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[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙丽萍 薛长湖 许家超 李兆杰 蔡跃飘 赵雪
采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-SephadexA25、SephadexG-100和SephacrylS-300HR柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostomarustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginatelyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究。结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28kD,反应的最适温度为40℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2+、Co2+和Cd2+对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2+、Zn2+、Na+和K+则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和...
关键词：
锈凹螺 褐藻胶裂解酶 特异性
[期刊] 水产学报
[作者]
康平 汪秋宽 宋琳琳 徐玲
采用(NH4)2SO4分段盐析、透析、阴离子(DEAE-52)交换柱层析、SephadexG-200凝胶柱层析等分离纯化技术,通过SDS-PAGE电泳分析了皱纹盘鲍内脏酶的组成,结果表明鲍内脏酶主要含有两种褐藻胶裂解酶Ⅰ,Ⅱ,一种纤维素酶,一种琼脂酶。对酶的酶学性质分析结果表明两种褐藻胶裂解酶Ⅰ,Ⅱ的最适pH分别为8.6,7.2,最适温度为35℃,分子量分别为35.2 ku,67 ku;两种褐藻胶裂解酶的热稳定性比较差,且易受金属离子影响;纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为40℃。并确定了皱纹盘鲍内脏酶分离纯化的方法及参数,为进一步研究鲍内脏复合酶的性能提供了基础参数。
关键词：
皱纹盘鲍 褐藻胶裂解酶 纤维素酶 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
袁丽 高瑞昌 薛长湖 郝淑贤 于刚
采用化学氧化法制备了分子量大于6 ku的褐藻胶裂解物HDX-A,研究其提高凡纳滨对虾保水性的机理。结果表明,经1%的HDX-A溶液浸泡1 h凡纳滨对虾虾仁增重率为14.6%,且经冻藏20 d后解冻损失率和蒸煮损失率均低于水浸泡和3%复合磷酸盐处理。冻藏后,HDX-A处理组ATPase活性降低了40%,显著低于未处理和水处理样品变化量(P0.05),而流变性特征与新鲜样品比较除破断力降低外均无显著差异(P>0.05)。组织学结果显示,HDX-A能影响冻藏过程中冰晶的生成和生长,单位面积横切面内孔洞的数目较多且较小,其中面积小于100μm2的孔洞比...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马慧娇 郭洪伟 曾朝玮 郭家俊 章中
【目的】皮层裂解酶是芽孢所特有的专一水解皮层肽聚糖的酶,肽聚糖的水解是造成芽孢死亡的重要原因,分离提取芽孢皮层裂解酶CwlJ为推动CwlJ水解肽聚糖进而杀灭芽孢并应用于食品杀菌提供了原材料。【方法】本文将获得的皮层裂解酶CwlJ基因导入质粒pCZN 1,成功构建了基因工程菌。运用IPTG诱导重组菌表达目的蛋白CwlJ,SDS-PAGE和Western-Blot检验重组皮层裂解酶的表达情况,并用亲和层析法纯化重组蛋白CwlJ。【结果】0.5 mM的IPTG能实现CwlJ基因的大量表达,纯化后的重组皮层裂解酶CwlJ分子量为17.9 KD,最适温度为40℃、最适pH为5,比酶活力146.67 U/mg。【结论】相比从天然芽孢中提取出来的皮层裂解酶,重组皮层裂解酶CwlJ的活性提高了2倍,保证了皮层裂解酶CwlJ进一步水解肽聚糖实验的进行。
[期刊] 水产学报
[作者]
麻金花 翁凌 颜龙杰 张凌晶 刘光明 曹敏杰
针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及M ini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30℃,最适p H为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PM SF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
袁丽 高瑞昌 薛长湖 郝淑贤 于刚
以褐藻酸钠为原料,采用过氧化氢氧化法制备褐藻酸钠裂解物,分析了裂解物对南美白对虾Penaeus vannamei虾仁质量的效果,并研究了对虾仁冷冻后品质的影响。结果表明,褐藻酸钠裂解物中的分子量大于6kDa的裂解物HDX-A能有效改善冷冻后水分流失,虾仁经1%的浸泡液处理1h后进行冻藏不同时间后再解冻,HDX-A能够有效地阻止水分流失,从而保持虾仁水分且随时间的延长其保持能力并不减弱,而且随浸泡溶液浓度的增加效果增强。HDX-A主要是通过增加自由水含量而避免了冷冻后虾仁水分和营养流失。HDX-A还可有效地降低冷冻虾仁的蒸煮损失,1.5%处理的样品蒸煮损失最低,整体上蒸煮损失低于20%,120d...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王斌 甘纯玑 管华诗 谢苗
以九孔鲍(Haliotis diversicoloeaquatilis)为原料制备一定纯度的褐藻酸酶,并对影响其降解褐藻胶的条件和产物的性质进行分析。该酶的最适温度和pH分别为45℃和7.0;与磷酸盐缓冲液相比,其在Tris-HCl缓冲液中与底物的亲和力相对较高。动力学曲线表明酶解反应主要发生在1 h之内,在2 h之内达到平衡,酶的剂量和底物的浓度对该平衡起到一定的影响作用。反应2 h之后,添加同数量的酶或者底物发现,产物的反馈抑制只是反应达到平衡的一个影响因素,而酶的变性失活也起到了重要的作用。金属离子对酶的活性具有明显的影响,Co2+、Mg2+对酶的活性具有较强的促进作用,而Cu2+、Ag...
