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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
魏华 佟金凤 赵莹莹 李晓东
为系统研究重金属离子(镉和锌)诱导的金属硫蛋白在中华小长臂虾(Palaemonetes sinensis)不同组织(肝胰脏、肌肉)中的表达,采用水相暴露法对中华小长臂虾进行镉(0,0.05,0.08,0.10和0.15mg·L~(-1))与锌(0,5,8,15和18mg·L~(-1))的急性染毒试验。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法分析不同浓度的镉、锌离子在不同染毒时间下(0,24,48和96h),诱导金属硫蛋白(metallothionein,MT)在中华小长臂虾不同组织中的表达差异。结果表明:镉和锌诱导中华小长臂虾MT的表达存在组织差异性和时间效应关系。在肌肉中镉离子和锌离子不能诱导MT的表达。在肝胰脏中,0.05mg·L~(-1)的镉离子可诱导MT的表达,而5mg·L~(-1)的锌离子才能达到相同的效果。两种离子相比较,镉对中华小长臂虾的MT诱导能力更强。时间效应表现为染毒48h肝胰脏中MT表达量最高,诱导表达量随暴露时间的增加而加大,但达到一定程度后即呈下降至稳定趋势。两种重金属对中华小长臂虾肝胰脏MT的诱导能力:Cd~(2+)>Zn~(2+);MT在中华小长臂虾不同组织中的分布顺序为:肝胰脏>肌肉。染毒后中华小长臂虾肝胰脏中MT的表达有一定的时间效应关系,48h的表达量最高。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李应东 徐畅 姜筠 孟庆娟 刘谞 李晓东
中华小长臂虾(Palaemonetes sinensis)是我国北方常见淡水小型虾类,具较高的观赏价值和食用价值。为寻求一种安全有效的麻醉方法,研究了直接低温(直接放置于≤4℃低温度水浴中)和快速分级低温(分阶段依次放入≥4℃的水浴适应较短时间后,迅速放置于≤4℃低温度水浴中)对3种规格[大(3.534.58cm);中(2.903.15cm);小(2.052.67)cm]虾的麻醉效果和复苏后成活率。结果表明:直接低温麻醉和快速分级低温麻醉后,3种规格的中华小长臂虾体重均有增加,平均增重(14.24±2.3
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
赵莹莹 朱晓琛 李智 姜冶 韩志斌 徐伟彬 王诗跃 魏华 董婧 白文林 李晓东
为探讨中华小长臂虾（Ｐａｌａｅｍｏｎｅｔｅｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）的形态性状与体质量的相关关系，对采自辽宁和山东的５８０尾虾的全长、体长、头胸甲长等１３个形态学指标进行测量，借助相关分析、逐步线性回归、通径分析等方法分析中华小长臂虾形态性状与体质量的关系。结果表明：中华小长臂虾的１３个形态学性状与体质量的相关系数均达到极显著水平（Ｐ＜０．０１），通过计算各保留性状与体质量的通径系数和决定系数，量化各性状对体质量的影响效果，结果显示：体长（Ｘ＿２）与体质量（Ｙ）相关系数、决定系数均最大，是影响体质量的最主要性状；所选性状与体质量的复相关系数为０．９０７，表明所保留性状确实为影响体质量的关键性状。采．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
吴婷婷 魏华 郭敏 曹娜 李国鹏
研究了镉诱发鲫肝细胞相关的胞内游离钙离子变化,以及Ca2+-ATP酶及金属硫蛋白表达量的变化。试验分为对照组、5、10、15、20μmol/L CdCl25个组。Ca2+用Fura-2/AM方法检测,试验后24 h用荧光倒置显微镜观察细胞内游离钙离子变化;分光光度法检测Ca2+-ATP酶;石墨炉—原子分光光度法检测了细胞内镉离子浓度;免疫酶联法(ELISA)检测了金属硫蛋白(MT)含量。结果显示,镉可导致细胞存活率下降,具有一定的毒性。镉离子引起胞内Ca2+荧光强度和Ca2+-ATP酶活性增加(P<0.01)。随镉浓度升高,处理组Ca2+-ATP酶浓度活性分别是对照组的4.52、6.73、6....
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王顺才 梁东 马锋旺
【目的】克隆平邑甜茶金属硫蛋白(metallothionein,MT)基因,探讨该基因对逆境的响应机理,为苹果抗逆分子育种提供依据。【方法】采用电子克隆和RT-PCR技术从平邑甜茶叶片中克隆MhMT2基因,利用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推测氨基酸序列进行分析,通过定量PCR技术研究在胁迫条件和激素处理下该基因在叶片中的表达模式。【结果】平邑甜茶MhMT2基因cDNA全长534 bp,具有1个243 bp的完整开放阅读框,编码含80个氨基酸的多肽,其分子量为7.87 kD。同源性比对显示,MhMT2编码的氨基酸序列与其它植物的MT2蛋白有很高的相似性,其中与小金海棠的同源性最高,达到9...
