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[期刊] 林业科学研究
[作者]
丁伟峰 马艳 冯颖 张欣 马涛
对2种双翅目昆虫细胞系(黑腹果蝇胚细胞系SL2以及麻蝇胚细胞系NIH-SaPe-4)38个月长期液氮深低温保存效果进行了研究,通过对冻存时间和保护剂对2种细胞系冻后活力、圆度以及恢复时间影响的测定,比较了3种不同配方冻存保护液的效果。结果表明:2种昆虫细胞系冻后活性均随着冻存时间的增长而逐渐降低。长期冻存期中,使用90%胎牛血清(FBS)+10%二甲基亚砜(DMSO)冻存SL2效果较好,NIH-SaPe-4使用10%DMSO即可满足冻存的需要,而无需额外添加高浓度FBS。甘油不适用于这2种昆虫细胞系的长期保存。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张欣 冯颖 丁伟峰 马涛 马艳
采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规G iem sa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对7种鳞翅目昆虫细胞系进行了染色体分析,得出了各种细胞系染色体分析所需要的秋水仙素浓度与处理时间以及低渗浓度和处理时间的范围;7种鳞翅目细胞系染色体均表现出典型的鳞翅目昆虫传代细胞的核型特征:染色体数目众多,异倍化严重,多为弥散型的着丝粒的短杆状、颗粒状、点状或圆球状。
关键词：
鳞翅目 细胞系 染色体 核型 异倍化
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张欣 冯颖 马涛 马艳 丁伟峰
采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对5个双翅目昆虫细胞系进行了染色体分析。结果显示:C6/36染色体众数为6,为二倍体细胞系;SL2染色体众数为8~12,超二倍体细胞系;L-2/M delta 2-3染色体众数为8~20,超二倍体细胞系;Aedes albopictus Skuse染色体众数为6,为二倍体细胞系;NIH-SaPe-4染色体众数为10条,为二倍体或亚二倍体细胞系。与来源细胞相比,以上5种细胞染色体数目没有发生根本性的改变。
关键词：
双翅目 细胞系 染色体 核型
[期刊] 林业科学
[作者]
张欣 冯颖 丁伟峰 马涛 刘荣 马艳
自20世纪60年代Grace建立了第一个能够稳定传代的昆虫细胞系以来(Grace,1962),经过几十年的研究和发展,昆虫细胞培养已在细胞系建立、培养技术和方法、昆虫细胞培养技术的利用等方面取得了很大的进展,昆虫细胞被广泛地应用于医学、农学及生物学的各个领域(宋德伟等,2004;张佑红等,2006;Maramorosch et al.,1992)。目前,全世界
关键词：
毒力 昆虫细胞系 农药 二甲苯 致死率
[期刊] 林业科学研究
[作者]
丁伟峰 冯颖 张欣 李娴
使用双翅目昆虫黑腹果蝇(Drosophila melanogaster Fallen)胚细胞系L-2/M delta 2-3作为研究材料,制备10个密度试验组(0.81×1062.88×107个.mL-1,每组跨度大于2.00×106个.mL-1),分别在冻后第6、10、14个月对各组细胞冻后活力、回复时间长短、以及生长状况进行观察和比较,研究密度因素对细胞系L-2/M delta 2-3长期冻存效果的影响。结果表明:冻存密度对细胞系L-2/M delta 2-3冻后活力和状态恢复均有显著影响(P
关键词：
冻存密度 冻存时间 昆虫细胞 细胞活力
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
林董 何柳 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉
应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcM-NPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、p...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
宋德伟 马艳 冯颖 陈晓鸣
综述了从60年代首次建立昆虫细胞系以来国内外的昆虫细胞工程的研究进展。包括昆虫细胞培养基的研究,昆虫细胞系的建立,昆虫细胞冻存的研究,昆虫细胞培养过程中污染的检测和解决,以及昆虫细胞—杆状病毒表达系统(BaculovirusExpressionVectorSystem,BEVS)的研究现状和展望。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
丁伟峰 冯颖 马艳 张欣 马涛
针对目前昆虫细胞库日常维护工作中在数据和资料管理上的不足,使用Microsoft Visual Basic 2005软件开发工具与Microsoft SQL Server2005数据库管理系统等工具构建了一套昆虫细胞库管理系统。本系统的主要任务是实现各种实验数据的集中管理,并为使用者提供实用的工具,方便这些数据的采集和处理。其主要功能有:细胞系基本信息的管理、照片管理、文献管理、核型分析、细胞冻存与复苏操作、生长曲线绘制等,具有功能全面、操作简便、直观,实用等特点。采用数据库管理系统大大提高了细胞库的管理水平,为昆虫细胞系库的长期有效管理奠定基础。
关键词：
细胞库 数据库 管理系统
[期刊] 华北农学报
[作者]
王芳 胡波 任雪枫 范志宇 张则斌 徐为中 何孔旺
用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定...