关键词：
九孔鲍 褐藻酸酶 降解
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苗雪霞 李喜梅 王金荣 贾新成
根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｓｐ．）ＭＲ０２０菌株所产胞外植酸酶，经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｕｌｏｓｅ离子交换层析，获得了２种植酸酶同工酶，其相对分子质量分别为３４０００和４００００，等电点分别为３．４８和３．８５。二者作用的最适温度均为５５℃；最适ｐＨ分别为２．６和４．６。Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋和Ｍｇ２＋对酶有激活作用，Ｃｕ２＋和ＮＢＳ２＋对酶有抑制作用
关键词：
植酸酶 根霉 纯化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
何云海 汪秋宽 张婷 史永富
岩藻聚糖硫酸酯是一种具有多种生物活性的多糖,对用纤维素酶、果胶酶酶解制备海带岩藻聚糖硫酸酯的工艺进行了研究,正交试验结果表明:纤维素酶、果胶酶优化的酶解工艺参数为:纤维素酶0.221%、果胶酶0.074%,温度50℃,pH值4.5,时间50min。经DEAE-52纤维素离子交换柱层析分离得到3个岩藻聚糖硫酸酯组分,3个组分经Sephadex G-200凝胶柱层析进一步纯化得5个分子量很大(大于2MDa)的组分,可能为岩藻聚糖硫酸酯的凝聚体,另5个组分的分子量为57.8KDa、115KDa、125KDa、154KDa、206KDa。
关键词：
海带 岩藻聚糖硫酸酯 酶解工艺 分离
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王时良 朱劼 邬敏辰
采用硫酸铵盐析、Phenyl—Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE- Sepharose fast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)固态培养物浸出液中分离出一种SDS—PAGE电泳纯木聚糖酶组分,其最终的收率为19．0％,纯化倍数为26．9。该木聚糖酶的相对分子质量20．7 ku,等电点pl5．0,含糖量0．42％;该酶的最适作用温度为50 C,在50 C以下较稳定;最适作用pH 5．0,在pH 5．5～9．0时较稳定;Ca2+对该酶活性有一定的激活作用,而Pb2+,Sn2+,Cu2+,Al3...
关键词：
字佐美曲霉 木聚糖酶 纯化 性质
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郭彩华 张希春 卢珍华 郑彩梅
以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)加工下脚料为原料,分离提纯其中的淀粉酶并对其部分性质进行了研究。结果表明经多级分离,得到了一种相对分子质量约2.15×104的淀粉酶,命名为SCIG1。SCIG1是鲢肠道淀粉酶的一种,酶活性的最适温度为30℃,最适pH5.5。
[期刊] 水产学报
[作者]
姚翠鸾 王志勇 张瑞英 韩学哲 张子剑 孔鹏 冀培丰 黄珊珊
经过CM-纤维素批量层析、Separdex G-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析等步骤,从凡纳滨对虾肌肉组织分离得到精氨酸激酶,经SDS-PAGE检测达到电泳纯,分子量约为40kDa。对该酶的性质进行分析结果表明,精氨酸激酶的最适作用温度为55℃,当温度高于65℃时,酶活力显著下降;pH8时酶活力较高,低浓度的精氨酸对酶活力有促进作用,高浓度时表现抑制作用,而底物类似物精胺和氨基胍则对酶促反应表现出完全的抑制。NaCl,KCl对酶的活力具有促进作用,低浓度(10mmol.L-1)MgCl2对酶活力表现出激活作用,而CuCl2与MnCl2则表现出完全抑制酶活力,CaCl2与ZnCl2在低浓度...
关键词：
凡纳滨对虾 精氨酸激酶 纯化 性质
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
刘建昌 余万凯 池雪林 刘姗姗
分离纯化番鸭小肠中碱性磷酸酶,并对其酶促动力学性质进行研究.结果表明:该酶催化磷酸苯二钠水解反应时最适温度为45℃,最适pH为9.72,米氏常数(Km)为4.76 mmol.L-1.Mg2+对碱性磷酸酶活性有明显激活作用;Cd2+浓度小于0.4 mg.L-1时对碱性磷酸酶有激活作用,而浓度高于0.4 mg.L-1时则有抑制作用;Cu2+对碱性磷酸酶活性有明显抑制作用.
关键词：
番鸭 碱性磷酸酶 酶活性 小肠 米氏常数
[期刊] 水产学报
[作者]
王海英 薛长湖 孙谧 王跃军 王清印
以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2+可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2+、Zn2+、Ag+、Fe3+则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂...
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大菱鲆 肠蛋白酶 纯化 性质
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