关键词：
平邑甜茶 金属硫蛋白基因 克隆 表达
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王明发 田亚东 钟翔 康相涛 冯培刚 王恬
为了研究肉鸡肝脏中金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量和MT mRNA表达水平作为评定锌源生物利用率的有效性,在固始鸡和AA肉鸡饲料中添加不同水平的饲料级硫酸锌(ZnSO4·H2O)、氧化锌(ZnO)和氨基酸络合锌(ZnAA),分别测定了2、3、4、5和6周龄末肝脏中MT含量和MT mRNA的表达水平。结果表明:品种间肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平差异极显著,固始鸡高于AA肉鸡。锌源和锌添加水平对所测定指标产生显著影响,氨基酸络合锌显著高于硫酸锌,这两种锌源极显著高于氧化锌;随着锌添加水平增加,肉鸡肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平提高,锌水平之间差异极显著。4周...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王宝维 陈苗璐 王秉翰 张名爱 葛文华 程凡升 岳斌
【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)mRNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王娟 王桂萍 张红生 夏妍 沈振国
为研究耐铜植物海州香薷的金属硫蛋白(EhMT1)的结构与功能,运用分子生物学方法构建了pGEX-2T-EhMT1重组表达载体,经转化大肠杆菌BL21(DE3)后表达得到大小为33×103左右的融合蛋白GST-EhMT1,与预期结果一致。对融合蛋白诱导表达的温度、时间、IPTG诱导浓度等条件进行了优化,成功构建了能大量表达可溶性GST-EhMT1的优良原核表达体系。诱导表达的融合蛋白经GST-Sepharose亲和层析纯化后,每升菌液获得的可溶性融合蛋白高达70mg。用纯化的融合蛋白免疫新西兰雄兔,制备的抗血清经间接ELISA检测到较高的多克隆抗体效价。蛋白质印迹结果显示,纯化的蛋白质与兔抗血清...
关键词：
金属硫蛋白 原核表达 融合蛋白 抗血清
[期刊] 水产学报
[作者]
李连平 张小东 黄志勇 鄢庆枇 梁英 徐同玲
小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5d后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液,再经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE电泳、氨基酸组成及紫外光谱等方法进行表征,测得该蛋白的分子量约为8.2ku,半胱氨酸含量为15.4%,具有金属硫蛋白典型的紫外光谱特征,称为类金属硫蛋白(Zn-MT-like proteins)。试验采用琼脂糖孔穴扩散法,研究了小球藻Zn-MT-like蛋白对3种细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌)和3种真菌(青霉菌、曲霉菌、酵母菌)...
关键词：
小球藻 类金属硫蛋白 结构表征 抗菌活性
[期刊] 水产学报
[作者]
彭爱红 高爽 陈俊 庄梅珍 王凡 陈晓梅 林郑忠 黄志勇
研究锌离子胁迫对海洋小球藻生长和金属硫蛋白诱导的影响,当小球藻达到对数生长期,用不同离子浓度(5、10、20、50和100μmol/L)的锌盐(氯化锌、柠檬酸锌、乙酸锌和葡萄糖酸锌)分别进行胁迫培养,通过测定小球藻的生物量和锌结合金属硫蛋白含量,考察锌胁迫对海洋小球藻的生物量、热稳定蛋白含量以及锌结合金属硫蛋白含量的影响。结果显示,当浓度分别小于5和10μmol/L时,柠檬酸锌和氯化锌对小球藻生长无显著抑制作用;而浓度为5μmol/L时,乙酸锌和葡萄糖酸锌对小球藻生长即产生显著抑制,且抑制作用皆随锌离子浓
[期刊] 中国水产科学
[作者]
胡润豪 史文军 王盼 万夕和 沈辉 黎慧 王李宝 沙士兵 乔毅 蒋葛 成婕
本研究在对葛氏长臂虾(Palaemon gravieri)进行不同温度和盐度骤变预实验的基础上进行分组设置。温度骤变实验设置1个对照组(22.0℃,盐度25)和4个处理组(14.0℃、18.0℃、26.0℃和30.0℃,盐度均为25);盐度骤变实验组设置1个对照组(25,温度22.0℃)和4个处理组(15、20、30、35,温度均为22.0℃);不同升温实验设置2.0℃/d、4.0℃/d、6.0℃/d 3组,记录葛氏长臂虾各时间点存活率,并检测肝胰腺总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果显示,温度骤变实验中,仅30℃组存活率变化显著(P<0.05);而一定范围内的温盐变化对葛氏长臂虾存活无显著影响,另外与降温和盐度变化相比,升温变化对葛氏长臂虾存活率影响显著(P<0.05)。本研究旨在为葛氏长臂虾的繁养应用提供科学参考。
[期刊] 水产学报
[作者]
吴晓萍 廖爱琳 章超桦 廖艳 卢虹玉 杨捷
镉—金属硫蛋白(Cd-MT)是水生环境中重金属镉污染的重要生物标志物,对该蛋白的研究不仅有利于Cd-MT免疫学检测方法的建立,也为水生环境重金属污染监测技术的开发提供理论依据。采用不同浓度CdCl2(0～0.8 mg/L)胁迫诱导企鹅珍珠贝合成Cd-MT,通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Sephadex G-50凝胶柱层析等方法从企鹅珍珠贝全脏器中纯化得到Cd-MT。紫外吸收显示,在CdCl2浓度为0.8 mg/L时,MT粗提液中的Cd-MT特征吸收最大,表明贝体内的Cd-MT含量随着CdCl2胁迫浓度的增大而增加。SDS-PAGE显示纯化后的Cd-MT及其二聚体分子量约为9 ku和18 ku...
