 贺路 艾晓辉 周建光 柯福恩
建立了间接红细胞凝集反应检测中华鳖血清抗体的方法。试验证明，致敏抗原菌体浓度为３×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、ＢＳＡ浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ，致敏红细胞浓度２．５％时（无论是人还是绵羊红细胞），本方法能获得最敏感的结果。加入稳定剂后的致敏红细胞，在８０ｄ内检测结果没有显著的差异。本试验测得该方法的灵敏度为１３．４±４．２，而且证明本方法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和重复性。
关键词：
中华鳖,抗体,间接红细胞凝集反应,检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘永夏 刘建柱 成子强 周栋 王振勇 刘海涛 王林 柴同杰
【目的】针对猪附红细胞体g1基因编码的MSG1表面粘附蛋白(rMSG1)和以此蛋白制备的多克隆抗体,建立相应的ELISA方法进行猪附红细胞体的临床检测,并进行效果评估,以获得一种猪附红细胞体感染的有效检测手段。【方法】将MSG1-pET28c_E.coli BL21菌株,在适宜的条件进行诱导表达,经菌体破碎、层析等步骤获取纯化的目的蛋白。以纯化的rMSG1制备免疫原接种小鼠,获取符合要求的多克隆抗体。以rMSG1和多克隆抗体建立ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、符合性和重复性。【结果】接种后获得了符合效价的抗血清;基于rMSG1的间接ELISA方法临床检测猪附红细胞体感染率为46.25...
关键词：
猪附红细胞体 MSG1 ELISA 建立
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50％饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子...
关键词：
中华绒螯蟹 凝集素 鼠红细胞膜吸附 纯化
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 钱江伟 邓英 孙明 喻子牛
用苏云金杆菌菌株ＨＤ－１和７２１６的伴胞晶体蛋白碱解产物作抗原，制备相应抗血清，并用协同凝集反应测定ＨＤ－１和７２１６的晶体蛋白的含量，其最低检测量分别为７８ｎｇ／ｍｌ和１３０ｎｇ／ｍｌ。用生物测定方法测定ＨＤ－１和７２１６经碱溶的晶体蛋白对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为０．４５２μｇ／ｍｌ和０．７６３μｇ／ｍｌ。两种方法测定的结果有一定的相关性。用协同凝集反应测定苏云金杆菌晶体蛋白含量比火箭免疫电泳、环状沉淀反应、双相单扩散反应的灵敏度高，比ＥＬＩＳＡ的灵敏度略低，但操作更简便、快速。
关键词：
苏云金杆菌 晶体蛋白 协同凝集反应
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
何介华 邹思湘 陆承平
纯化团头鲂抗病毒半乳糖凝集素样蛋白并自制其兔抗血清 ,在此基础上建立间接ELISA ,测定团头鲂血清中的半乳糖凝集素样蛋白的含量。结果表明 ,血清中的平均含量为 0 79mg·mL-1;团头鲂血清及纯化的团头鲂半乳糖凝集素样蛋白抗草鱼出血病病毒效价分别为 5 12和 12 8,二者中和指数分别为 4 5 7和 177。所建立的方法与经典的中和试验有较好的平行关系
[期刊] 水产学报
[作者]
郭琼林
草鱼淋巴细胞表面扫描电镜结构特征为有孔穴且较为光滑、具短小细锥状突起 ;中华鳖淋巴细胞、胸腺细胞表面扫描电镜结构特征为凹凸不平、较为光滑 ;它们均以表面凹凸不平特征的占大多数。E花环试验的光镜和扫描电镜观察显示 :草鱼淋巴细胞E花环形成不明显 ,而中华鳖淋巴细胞、胸腺细胞的成花率分别为 2 5 %～ 34%和 36 %～ 47% ,能形成花环的淋巴细胞、胸腺细胞以表面结构特征凹凸不平 (类似哺乳动物T淋巴细胞 )的为主。草鱼、中华鳖血液淋巴细胞和中华鳖胸腺细胞与抗人CD2 单克隆抗体交叉反应的免疫组化检测显示中华鳖血液淋巴细胞和胸腺细胞的CD2 阳性率分别为 2 4%和 33%。草鱼血液淋巴细...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福
用直接荧光抗体法和细菌培养法对中华鳖体内的嗜水气单胞菌的检测陈昌福（华中农业大学水产学院，武汉４３００７０）ＦＬＵＯＲＥＳＣＥＮＴＡＮＴＩＢＯＤＹＴＥＣＨＮＩＱＵＥＣＯＭＰＡＲＥＤＴＯＰＬＡＴＥＣＵＬＴＵＲＥＭＥＴＨＯＤＦＯＲＣＯＵＮＴＯＦＡｅｒｏ...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
寇亚楠 马良友 罗莹 王希春 吴金节
【目的】研究并建立大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法。【方法】首先用大豆抗原蛋白对仔猪进行致敏,然后采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法,确立待测血清判定标准,并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测。【结果】建立的ELISA方法的最佳反应条件为:11S抗原蛋白最适包被质量浓度为2.0μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间15mi...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
霍宁宁 朱伟英 高洋 杨雯昱 岳进华 赵燕清 陈德坤
【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ＥＬＩＳＡ检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板，用脱脂奶粉封闭酶标板，设置封闭时间分别为１．０，１．５和２ｈ，再用不同稀释度的血清（１∶１００，１∶２００，１∶４００和１∶８００）与之反应，以此优化间接ＥＬＩＳＡ反应条件，确定阳性结果判定的临界值。对间接ＥＬＩＳＡ方法的特异性和重复性进行考察，并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原，最佳包被抗原菌体密度为ＯＤ６００＝０．０８，血清的最佳稀释度为１∶４００，封闭时间为２ｈ，阳性血清的临界值为０．３２９。该抗体检测方法可特．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苏小东 曹瑞兵 张羽 刘文娟 陈昊 祝长青 陈溥言
