- 年份
- 2024(6632)
- 2023(9772)
- 2022(8856)
- 2021(8410)
- 2020(7097)
- 2019(16656)
- 2018(16741)
- 2017(32514)
- 2016(17975)
- 2015(20227)
- 2014(20224)
- 2013(20048)
- 2012(18550)
- 2011(16706)
- 2010(16574)
- 2009(15032)
- 2008(14560)
- 2007(12429)
- 2006(10854)
- 2005(9218)
- 学科
- 济(71166)
- 经济(71085)
- 管理(48994)
- 业(46417)
- 企(38751)
- 企业(38751)
- 方法(35423)
- 数学(30740)
- 数学方法(30377)
- 学(18453)
- 农(17770)
- 中国(16951)
- 财(16383)
- 地方(14982)
- 业经(14919)
- 理论(12340)
- 农业(12099)
- 贸(11929)
- 贸易(11923)
- 和(11752)
- 易(11530)
- 环境(11100)
- 制(10841)
- 技术(10732)
- 务(10477)
- 财务(10418)
- 财务管理(10400)
- 企业财务(9874)
- 教育(9683)
- 划(9593)
- 机构
- 大学(258181)
- 学院(254344)
- 管理(101725)
- 济(95816)
- 经济(93726)
- 理学(89311)
- 理学院(88275)
- 管理学(86581)
- 管理学院(86154)
- 研究(85966)
- 中国(60600)
- 科学(57511)
- 京(55192)
- 农(44370)
- 所(44233)
- 财(42010)
- 业大(41608)
- 研究所(41082)
- 中心(37609)
- 江(35522)
- 农业(35252)
- 财经(34783)
- 范(34734)
- 北京(34540)
- 师范(34366)
- 经(31688)
- 院(31085)
- 州(29170)
- 经济学(28147)
- 师范大学(28061)
- 基金
- 项目(182399)
- 科学(142410)
- 基金(132225)
- 研究(130020)
- 家(116584)
- 国家(115639)
- 科学基金(98306)
- 社会(79515)
- 社会科(75200)
- 社会科学(75179)
- 省(71316)
- 基金项目(71155)
- 自然(66476)
- 自然科(64917)
- 自然科学(64900)
- 自然科学基金(63715)
- 划(60817)
- 教育(59481)
- 资助(54907)
- 编号(52519)
- 成果(42741)
- 重点(40898)
- 部(39797)
- 发(38377)
- 创(37584)
- 课题(36193)
- 科研(35369)
- 创新(35081)
- 计划(34330)
- 大学(33648)
- 期刊
- 济(100719)
- 经济(100719)
- 研究(71774)
- 学报(46199)
- 中国(42773)
- 科学(41518)
- 农(39758)
- 管理(35771)
- 大学(33786)
- 学学(31884)
- 财(29548)
- 农业(28181)
- 教育(27686)
- 技术(20840)
- 融(17209)
- 金融(17209)
- 财经(16106)
- 业经(16019)
- 经济研究(15778)
- 图书(14594)
- 业(13860)
- 经(13567)
- 科技(13282)
- 问题(13217)
- 理论(13012)
- 版(12725)
- 业大(12409)
- 实践(12127)
- 践(12127)
- 技术经济(12092)
共检索到353588条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘丽燕 杨爱国 王清印 周丽青 刘志鸿
从提取时间和TritonX-100浓度两个方面对长牡蛎(Crassosstrea gigas)精子膜蛋白提取条件进行优化,确定最佳提取条件:将精液150 g离心去除精原细胞,经PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液清洗后,3000 g离心10 min(4℃)得精子悬液;然后加入3倍体积含1%TritonX-100的膜蛋白提取液,冰浴振摇1 h;50000 g离心15 min(4℃),收集上清液即为精子膜蛋白溶液。SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测到21种膜蛋白,分子量在26~156 kD之间,PAS染色检测到糖蛋白有14种,苏丹黑B染色检测到脂蛋白有17种,其中有13种膜蛋白既...
关键词：
长牡蛎 精子膜蛋白 糖蛋白 脂蛋白
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王琦 康现江 程立均 穆淑梅 曹刚
利用含1% TritonX-100和0.1%SDS的提取缓冲液提取河蟹(Eriocheir sinensis)精子膜蛋白。对所得的精子膜蛋白溶液进行SDS-PAGE电泳分析。结果显示,河蟹的精子含有12种不同的膜蛋白组分。对这些精子膜蛋白组分的生化特性进行分析,结果表明,河蟹精子膜蛋白是1组呈酸性的低分子量糖蛋白,分子量为21.6～75.5kD,等电点在4.8左右。
关键词：
河蟹 精子膜蛋白 生化特性
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
刘丽燕 杨爱国 王清印 周丽青 刘志鸿
通过SDS-PAGE电泳,从提取液的倍数、提取时间、Triton X-100的浓度、SDS的有无等4个方面对提取条件进行优化,确定栉孔扇贝精子膜蛋白的最佳提取条件是:将精液150g离心去除精原细胞,0·1mol/L PBS缓冲液清洗两次,0·1mol/L Tris-HCl缓冲液清洗两次,3000g离心10min(4℃)得精子悬液;然后向精子悬液中加入3倍体积含1%Triton X-100和0.1%SDS的膜蛋白提取液中冰浴振摇1·5h;4℃,50000g离心15min,收集上清精子膜蛋白溶液。SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测出22种膜蛋白,分子量在23~156kDa之间,P...
