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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐重新 杨晶祎 陆梦晓 仲建峰 张存政 张霄 何鑫 刘媛 刘贤金
利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL-1,中抑制浓度(IC5...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐重新 杨晶祎 陆梦晓 仲建峰 张存政 张霄 何鑫 刘媛 刘贤金
免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,并建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法用于食品中Cry1C毒素的残留检测。经4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,采用饱和硫酸铵沉淀和ProteinA柱纯化,获得了浓度为3.86mg.ml-1的多克隆抗体,其效价为1:48000。通过制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074ng.ml-1,中抑制浓度(IC50)是60.16 ng.ml-1,线性检测范围(IC20 ~IC80)在0.96~1 633.60 ng.ml-1;对Cry1B、Cry...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张兆威 李培武 张奇 丁小霞
【目的】黄曲霉毒素严重污染农产品,威胁人畜生命健康,是政府重视、社会关注的一大焦点问题,因此亟需研究建立黄曲霉毒素高灵敏高快速检测方法。目前已研制出高特异性高灵敏度黄曲霉毒素单克隆抗体,本研究旨在应用该抗体,建立黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析快速检测技术,为农产品质量监管、风险评估提供技术支持。【方法】本研究通过将黄曲霉毒素抗体与乳胶铕进行偶联标记,利用自主研制的黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条进行黄曲霉毒素检测,通过检测线T信号值与质控线C信号值的比值和标准溶液浓度的自然对数值实现定量。针对花生、稻米、植物油等不同农产品,研究建立样品粉碎均质提取一体化技术。对铕标记时间分辨荧光免疫层析检...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘媛 Huovinen Tuomas 刘贤金 梁颖 张存政 谢雅晶 贺江 王耘 张霄
【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王战辉 米铁军 沈建忠
及时、快速和准确地检测粮食中真菌毒素的污染,从而对其进行严格、科学的控制和处理是保障中国粮食安全和人民身体健康的重要途径。基于特异性分子识别的均相荧光偏振免疫分析技术(Fluorescence Polarization Immunoassay,FPIA)兼具高通量、高速度、高灵敏和易于实现自动化等优点,特别适用于大批量粮食样本的快速筛选。文章综述了近10年来荧光偏振免疫分析检测粮食中真菌毒素的研究进展,并着重讨论了荧光偏振免疫分析的发展方向。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙秀兰 张银志 汤坚 朱瑜
为了扩大金标免疫层析试条(GICA)检测食品和饲料中黄曲霉毒素B1的应用范围,研究了样品基质对试剂条信号强度的影响,探讨了GICA测定饲料和各种发酵类食品样品时,提取液中NaCl、金属离子(Fe3+,Cu2+,Pb2+,As3+)和脂肪含量对检测结果的影响,并研究了消除影响的方法。结果表明,3种阴性样品(大米、玉米和小麦粉)均存在不同程度的非特异性干扰,大米的影响最小,其次为玉米和小麦粉,大米的最佳稀释倍数为10倍,玉米和小麦粉为30倍;随NaCl质量浓度增加,检测结果有偏向假阳性的趋势;4种金属离子对检测结果的影响程度依次为Fe3+>Cu2+>Pb2+>As3+;随着样品中油脂含量的增高,用...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈兰明 陈永萱
以合成的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）－Ｃ３－羧甲基肟－牛血清白蛋白为免疫原，制备了高亲和力的多抗血清，建立了简便、灵敏的ＡＦＢ１间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ定量分析法。ＡＦ类似物Ｂ１，Ｂ２，Ｇ１和Ｇ２与ＡＦＢ１抗体的相对交叉反应率分别为１００％，３．４％，９．１％和小于１．３％。本法测定ＡＦＢ１的线性检测范围为１２．５～２５０ｐｇ，批内和批间平均变异系数分别为５．３％和７．９％，大米和混合饲料中测定ＡＦＢ１的回收率分别为７９．０％和８１．８％。用本法对６８份样品进行了分析，ＡＦＢ１自然污染率为１１．８％，其中采自江苏某地的玉米样品污染ＡＦＢ１最高达６８２．７μｇ／ｋｇ。本法适用于大批量样品的快速检测。
关键词：
黄曲霉毒素B_1 ELISA 定量分析
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
章先 王继璇 程高钏 李可 张晓峰 孙孟娇 程昌勇 宋厚辉
【目的】真菌毒素可污染农产品和动物源性食品，其中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)毒性强、危害大，建立AFB_1快速、高灵敏和便捷的检测方法对于监测相关产品中AFB_1污染水平，保障人和动物健康均具有重要意义。本研究基于侧向层析技术原理，采用竞争模式，优化建立免疫层析检测方法，以实现AFB_1的快速定性检测和定量分析。【方法】通过比较分析不同粒径金颗粒标记抗体效果，优化确定免疫层析各组分材料类型、相关缓冲液配方及最佳使用质量浓度，建立AFB_1高灵敏定性定量免疫层析检测方法。【结果】优化建立的AFB_1免疫层析检测法在实际样本中的定性和定量检测限分别为2.5和0.5μg·kg~(-1)，灵敏度高、特异性强，与其他常见真菌毒素无交叉反应，加标回收实验结果显示：该方法准确稳定，且对AFB_1天然污染样本的定量检测结果与商品化试剂盒及LC-MS/MS一致性较好。【结论】本研究制备的免疫层析检测法可用于样本中AFB_1污染的快速定性检测与定量分析，适合缺乏实验条件的基层检验检疫机构和农产品加工企业对大量样本进行快速筛查，样本检测结果疑似阳性再采用仪器法进行确认，可降低检测成本，提升检测效率，同时为建立其他病原微生物免疫层析检测方法提供参考。图9表2参26
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程安春 刘艳丽 朱德康 汪铭书 胡骑 陈孝跃
【目的】(1)建立单抗介导的、能够对黄曲霉毒素AFB1进行亚细胞定位的免疫组化方法;(2)探明AFB1侵染和分布于雏鸭靶器官(细胞)规律,为阐明AFB1对雏鸭的致病机理提供基础实验数据,为AFB1感染人类提供研究模型。【方法】(1)利用AFB1单抗、免疫组化理论和方法,结合石蜡切片技术,建立检测感染雏鸭组织器官和细胞中AFB1方法;(2)7日龄樱桃谷鸭饲喂黄曲霉毒素(AFB1)含量为150μg·kg-1的全价饲料,分别于6、12、24、48、72、96、120、144、168和192h各剖杀2只,取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、法氏囊、胸腺和胰腺等组织器官多聚甲醛固定、石蜡包埋,应用建立的...
