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[期刊] 水产学报
[作者]
丁小雨 李振通 段鹏飞 邱弈树 王心怡 黎琳琳 王林娜 刘阳 李文升 王清滨 赵侠 李胜忠 田永胜
为探究长期超低温冷冻保存中鞍带石斑鱼精子质膜、活力、超微结构及酶活性的变化，阐明影响鞍带石斑鱼精子冷冻保存质量的相关机制。实验采集2022年鞍带石斑鱼鲜精及储存时间分别为23、49、61个月冷冻保存精液，用伊红-苯胺黑染色方法检测精子质膜完整性；用计算机辅助精子分析仪（CASA）检测精子运动参数；测量精浆和精子中琥珀酸脱氢酶（SDH）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽还原酶（GR）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和肌酸激酶（CK）共六种酶活性的变化及三磷酸腺苷（ATP）浓度变化；用扫描电镜和透射电镜观察鲜精和冻精超微结构。结果显示，伊红-苯胺黑染色检测结果发现，鲜精质膜完整性最高，为83.43%±2.73%，经过超低温冷冻后，精子质膜完整性显著降低，且随着冷冻保存时间的延长而逐渐降低。CASA结果显示，鲜精活力最高，为90.47%±3.34%，经过超低温冷冻后精子活力显著降低，但长期保存23-61个月精子活力无显著性差异，精子活力保持在(63.95%±3.66%)～(68.58%±2.73%)，具有稳定的活力，且鲜精与冻精之间精子平均直线运动速度（VSL）、平均曲线运动速度（VCL）和平均路径速度（VAP）均没有显著差异。精子超微结构显示，鲜精形态结构正常、线粒体排列结构规则、形态大小正常。经过超低温冷冻保存后，精子形态结构损伤明显，表现为精子头部质膜破损、细胞质外漏、细胞核膜破损、尾部鞭毛断裂或脱落等损伤；鞍带石斑鱼精浆和精子超低温冷冻前后六种酶活性的变化及ATP含量结果显示，经过超低温冷冻后，精子内SOD、GSH-PX和CAT三种酶及ATP含量均有显著性降低。精浆中酶活力升高，除GR和CAT外，其余酶活性均差异显著。研究表明，长期超低温冷冻对鞍带石斑鱼精浆和精子酶活性、精子活力及精子超微结构均具有较显著影响。本研究结果为鱼类精子冷冻损伤机理研究积累了丰富的数据，为鱼类精子长期冷冻保存提供了技术参考和评价指标。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 刘鉴毅 张涛 冯广朋 赵峰
研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后大黄鱼精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,大黄鱼精子的活力下降,精子内GR活性从(4.42±0.29)U·L-1增加到(58.93±2.26)U·L-1(P<0.05);其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK、SDH的活性分别从冻前的(60.16±5.88)U·mL-1、(11.91...
关键词：
超低温冷冻保存 大黄鱼 精子 酶活性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
廖光勇 区又君 李加儿 陈超 庄志猛
利用透射电子显微镜技术研究了七带石斑鱼(Epinephelusseptemfasciatus)精子的超微结构,结果发现:七带石斑鱼精子由头部和尾部(鞭毛)两部分组成,没有明显的中片,头部前段无顶体,主要有高电子密度的球形细胞核,核中主要是致密的染色质,还分布有一些核泡,核外由核膜包围,将核与细胞质分隔开,核膜最前端紧贴质膜,核后端有植入窝,近端中心粒和中心粒间体位于其中。头部后端为袖套结构,由质膜包围的袖套结构延伸到后部,使整个头部呈椭球形,质膜后端沿鞭毛形成一个袖套腔,袖套结构中分布有中心粒复合体、线粒体以及囊泡等。精子细胞的细胞膜不光滑,呈现小的皱折。七带石斑鱼精子的尾部细长,紧接于头部细...
关键词：
七带石斑鱼 精子 超微结构
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
齐文山 姜静 田永胜 翟介明 陈超 李波 陈松林
以云纹石斑鱼精液为实验材料,对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液进行了筛选。结果表明,利用9g/L NaCl、10g/L KHCO3和10%小牛血清配制而成的稀释液EM1-2适宜于云纹石斑鱼精子冷冻保存,以2ml冷冻管为精子容器,在60L液氮生物保存罐中冷冻保存精子,冷冻解冻精子活力可达56.67%±5.77%,要优于TS-2、ES1-3和其他EM系列稀释液冷冻保存精子活力。利用EM1-2为基础液对抗冻保护剂进行筛选,结果显示,10%~20%的二甲基亚砜(DMSO)和1-2-丙二醇(PG)冷冻保存后精子活力无显著差异(P>0.05),其中15%的DMSO和10%PG冷冻保存精子效果最...
