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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
肖博仁 罗维 刘崇灵 李润成 余兴龙
从感染犬细小病毒(CPV)的长沙病犬粪便中分离CPV,采用同步接毒方式,将病毒悬液接种到猫肾细胞(F81),经PCR鉴定,从10份阳性样品中分离到9株CPV,血凝试验显示9株CPV均能凝集猪红细胞,血凝价均超过了27。为进一步分析CPV长沙毒株的VP2分子生物学特征及抗原变异规律,对9个CPV毒株的VP2基因进行克隆、测序及序列分析,结果表明:CPV长沙毒株与全国及世界各地CPV毒株相比,其VP2基因序列同源性超过97%,其VP2基因推导的氨基酸序列同源性超过94%;其VP2基因推导的氨基酸序列有独特的变异,且有独特变异的毒株在基因进化树上处于同一个分支。
关键词：
犬细小病毒 分离 鉴定 变异 长沙
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
吴海超 胡呈才 刘崇灵 李润成 余兴龙
从一育肥猪早、中期生产状况差的猪场收集猪血清214份,采用猪细小病毒(PPV)特异性检测引物进行PCR检测,选取1份阳性血清接种猪睾丸细胞(ST)进行PPV分离、部分生物学特性研究,以及PPV部分基因序列分析。结果表明:在15、16、17、18、22周龄猪血清中均检测到PPV,检测阳性率分别为10%、40%、20%、15.4%、9%,而从2~14及24周龄的猪血清中没有检测到PPV;病毒分离和部分生物学特性研究结果表明,从血清中分离的PPV在ST细胞上传到第5代能够出现较稳定的细胞病变(CPE),病毒血凝效价为28;PPV部分基因序列与GenBank收录的PPV毒株序列同源性在98%以上,其中...
关键词：
育肥猪 猪细小病毒 血清 分离 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵丽 崔保安 文英会 陈红英
根据Genbank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了PRV和PPV的单项PCR诊断方法,通过优化PCR条件最终成功地建立了PRV和PPV的复合PCR诊断方法。敏感性检测结果表明,对PRV的检测可以达到10-10.5/100μL TCID50、对PPV的检测可以达到10-9.5/100μL TCID50。对20头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果5头份PRV阳性,3头份PPV阳性,其中3头份PRV和PPV同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性。结果表明,PRV和PPV复合PCR诊断...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨笃宝 吕品 胡传伟 贾赟 谢之景 曹涤非 任月 刘海防
从具有疑似犬瘟热症状的病狐血液中分离到1株病毒,该病毒在MDCK细胞上生长良好,并能形成稳定的CPE。经电镜观察、理化特性、滴度测定、动物回归试验、RT-PCR和荧光定量RT-PCR鉴定,证实分离到的病毒为1株犬瘟热病毒强毒株,命名为CDV-FOX-TA。
关键词：
狐狸 犬瘟热病毒 分离 鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孔繁德 陆承平
将含有犬细小病毒2.0 kb DNA 克隆片段的重组质粒 pBI-264转化大肠杆菌 JF-803,扩增后用碱裂解法提取重组质粒,纯化后电泳,用冷榨法回收克隆片段。用光敏生物素分别标记重组质粒及克隆片段,制成重组质粒探针及克隆片段探针两种核酸探针,它们对犬细小病毒有相同的杂交特异性,检测灵敏度达 pg 水平,保存期至少8个月。检测25份犬粪样,阳性率为32%(8/25),而 HA-HI 试验为24%(6/25),两种方法的符合率为92%(23/25)。本试验从粪样直接提取病毒 DNA,用非放射性的光敏生物素标记探针检测,方法简便,可直接应用于兽医病毒学诊断。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵俊龙 陈焕春 吕建强 周复春
在已经建立的PPV和PRV的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的筛选,成功地建立了 PPV和PRV的复合PCR诊断方法,并应用于临床。利用一次PCR反应,即可同时扩增PPV的445 bp和PRV 217 bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。
关键词：
复合PCR 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙岩 仲飞 李秀锦 王幸兴 王璐 贾启恒 韩冬梅 李振 张峰 潘红丽
【目的】白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒VP2 DNA疫苗,在小鼠体内分析了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作用。【方法】采用RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中扩增cIL-7基因,然后将cIL-7基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,分别构建成与Myc/His标签融合和非融合的cIL-7真核分泌型表达载体pcDNA-cIL7/MH和pcDNA-cIL7。由磷酸钙介导将pcDNA-cIL7/MH质粒转染HEK 293T细胞使其进行瞬时表达,以Western-blot...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
曾显成 吴异健 陈家祥 姚金水 吴宝成
采集福州郊区病仔猪的鼻腔黏液、脑、脾脏、肾脏、淋巴结等组织病料,研磨上清接种到非洲绿猴肾(Vero)细胞和狗肾(MDCK)细胞进行病毒分离,通过对分离病毒株进行形态学、血清学、荧光抗体试验、动物接种试验、PCR试验等鉴定,确定所分离的病毒为猪伪狂犬病病毒(PRV),命名为PRV-FZ株.根据GenBank收录的PRV gD基因的序列设计一对引物,通过PCR方法扩增出约1579 bp的目的片段,并将其克隆到PCAGGS载体进行酶切鉴定、核苷酸序列测定和分析.结果表明,目的片段包含一个1203 bp的开放阅读框,编码400个氨基酸组成的多肽,与GenBank中有代表性的5株参考毒株相应基因序列比较...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