关键词：
企鹅珍珠贝 镉金属硫蛋白 多克隆抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
李佩芬 林志华 包永波
通过已构建的泥蚶转录组文库EST,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-TIMP-3基因全长c DNA序列,并对其进行生物信息学和组织表达相关分析。结果显示,泥蚶Tg-TIMP-3 c DNA全长为804 bp,其中开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸;氨基酸序列比对发现其氨基酸序列与其他动物的相似性并不高,与长牡蛎的相似性仅为35.8%,但TIMP基因的两个功能域(N端和C端)相对保守。qRT-PCR检测结果显示:Tg-TIMP-3 mRNA在鳃中表达最高,外套膜和肝胰腺次之,表达量最低的是血液。在不同浓度重金属镉(Cd)攻毒后,泥蚶鳃中的Tg-TIMP-3 mRNA表达量先...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
曹中赞 王晓娜 李静 陈美月 许建文 栾新红
为探讨抗应激添加剂对肉牛因运输应激导致机体应激蛋白表达波动的影响,揭示抗应激添加剂的作用以及肉牛运输应激发生的分子机理奠定理论基础,本试验选择27头体重和体况相近的健康出栏育肥辽育白牛,随机分成3组(n=9),其中对照组饲喂常规基础饲粮,2个添加剂组饲粮中分别添加抗应激1号和2号,饲喂10d后,在20℃、相对湿度51%的环境条件下,以50～60km·h-1的速度在公路上运输5h,分别采集运输前及运输后的肉牛血液及运输后的肉牛肌肉组织,制备血清,提取组织RNA及蛋白,采用ELISA、qRT-PCR、Western Blotting等方法分别检测血清中HSP70含量和肌肉组织中应激蛋白HSP27、HSP70及HSP90的mRNA和蛋白水平的表达量。结果表明:运输后各组肉牛血清HSP70含量显著高于运输前(p<0.05);添加剂组同对照组相比,运输前后血清HSP70均明显下降(p<0.05或p<0.01)。抗应激1号组肌肉组织HSP27、HSP70和HSP90的mRNA相对表达量较对照组明显下降(p<0.05),抗应激2号组肌肉组织中HSP90mRNA的表达量较抗应激1号组显著升高(p<0.05)。两个抗应激添加剂组肌肉组织HSP70和HSP90的蛋白表达量较对照组明显减少(p<0.05)。运输使肉牛血清和肌肉组织中应激蛋白含量增加,而抗应激添加剂可影响运输后肉牛血清及肌肉组织中应激蛋白的水平,尤以抗应激1号作用更明显。
关键词：
应激蛋白 抗应激 运输 添加剂 肉牛
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田光明 范光丽 田海霞 阿依木古丽 张永德 张燕 何玉龙 聂聪 王冠魁 李定强
利用免疫组化SP法,检测了去势及去势后补充雄激素大鼠嗅球中雄激素受体(A ndrogen recep-tors,AR)和神经生长因子(N erve grow th factor,NGF)蛋白的表达情况,探讨了雄激素对嗅球的作用机制。结果表明,睾丸摘除组大鼠嗅球内AR与NGF蛋白的表达显著减少;睾丸摘除并用睾酮替代组大鼠嗅球内2种蛋白的表达接近正常水平。说明去睾丸大鼠由于缺乏内源性雄激素,会引起嗅球内AR和NGF蛋白表达减少,而补充外源性雄激素可缓解或抑制这一变化。
关键词：
雄激素 嗅球 去睾丸 AR NGF
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