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[期刊] 中国农业科学
[作者]
顾雪迎 施文骁 王洪凯 郭庆元
【目的】链格孢菌（ＡｌｔｅｒｎＡｒｉＡ ＡｌｔｅｒｎＡｔｅ）苹果致病型是苹果上的重要致病菌，可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系，为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒ｐＫＯ１－ＨｐＨ是以ｐＣＡＭＢｉＡ１３００骨架为基础构建的穿梭质粒，含有潮霉素抗性基因，并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因，这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒ｐＫＯ１－ＨｐＨ采用冻融法转化到农杆菌菌株ＡＧｌ１中，然后与链格孢苹果致病型菌株Ｘｐ－１的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化，转化子在含有潮霉素的马．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
严红 李明远 柯常取
用４个不同抗性的大白菜做为鉴别寄主，对从全国采集的５３个芸薹链格孢菌菌株进行了致病力分化的研究。结果表明：这５３个菌系由弱至强可划分为ＡＢ１、ＡＢ２、ＡＢ３、ＡＢ４、ＡＢ５五个不同的致病类型。虽然从采集的地域或原寄主角度看，尚未表现出某些规律，但得到了其在供试材料上出现的频率。由于ＡＢ４具有较强的致病力，而在这次鉴定中出现的频率最高，因此推荐为全国进行抗原筛选用的接种菌
关键词：
大白菜,芸薹链格孢,致病力分化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周兵 陈洁 马胜平 殷帅文 王宁
链格孢菌为空心莲子草最具开发潜力的生防菌之一。通过室内生物测定的方法比较了链格孢菌不同菌株对空心莲子草的致病性，并测定了培养基、温度及ｐＨ值条件对强致病菌株菌落生长和产孢的影响，优化了其培养条件。结果表明，菌株Ｊ－１４的致病性最强，其次为菌株ＭＳ６１３、ＺＬ５００和ｐＥＣ，而菌株ＭＬ０３的致病性最弱，其所产生的病斑直径仅为Ｊ－１４的２２．１２％。菌株Ｊ－１４在空心莲子草茎叶煎汁培养基（ＡＤＡ）上菌落生长和产孢量较高，培养５ Ｄ后其菌落直径和产孢量分别为５．８００ ＣＭ和５１９．３７４×１０６个；温度２０～３０℃及ｐ Ｈ值６．５～８．５是其菌落生长和产孢的适宜温度和酸碱度，且最适温度和ｐ Ｈ值分．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭丽琼 刘二鲜 王杰 林俊芳
【目的】建立PEG介导的高效银耳(Tremella fuciformis)芽孢遗传转化体系。【方法】采用PEG介导的原生质体法把表达质粒pAN7-1(含有构巢曲霉gpd-An启动子和潮霉素抗性基因hph)和pLg-hph(含香菇gpd-Le启动子和hph基因)转化进银耳芽孢的细胞中;采用夹层法在含50μg·ml-1潮霉素的筛选培养基中初筛银耳芽孢假定转化子,之后转接于潮霉素含量为100μg·ml-1的PDA平板上进行第2次筛选。【结果】PEG4000浓度为25%时介导的银耳芽孢原生质体初转化率最高;pLg-hph假定转化子经过PCR鉴定及Southern杂交验证,结果表明hph基因能有效整合进...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐萌萌 张红 何姣 涂璇 颜霞 黄丽丽
【目的】建立生防菌淡紫灰链霉菌（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅＳ ｌａｖｅｎｄｕｌａｒｅｃｔｕＳ）ｇｃｌａ４的遗传转化体系，为定向改造基因、提高基因表达水平及其生防分子机制研究奠定基础。【方法】以具有安普霉素（ａｐｒａｍｙｃｉｎ）抗性基因标记的整合型质粒ｐＳｅｔ１５２为出发质粒，ｅＳｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｅｔ１２５６７（ｐｕＺ８００２，ｐＳｅｔ１５２）为供体，淡紫灰链霉菌ｇｃｌａ４为受体进行接合转移试验，并对影响接合效率的培养基、热激温度、接合转移时间和筛选转化子培养基等因素进行优化。【结果】成功地将质粒ｐＳｅｔ１５２转入到了生防链霉菌ｇｃｌａ４中，明确了可用于筛选链霉菌ｇｃｌａ４转化子的抗生．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王禹博 纪明山 谷祖敏 张淑东 张双 杨宁 王勇