关键词：
免疫组化 黄曲霉毒素 雏鸭 侵染
[期刊] 中国水产科学
[作者]
辛少平 岑剑伟 李来好 杨贤庆 郝淑贤 魏涯 周婉君 王子怀
在稀碱条件下,河鲀毒素(TTX)与次溴酸钠和尿素于一定温度下反应生成具有荧光性能的物质,该反应与已报道的TTX在强碱下生成C-9碱的碱解不同。本研究拟对该衍生反应所需条件进行详细研究,并尝试依据该反应建立一种新型的河鲀毒素荧光检测方法。荧光扫描光谱显示,产物最大激发波长(EX)为233 nm,最大发射波长(EM)为370 nm。该反应对p H要求比较严格,反应最适p H在11.6~11.9之间。对样品进行衍生检测获得最强荧光信号的条件为:次溴酸钠0.036~0.09 mol/L、尿素10~50 g/L、碳酸钠0.2~0.3 mol/L,温度75℃。样品检测结果显示,此衍生反应具有高度专一性,信...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张留圈 张霄 刘媛 徐重新 张存政 谢雅晶 寇莉萍 刘贤金
【目的】通过设计并优化生物素-亲和素标记磁珠筛选策略,建立针对Cry1Ac毒素的新型双抗夹心ELISA检测方法,为研究灵敏、快速的Bt毒素的检测方法建立一种新的检测模式。【方法】采用磁珠液相正负筛选方法,经过4轮筛选后,对每轮筛选后抗Cry1Ac毒素特异性结合噬菌体抗体的富集效果进行鉴定,通过单克隆ELISA方法从第4轮筛选得到的次级库中获得特异性结合Cry1Ac的阳性克隆,并对其进行PCR鉴定和DNA测序,确定有完整插入的scFv片段后进行后期相关试验。将相对结合活性最好的阳性克隆scFv-A12替换宿主菌HB2151中进行可溶性诱导表达并纯化。利用纯化后的scFv-A12作为"捕获抗体",...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄伟 何慧禹 鲁鹏 陈翊平
为实现谷物中呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）的快速、灵敏检测，采用生物传感和化学发光技术相结合的方式，研制应用于现场快速检测谷物中呕吐毒素的化学发光光纤免疫传感器，并搭建用于化学发光信号检测的便携式传感平台。整个检测平台集成到一个32 cm×15 cm×25 cm的黑色避光盒中，质量小于3 kg。结果显示：所研制的化学发光光纤免疫传感器在0.1～1 200 ng/mL呈现出良好的线性关系，检出限为62.7 pg/mL；功能化的光纤探针能够稳定保存30 d且具有良好的特异性和抗干扰性；其应用于谷物样品的呕吐毒素检测回收率为81.00%～107.33%，相对标准偏差小于8.69%。结果表明，该方法较ELISA法的灵敏度提高了30倍，线性范围拓宽了3个数量级，适合应用于谷物样品中呕吐毒素的现场快速检测。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王秀华 王崇明 黄倢
用纯化栉孔扇贝(Chlamysfarreri)急性病毒性坏死症病毒(AVNV)免疫兔子,以兔抗血清为一抗,荧光标记的羊抗兔抗体为二抗,采用冰冻切片技术,建立了栉孔扇贝AVNV的间接免疫荧光检测方法。用该方法分析栉孔扇贝和海湾扇贝(Argopectenirradians)体内AVNV感染强度,并对感染率进行统计。结果表明,栉孔扇贝的肾脏、肝胰腺中,AVNV阳性信号最强,呈现中度到重度感染,其AVNV感染率100%。鳃丝、性腺及闭壳肌中未检测到阳性信号。在海湾扇贝的肝胰腺及肾中AVNV的感染率也较高。提示AVNV感染扇贝的靶器官主要是肾脏、肝胰腺。对与栉孔扇贝同一海区养殖的海湾扇贝在栉孔扇贝发病期...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
英瑜 李健
将磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine,SM2)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)偶联,分别作为免疫原及包被原,建立了水产品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法。实验结果表明,理想的磺胺二甲嘧啶人血清白蛋白(SM2HSA)包被抗原浓度为1mg/L,酶标二抗(羊抗兔IgG HRP)工作浓度为1/1000,多抗(SM2PcAb)工作浓度为1/3200,最适检测范围为10～200μg/L,最低检测限为1.89μg/L,本实验所建立间接竞争ELISA检测方法的孔间差异为2.56%,板间差异为5.14%,实验重复性好。在实验浓度范围内,磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine)...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张舍郁 程安春 汪铭书 沈婵娟 李传峰
【目的】建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDVIgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为:切片在0.01mol·L-1柠檬酸(pH6.0)缓冲液微波修...
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