关键词：
云纹石斑鱼 精子 冷冻保存 精子稀释液
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 江琪 刘鉴毅 姚志峰 张涛 冯广朋 赵峰
研究超低温冷冻保存(-196℃)对日本鳗鲡精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后日本鳗鲡精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,日本鳗鲡精子的活力下降,精子内GR活性显著升高(P
关键词：
超低温冷冻 日本鳗鲡 精子 酶活性
[期刊] 水产学报
[作者]
田永胜 陈张帆 段会敏 马文辉 唐江 李文升 刘江春 侯云霞 孙振翔 庞尊方 王晓梅 翟介明 李波
利用4尾鞍带石斑鱼冷冻精子与27尾云纹石斑鱼雌鱼授精建立父系半同胞家系28个,在家系鱼苗生长到130 d时,从所有家系中共选取1294尾鱼苗,对其全长、体长、头长、体高和体质量5个生长性状进行测量。利用单因素方差分析法比较4组父系半同胞家系的生长性能,利用线形混合模型(line mixed mode)对母本和父本遗传效应进行预测,利用最小范数二次无偏估计法(MINQUE)对5个生长性状方差组分进行估计,利用"加性-显性"模型对生长性状遗传相关、遗传力进行估计,采用调整无偏预测法(adjusted unbi
[期刊] 中国水产科学
[作者]
赵会宏 刘晓春 林浩然 刘付永忠 王云新
选取健康雄性斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)亲鱼进行人工采精,以日立H-600型透射电镜观察精子超微结构,同时设定盐度梯度、温度梯度和pH梯度,观察其对精子活力的影响。超微观察显示,精子头部呈圆形或卵圆形,核膜与质膜间的空间较大;近端中心粒的长轴与尾部约成120°的夹角;基体位于鞭毛顶端,长轴与精子头部细胞核长轴平行;袖套位于核后端,呈筒状,两侧不对称,分布着数量、大小不等的线粒体和囊泡。尾部细长,长26.0～31.5μm,其主要结构是轴丝,轴丝为典型的"9+2"微管结构。活力实验显示,精子活力的最适盐度为27～35,盐度33时精子寿命最长,为27min;最适pH为6.5～...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘光霞 吴兴兵 何勇凤 邓智明 杨德国 王小明 杨少荣 刘欢
为建立圆口铜鱼(Coreius guichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1), 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5%、10%、12.5%, V/V)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响。结果表明,D1组稀释液的精子活率(MOT)最高,为(74.64±13.17)%,与鲜精无显著差异(P>0.05);以10%甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)%,与鲜精无显著差异(P>0.05),精子运动速度达最大,平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、VAP(平均路径运动速度)分别达到(50.28±12.46)μm/s、(35.06±10.82)μm/s、(39.44±12.46)μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为(8.67±1.15) s、(33.33±5.00) s,显著低于鲜精(P
[期刊] 海洋渔业
[作者]
闫文罡 章龙珍 庄平 刘鹏 江琪
对日本黄姑鱼精子部分生理特性及其超低温冷冻保存技术进行了研究。结果表明,日本黄姑鱼精液pH值为7.0~7.5,精子密度为(11.23±2.78)×109/m l,精子寿命(229.33±17.16)s。在盐度为30~35,pH为7.5~8.5时,精子的活力最高,分别达到(88.33±2.89)%和(88±4.33)%。精子在室温(25℃)条件下,可存活24 h;在低温(4℃)条件下可以存活36 h。以D液作为稀释液,20%的乙二醇作为抗冻剂,利用快速降温法对精子进行超低温冷冻保存,38℃水浴快速解冻,解冻后的精子获得最高的活力为(47±5.78)%。
关键词：
日本黄姑鱼 精子 活力 稀释液 抗冻剂
[期刊] 水产学报
[作者]
浦蕴惠 许星鸿 高焕 刘兆普 阎斌伦
研究了超低温冷冻保存(-196℃)对脊尾白虾精子内琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na+/K+-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)与顶体酶活性的影响,以期为提高脊尾白虾精子超低温冷冻效果提供理论依据。设置对照组(未添加抗冻剂)、3个实验组[分别添加DMSO(V/V)10.0%、12.5%、15.0%],于冷冻0、1、3、5、7、15 d取样测定各酶活性。结果表明,经冷冻后,除GR外,其他所测酶活性均出现显著下降(P<0.05),在冷冻...