关键词：
栉孔扇贝 精子膜蛋白 糖蛋白 脂蛋白
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张淑敏 白昌明 辛鲁生 李亚楠 李晨 王崇明
本研究对编码牡蛎疱疹病毒(Ostreid herpesvirus 1,OsHV-1)囊膜蛋白的orf111基因进行了生物信息学分析、克隆和表达。首先,通过特异性PCR扩增得到orf111基因全长序列,并对其编码囊膜蛋白的理化性质、高级结构、跨膜区和抗原决定簇等进行生物信息学分析。结果显示,orf111编码一种稳定的疏水性蛋白,具有5个跨膜结构域和9个抗原决定簇,同时,氨基酸序列中还包含1个高度保守的精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp, RGD)结构域。随后,构建了pET28a-orf111重组质粒,并将其转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中。最后,通过使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,表达产物分子量约为32 kDa。本研究应用原核表达得到了含RGD结构域的OsHV-1囊膜蛋白,为进一步制备ORF111蛋白单克隆抗体及开展牡蛎疱疹病毒侵染机制的研究奠定了重要基础,为将来OsHV-1的防控工作提供新的思路。
关键词：
牡蛎疱疹病毒 囊膜蛋白 原核表达 魁蚶
[期刊] 水产学报
[作者]
汪海波 梁艳萍 汪海婴 周坚 张寒俊
以草鱼鱼鳞为原料,分别提取鱼鳞中的酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),着重开展了其包括热稳定性、体外酶降解性以及胶原海绵材料特性在内的相关研究,并与哺乳动物来源的猪皮胶原(PC)相比较。实验结果表明,制备所得的3种胶原蛋白均为典型的Ⅰ型胶原并具有完整的三螺旋结构;PC的热变性温度(41.6℃)明显高于ASC(34.8℃)和PSC(35.2℃);3种胶原蛋白的体外酶降解性能受水解酶的种类、胶原蛋白提取方法、胶原蛋白来源、胶原蛋白受热历史以及蛋白的自组装程度影响。胶原蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对淡水鱼胶原均具有不同程度的降解能力,但胶原蛋白酶的降解能力最强;相同条件下,3种胶原蛋...
关键词：
草鱼 鱼鳞 胶原蛋白 生物学性能
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
杨彦豪 孙效文 雷清泉
通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份,包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等,在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分,研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现,加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多,并且在子代培育过程中,发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明:精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。
关键词：
银鲫 精子膜蛋白 异精雌核发育 雄核发育
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
汪秋宽 何云海 徐玲 宋琳琳 刘建伟 齐凯雅 李伟
用DEAE-52阴离子交换柱提取、纯化牡蛎糖蛋白,分离纯化的牡蛎糖蛋白命名为糖蛋白GⅠ,糖蛋白GⅡ。用葡聚糖凝胶柱层析分别分析纯化糖蛋白GⅠ,糖蛋白GⅡ,结果表明:牡蛎糖蛋白GⅠ中分离出1种糖蛋白组分GⅠ-1;牡蛎糖蛋白GⅡ纯化出4种糖蛋白组分(GⅡ-1,GⅡ-2,GⅡ-3,GⅡ-4),GⅠ-1为未经洗脱的透过峰,该组分可能是糖蛋白凝聚体,由凝胶电泳分析估算得知GⅠ-1,GⅡ-1,GⅡ-2,GⅡ-3的分子量分别为42.5kDa,100.0kDa,55.3kDa,41.4kDa。
关键词：
牡蛎糖蛋白 分离纯化 分子量测定
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁艳 黄倢 易志刚 张培军
选取凡纳缤对虾(Litopenaeusvannamei)的4种组织(鳃、血淋巴、肝胰腺、肌肉),着重对膜蛋白的提取方法及其多肽组成进行分析。在对虾组织膜蛋白提取过程中,使用了5种蛋白酶抑制剂(苯甲基磺酰氟PMSF、胃酶抑制剂、亮抑酶肽、胰凝乳蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制剂),以减少组织自身的酶将蛋白降解的可能。电镜观察,可见纯度较高的、细胞膜结构卷曲形成的小泡样、封闭的结构。使用Gel Pro软件对提取产物的SDS PAGE图谱分析,确定了这几种组织的特征多肽分子量分别为75 0kD、70 5kD、26 7kD和71 2kD。
关键词：
凡纳滨对虾 膜蛋白 多肽组成
[期刊] 水产学报
[作者]
崔凤霞 薛长湖 李兆杰 董平 薛冬梅
对仿刺参(Stichopus japonicus)胶原蛋白的提取及理化性质进行了研究。结果表明,低温提取可得到胃蛋白酶促溶且去除端肽(telopeptide)的酸溶性胶原蛋白(PSC)。紫外-可见扫描测得PSC的最大吸收峰位于220nm;氨基酸分析发现,在1 000个总氨基酸残基中,甘氨酸为329个,羟脯氨酸为66个,羟脯氨酸与脯氨酸之比为0.69,酪氨酸、苯丙氨酸及组氨酸的含量较低,可能不含胱氨酸,这些特性均符合Ⅰ型胶原的特征。差示量热扫描法(DSC)测定仿刺参PSC的热稳定性温度(Ts)为57℃,低于牛皮Ⅰ型胶原5℃;苯酚-硫酸及次甲基蓝法测得PSC的总糖及粘多糖含量分别为0.61%及0....