谢燕婷 郑敏 石磊 王隆柏 张志刚
利用Primer Premier 5.0及DNAstar软件对猪伪狂犬病毒gB基因、猪圆环病毒2型ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的保守区进行引物设计,选出扩增序列为猪伪狂犬病毒(373 bp)、猪圆环病毒2型(430 bp)和猪细小病毒(495 bp)的3对引物.敏感性和特异性试验结果表明,mPCR对3种病毒的核酸检测限量从猪伪狂犬病毒至猪细小病毒分别为1.62×10-6、1.47×10-6和1.28×10-4ng,对灭菌双蒸水、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒cDNA和猪瘟病毒cDNA的mPCR扩增结果均为阴性.mPCR可作为临床上猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染和猪细小病毒病的病原学快速诊断方...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李斌 苏乾莲 赵武 梁家幸 梁保忠 何颖 秦毅斌 何苹萍
为了进一步研究猪细小病毒自然弱毒株(PPV-N株)的自然弱毒分子生物学机理,对PPV-N株VP2基因进行克隆、测序和原核表达研究。结果表明,成功构建PPV-N株VP2基因的克隆重组质粒pMD18-T-VP2及表达重组质粒pET32a-VP2,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,PPV-N株VP2基因在BL21(DE3)plysS菌中成功进行融合表达,表达出约85.4 KDa的VP2融合蛋白,且表达的VP2融合蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应。PPV-N株VP2基因的成功克隆及原核表达为今后研究PPV-N株的自然弱毒的分子生物学机理和研制PPV诊断抗原奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冉旭华 邵昱昊 韩宗玺 陈露菲 孔宪刚 刘胜旺
【目的】从野生蝙蝠体内分离病毒,为开展蝙蝠的病原监测奠定基础。【方法】从广东省韶关采集了30份野生犬蝠样品,研磨后接种Vero E6细胞,从中分离到2株病毒,对其中一株病毒进行研究,使用生物学与分子生物学方法确定其分类学地位。【结果】该毒株在Vero E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。反复冻融3次后,收集细胞及培养液,电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,呈正二十面体对称,将病毒命名为Bat/China/2003(B/03)。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞,不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞...
关键词：
犬蝠 呼肠病毒 分离 鉴定
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈晓月 梁华 刘明春 王建民 于立辉 范宏发 赵玉军
根据GenBank登陆的鹅细小病毒B株全基因组的核苷酸序列,设计合成一对引物,用PCR方法对GPV LN-1/06株的主要结构蛋白基因进行克隆,并对克隆的片段进行序列测定,用生物信息学软件进行序列分析。结果表明:所扩增的GPV LN-1/06株的基因长度为1605bp,包括VP3完整的开放阅读框,共编码534个氨基酸。与登录的20株国内和国外的GPV的VP3基因序列进行同源性分析表明,GPV LN-1/06株与其他20株VP3基因的核苷酸同源性较高,从93%至99%,说明GPV的VP3基因较为保守。系统进化树分析表明GPV-LN01/06病毒株与HG5/82为一组,具有较近的亲缘关系。本试验首...
关键词：
鹅细小病毒 结构蛋白基因 克隆 序列分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢冰霞 何颖 赵武 梁家幸 段群棚 蒋冬福 卢敬专 闭炳芬 周英宁 秦毅斌 李斌 苏乾莲 陈忠伟
利用正交试验对猪细小病毒(PPV)N株在IBRS-2细胞转瓶培养中的培养条件进行优化,为PPV N株弱毒疫苗的大量培养工艺提供参考。设细胞培养液pH值(7.0、7.2和7.4)、接毒时间(0、24和48 h)、接毒剂量(0.10%、1.00%和10.00%)、收毒时间(48、72和96 h)等因子和水平。结果表明,PPV N株转瓶培养的最佳培养条件组合为细胞培养液pH值7.2,采用同步接毒,接毒剂量为0.10%,收毒时间为接毒后96 h。其中收毒时间是影响PPV N株毒价的最主要因素。
关键词：
猪细小病毒 转瓶培养 优化 正交试验
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈红英 李新生 崔保安 杨明凡 金钺 刘金朋
根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premier express软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK-15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-T Easy载体中,构建重组质粒.转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.在25μL扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1.12TCID50/mL.
关键词：
猪细小病毒 检测 实时荧光定量PCR
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘业兵 张磊 宁宜宝 王琴 范学政
【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立了对PPV病毒DNA进行特异扩增的LAMP检测方法,并可通过加入SYBR Green I肉眼判断结果。【结果】该方法在63℃恒温下作用45min,PPV病毒DNA获得了高效率的特异性扩增;其检出限量为0.23TCID50,敏感性高;在反应结束后加入SYBR Green I肉眼...
关键词：
猪细小病毒 LAMP 检测方法
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