鸭圆环病毒(DuCV)是新发现的一种感染鸭的最小病毒,可导致鸭淋巴组织损伤。目前尚无检测其抗体的商品化ELISA试剂盒。为了对鸭群进行DuCV血清流行病学调查,本试验用原核表达了全长DuCV Cap蛋白,Western blot检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化的重组Cap蛋白作为包被抗原,应用30份DuCV抗体阴性血清和16份DuCV抗体阳性血清,建立了检测DuCV抗体的间接ELISA方法,以此方法对从江苏地区收集的部分鸭血清样品进行检测,结果显示DuCV抗体阳性率为26.7%(38/142)。试验证明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且方法的变异系数均小于10%。结论:该方法操...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄辉 武模戈 雷红灵 赖红艳 侯建军
采用14种异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞凝集素探针对23株典型的有害赤潮生物进行了检测,结合流式细胞仪、荧光显微镜、荧光分光光度计对探针标记区分和识别目标藻的特异性和有效性进行定性和定量测定。结果表明,DBA可以把裸甲藻(Gymnodinium)GIXM01株与其他裸甲藻区分开;SBA、WGA和PNA探针能定性或定量地区分形态相似的裸甲藻GMDH01和TPXM01。PHA-E和SJA能分别将塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)ATDH04、ATMJ02株系与同种其他的藻株区分开;PNA也能从同种其他株系中识别塔玛亚历山大藻ATDH01,ATDH02,ATDH03株...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
车勇良 石运通 陈少莺 王隆柏 魏宏 吴振糜 庄向生 陈如敬 周伦江
为了检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)抗体,本试验建立了快速、敏感的ELISA诊断方法.通过比较差速离心、蔗糖不连续梯度离心、氯化铯等密度梯度离心和氯仿抽提结合超速离心等4种方法纯化PCV2抗原的包被效果,来确定最佳的PCV2包被抗原纯化方法,在此基础上,通过全病毒抗原最适包被浓度和二抗HRP-SPA稀释倍数的确定、待测血清稀释倍数的确定、封闭液浓度的确定、封闭时间的确定、HRP-SPA反应时间的确定、临界值的确定、特异性测定、重复性测定、符合率比较等,进一步优化检测PCV2抗体的间接ELISA方法.结果表明:对猪的多种病毒阳性血清进行ELISA检测,只有PCV2阳性血清呈阳性;对6份血清进行4次...
关键词：
猪圆环病毒Ⅱ型 ELISA方法 抗体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王芳 冯宇 张阁 蒋卉 朱良全 丁家波
【目的】建立高通量牛布鲁氏菌间接ＥＬＩＳＡ诊断方法，为科学高效诊断牛布鲁氏菌病提供技术手段。【方法】以提纯的猪布鲁氏菌Ｓ２株脂多糖（ＬＰＳ）作为包被抗原，采用棋盘滴定法确定了抗原包被浓度、包被液、抗原包被时间、封闭液、样品稀释液、血清稀释倍数、兔抗牛酶标抗体稀释液、兔抗牛酶标抗体稀释浓度、最佳ＴＭＢ底物反应时间等参数，初步建立了牛布鲁氏菌间接ＥＬＳＩＡ方法。并用上述条件初步建立的方法对１７６份牛布鲁氏菌病阳性血清和１３２份牛布鲁氏菌病阴性血清进行检测。检测结果经ＳＰＳＳ１７．０软件分析，构建受试者工作特征曲线（ＲＯＣ）及曲线下面积，确定敏感性和特异性；通过ＹＯｕｄＥｎ指数确定阴阳性判定的临界点．．．
关键词：
布鲁氏菌 间接ELISA 特异性 敏感性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李坤 温国元 罗青平 商雨 艾地云 罗玲 王红琳 杨峻 邵华斌 程国富
建立了检测猪圆环病毒2型血清抗体的间接ELISA方法,并初步应用于临床血清样品的检测。用PCR方法从PCV2 HBZX株中获得截短的核衣壳(capsid,Cap)基因,将该基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-Cap,将该重组质粒转化宿主菌E.coliBL21-CodonPlus(DE3),用IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白的正确表达,表达蛋白Cap分子质量为42 ku,可与6×HIS抗体反应;KCl预染切胶纯化目的蛋白,以其为抗原建立检测PCV2感染猪血清抗体的间接ELISA方法。ELISA检测5份血清样品结果变异系数均小于10...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
叶宝宏 鲍长磊 付明哲 许信刚
【目的】建立产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ＥＬＩＳＡ检测方法。【方法】将原核表达重组质粒ｐＥＴ－２８Ａ－β转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）感受态细胞，用ＩｐＴＧ进行诱导表达，表达产物经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后进行ＷＥＳＴＥｒｎ ＢＬｏＴ鉴定。用复性的β毒素重组蛋白作为包被抗原，通过优化间接ＥＬＩＳＡ试验条件，建立其抗体间接ＥＬＩＳＡ检测方法，对该方法的特异性、敏感性和重复性进行考察，并用其对５２１份临床样本进行检测。【结果】通过诱导、纯化和复性，获得了纯度较高且具有良好反应原性的β毒素重组蛋白。间接ＥＬＩＳＡ条件为：抗原最佳包被质量浓度为５．０μＧ／ｍＬ，阳／阴性血清最佳稀释度为１∶５０．．．
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