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄新新 陆承平
提取迟缓爱德华菌 (Et)外膜蛋白 (OMP) ,经SDS PAGE分析发现 ,在不同培养温度、时间、pH值及不同培养基上OMP图谱无明显差异 ,主条带是 35 0 0 0和 40 0 0 0。但在铁限制环境下 ,增加了高分子区域带 980 0 0 ,930 0 0 ,75 80 0及72 40 0 ,而 45 0 0 0条带变细变浅。用去污剂TritonX 10 0和Sackosyl抽提OMP ,条带基本相似 ,后者主条带更浓密。用SDS抽提OMP ,则仅有 35 0 0 0条带。将OMP样品分别在 37,5 0 ,70 ,90及 10 0℃加热 5min后点样 ,45 0 0 0条带持续出...
关键词：
迟缓爱德华菌 外膜蛋白 培养特性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张平 李晨 黄倢 梁艳 刘庆慧 刘莉
将VP110基因的部分序列克隆到pET-28a载体中构建pET28a-vp110b重组质粒并进行原核表达,获得重组表达的蛋白rVP110-B;用rVP110-B注射凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei后,经WSSV感染,实验表明,该蛋白注射使凡纳滨对虾感染WSSV的半数死亡时间比对照组延长了20%。用表达纯化的该重组蛋白制备了兔抗rVP110-B多克隆抗体,该抗体用于凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白与rVP110-B的Far-western分析显示,凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白中除90 kDa左右的血蓝蛋白外,在41.7 kDa存在结合条带,经质谱分析表明这条鳃细胞膜蛋白是肌动蛋白。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘忠义
为了充分探讨草鱼内脏的利用途径并深入了解草鱼消化生理学,将草鱼肠道用冰丙酮脱脂,用磷酸盐缓冲溶液提取,然后经过硫酸铵分级沉淀,再经过离子交换层析、凝胶过滤层析等纯化,分离得到一种碱性蛋白酶,并对其部分理化性质进行了检测。结果表明,该酶是一种胰蛋白酶(GT-A),其相对分子质量为30.75 ku;其最适温度为40℃,最适pH为8.0,在pH 6.0~10.0保持稳定,在65℃加热20 min其活性丧失95%。表明草鱼肠道中含有在低温下能很好发挥水解作用的胰蛋白酶。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李薇 张其中 张占会 崔淼 姚占娟 何毛贤
近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)热休克蛋白70(HSP70)家族成员是重要的抗逆和潜在污染预警分子。本研究将近江牡蛎HSP70基因cDNA连接到原核表达载体pQE30中,构建近江牡蛎HSP70的重组表达质粒pQE30/HSP70。该重组质粒经酶切和测序鉴定后,转入表达宿主大肠杆菌M15进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Westernblot分析表明,确实获得了重组蛋白的表达。分别在25℃、30℃和37℃下,经0.2mmol/LIPTG诱导融合蛋白表达,其中,在25℃下,诱导的融合蛋白表达量最高,表明该温度为恰当诱导温度;在25℃下,分别诱导重组蛋白表达2h、4...
关键词：
热休克蛋白70 原核表达 近江牡蛎
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李小飞 李槿年 季晶晶 余为一
自行构建的pMD18T-OmpU重组克隆质粒经BamHI/EcoRI双酶切后,定向插入原核表达质粒pGEX-4T-1中构建重组表达质粒pGEX-4T-1-OmpU。将重组表达质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21进行IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,以包涵体形式表达的GST-OmpU融合蛋白的分子量约为62.9kD,可与鼠抗拟态弧菌外膜蛋白(Omps)免疫血清发生特异性反应,提示重组OmpU保留了天然Omps的抗原性。用纯化的融合蛋白免疫昆明系小鼠,以50LD50拟态弧菌(5×108CFU/mL)攻击,小鼠的免疫保护率为60%(9/15)。表明...
[期刊] 水产学报
[作者]
钟立人 毋瑾超 张燕平 赵艳 王南舟
鱼精蛋白（Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ）是一种常与ＤＮＡ结合，存在于鱼类成熟精巢中的碱性蛋白。由于其生化组成的特点，鱼精蛋白不仅具有促使细胞发育繁殖的作用，而且一旦将其分离出来，能有效抑制多种食品腐败菌的生长和繁殖［Ｍｉｌｅｒ１９４２］。同时，这种鱼精蛋白还有...
关键词：
鱿鱼,鱼精蛋白,提取,纯化,生化特性
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