关键词：
脊尾白虾 精子 超低温冷冻 酶活性
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 张涛 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 王妤 章龙珍 庄平
选取６ ｉｎｄ健康的雄性俄罗斯鲟（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ ｇｕｅｌｄｅｎｓｔＡｅｄｔｉ），经人工催产后获得成熟的精子，研究超低温冷冻（－１９６℃）对俄罗斯鲟精子顶体酶活性及ｄｎＡ损伤影响。结果显示：俄罗斯鲟鲜精中顶体酶的平均活性为（３６．１８±２．５４）μｉｕ·１０－６，经过超低温冷冻后，精子顶体酶活性显著降低，添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至（２１．５５±０．７９）μｉｕ·１０－６，未添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至（９．５８±１．０８）μｉｕ·１０－６，且三者间有显著性差异（ｐ＜０．０５）。单细胞凝胶电泳结果表明，俄罗斯鲟鲜精彗星率为（３７．３３±７．７７）％，添加抗冻剂后冻精的彗星率为（．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐滨 江琪 庄平 章龙珍 黄晓荣 王斌 张涛 闫文罡
研究了超低温冷冻保存(-196℃)对俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)精浆和精子中总三磷酸腺苷酶(AT-Pase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)等酶活性的影响,并分别测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中酶的活性。结果显示,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,精子内各酶活性均显著降低,添加冷冻保护液组精子中总ATPase、SDH、LDH和CK的活性分别从(198.47±14.43)U/mL、(30.00±2.65)U/mL、(6 982.29±24.32)U/L和(1.94±0.05)U/mL下降至(110.19±2.32)U/m...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 江琪 姚志峰 刘鉴毅
研究了超低温冷冻保存(-196℃)对斑尾刺虾虎鱼成熟卵中总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)等酶活性的影响。结果表明,经过冷冻保存后,总ATP酶、CK、SDH和LDH的活性显著下降(P<0.05),同时可见添加抗冻剂组比未添加抗冻剂组下降幅度更大(P<0.05);SOD、CAT和GSH-PX的活性也显著下降(P<0.05),未添加抗冻剂组比添加抗冻剂组下降更明显(P<0.05);MDA的活性显著升高,且未添加抗冻剂组显著高于添加抗冻剂组(P<0.05)。超...
关键词：
超低温冷冻 斑尾刺虾虎鱼 卵 酶活性
[期刊] 海洋渔业
[作者]
汪亚媛 张国松 李丽 尹绍武 侯新远 张丽娟 贾一何 胡亚丽 周国勤 茆建强
对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)精子在不同盐度和pH下的精子活力进行观察,同时研究了精子在4种不同稀释液与2种不同浓度抗冻剂组成的保存液中的超低温冷冻保存,并开展了冻精的授精实验。结果表明,瓦氏黄颡鱼精子浓度为(2.035±0.179)×1012cell·mL-1,在盐度为5.8、pH为7.17时,精子的活力都高达95%。以A液作为稀释液、10%甲醇作为抗冻剂时,冷冻保存精子效果最好,解冻后精子活力为(81.7±0.9)%。用解冻后的精子进行人工授精,获得的受精率为(88.4±2.1)%,孵化率为(74.0±0.8)%;而鲜精受精率为(91.0±0.8)%,孵化率(8...
关键词：
瓦氏黄颡鱼 精子 活力 超低温保存
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 张涛 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 王妤 章龙珍 庄平
选取6 ind健康的雄性俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti),经人工催产后获得成熟的精子,运用扫描电镜和透射电镜,观察了超低温冷冻前后精子的形态结构。结果显示,经过超低温冷冻后精子形态结构发生了较大变化,其中冻精顶体长度、头中部宽度及中段宽度与鲜精相比显著增加(P<0.05);中段长度及后外侧延伸物与鲜精相比显著减少(P<0.05)。冻后有38.6%的精子在形态结构上受到不同程度的损伤。精子的结构损伤主要表现在精子顶体不明显或与核发生糅合,后外侧延伸物消失,甚至顶体脱落;精子核膜皱
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