关键词：
家兔 γ-干扰素 克隆 重组杆状病毒
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
沈蔷 章海敏 施旆旆 胡军祥
以鲫鱼Carassius cuvieri未成熟的卵细胞为材料,研究了玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的存活率及琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响。结果表明:鲫鱼卵细胞存活率在1~6 d下降明显,6~8 d下降趋势减弱,保持相对稳定;琥珀酸脱氢酶活性呈显著下降(P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王贵强 严毓骅 彭景楩 张龙 周海鹰
通过光学显微镜及电子显微镜观察，综合分析了昆虫生长调节剂卡死克对东亚飞蝗表皮与脑的显微及亚显微形态结构的影响。结果表明，处理后的若虫表皮由于真皮细胞结构被破坏导致内表皮变薄、板层结构消失，而且真皮细胞层与内表皮层分离，细胞质内小泡变大而分布不均，核染色质凝结成为小颗粒且分布不匀。脑神经分泌细胞受药物影响数量明显减少，结构松散，胞间空泡变大，引起轴突变形。经透射电子显微镜检查发现，脑神经分泌细胞的轴突与胞体分离并膨大变形。线粒体结构发生改变，膜与内嵴消失。另外，轴浆运输中的神经分泌颗粒明显减少。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张欣 冯颖 丁伟峰 马涛
采用来源于3个目14种昆虫的离体细胞系对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcNPV(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)和家蚕核型多角体病毒BmNPV(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus)进行敏感性测定。试验结果表明:各昆虫细胞系对两种病毒的敏感性不同,来源于双翅目及直翅目的细胞系均不能被这两种病毒感染;AcNPV可侵染来源于鳞翅目的Sf21、Sf9、HighFive、RIRI-PX及HZ,宿主范围较广;而BmNPV仅能侵染BmN细胞,宿主专一。AcNPV对Sf9细胞的感染率最高,接种病毒10 ...
关键词：
昆虫细胞系 AcNPV BmNPV 感染
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程杏安 秦湘静 蒋旭红 Sammy ZHENG 刘展眉 刘向东
【目的】从细胞学角度研究细胞自噬过程中膜结构细胞器的变化及其与自噬体发生的关系。【方法】以基因互作引起细胞调亡现象发生的水稻爪粳杂种F1和天然化合物印楝素、喜树碱、苦参碱诱导凋亡的昆虫细胞Sf9为材料,通过透射电子显微镜和荧光显微镜技术观察细胞自噬凋亡期间自噬体的特征。【结果】水稻杂种F1花粉母细胞在不同发育时期存在不同程度的退化,部分细胞内线粒体形态发生显著变化,形成长哑铃型或线管状,最后两端弯曲形成双层膜结构的细胞器;绒毡层细胞均出现内质网膨大,且逐渐包裹周围其它细胞器,如线粒体,形成双层膜结构的自噬体,最终引发细胞的自噬性凋亡。喜树碱和苦参碱诱发凋亡的细胞胞内线粒体形态发生拉长、弯曲,最...
关键词：
自噬 凋亡 自噬体 水稻 Sf9细胞
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王彦彬 崔保安 陈红英 王亚宾 张红英 魏战勇
【目的】为获得重组猪干扰素α。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBacⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽(honeybeemelittinsignalpeptide,HBM)取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。【结果】重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李春杰 王丽芳 潘凤娟 许艳丽
【目的】探讨提高昆虫病原线虫冷冻存活能力的方法,以改进昆虫病原线虫储存技术。【方法】以我国高寒地区分离、筛选出的高致病力昆虫病原线虫Heterorhabditis bacteriophora-HBN(HBN,45°45′N)和从美国引进的同种不同品系昆虫病原线虫H.bacteriophora-NJ(NJ,40°13′N)为研究对象,在实验室条件下研究了不同预处理方式对2个品系线虫冷冻存活率的影响。【结果】HBN经过25℃7d、10℃7d、4℃7d、25℃3d10℃3d和25℃3d10℃3d4℃3d的预处理后,于-4℃冷冻5d时的存活率为86.1%~95.2%,显著高于直接冷冻法(25℃0d)的...
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