链格孢菌是一种丝状真菌,可以通过其菌丝产生的多种致病性毒素侵染植物组织,能够有效的用于防除水田杂草野慈姑。通过单因素试验对链格孢菌SC-018培养基中的碳源及氮源进行了筛选,得到其最适碳源为D-半乳糖,最适氮源为硝酸钠。通过单因素试验确定该菌培养温度及培养基初始pH值的最适范围。对D-半乳糖、硝酸钠、培养温度及初始pH值4因素进行响应面Box-Behnken实验,对链格孢菌SC-018的培养基中D-半乳糖、硝酸钠的含量及培养条件进行了优化。结果表明,优化后的培养基为马铃薯浸出液1000mL,D-半乳糖21.50g·L-1,硝酸钠3.15g·L-1,初始pH值7.81;培养温度25.94℃;通过对链格孢菌SC-018侵染水田杂草野慈姑的最适接种浓度、最佳作用时间的筛选,可得链格孢菌SC-018的孢子浓度每毫升大于1.00×105个时,便会对野慈姑植株表现出明显的致病性,且孢子浓度每毫升为2.0×106个时,作用效果最佳;接种1～2叶期的野慈姑作用效果明显优于其他时期;通过考察环境因子对链格孢菌SC-018致病性的影响可知,该菌成功侵染野慈姑并致其发病的最佳温度为25～28℃,光照条件为10h光照/14h黑暗交替,结露时间大于48h则可引起90%以上的接种野慈姑死亡。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
强胜 常缨 万佐玺 李扬汉
链格孢菌是紫茎泽兰的 1种致病真菌。利用植物病理学方法和RAPD技术 ,比较研究了采自紫茎泽兰上的 5个链格孢菌菌株的形态、遗传多样性、生长状况、致病性和产毒素能力。结果表明 ,5个菌株在上述 5个方面均存在差异 ,其中 ,菌株 5 0 1具有生长速度快、致病性强和产毒素能力高等特点 ,PCR谱带也存在明显特征 ,被确定为最具潜力的菌株。此外 ,致病性与生长速度和产毒素能力存在一定的正相关性。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李兴亮 丁宁 贾美茹 魏灵芝 姜金铸 李冰冰 贾文锁
以苹果‘金冠’为试材,对苹果果实愈伤转化体系的建立及其在苹果基因功能分析中的应用进行研究。首先优化了苹果果实表面消毒的方法、外植体大小和形状、愈伤和继代培养基的组成,以及愈伤和继代培养的适宜条件,最后成功建立了苹果果实愈伤培养体系。在此基础上,将CaM 35S驱动的GUS报告基因转化苹果果实愈伤,发现GUS基因大幅度表达,同时GUS活性强烈提高。证明所获得的苹果果实愈伤适用于基因转化。为进一步证明该体系适用于苹果基因功能研究,分别构建了CaM 35S驱动的乙烯合成关键酶MdACO1过表达载体和RNAi载体,MdACO1的过量表达促进了乙烯合成并调控了一系列乙烯信号转导相关的基因表达,相反MdA...
关键词：
苹果 愈伤 基因转化 乙烯
[期刊] 华北农学报
[作者]
上官小霞 吴霞 张林水 刘珍 李波 李燕娥 朱祯
辣椒农杆菌介导转化体系主要包括无菌苗制备、菌株培养、农杆菌介导转化、芽诱导、芽伸长、生根及移栽等 6个步骤。芽诱导培养基以MS +4.0～ 6 .0mg/L 6 BA +0 .5mg/LNAA +2 .0mg/LAgNO3 较好 ,诱芽分化率因品种不同而异 ,高的可达 70 %以上 ,子叶的分化率明显高于下胚轴 ;诱芽伸长培养基以MS +3.0mg/L 6 BA +0 .3mg/LNAA +1.0mg/LGA3 较好 ,伸长率达 4 0 % ;生根培养基以 1/2MS +0 .3mg/LNAA(或 0 .5mg/LIAA)较好 ,平均生根率达 6 5 %。经过对 3个品种的抗虫基因转化研究...
关键词：
农杆菌介导 基因转化 辣椒
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王新艳 张丹丹 桂月晶 李楠洋 徐明 陈捷胤 戴小枫
【目的】建立适合于大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病性相关突变体的快速筛选体系,为突变库中与致病性相关突变体的系统筛选和鉴定提供技术支撑。【方法】棉花幼苗接种于5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107和5.0×108孢子/m L的孢子悬浮液30 min,通过病情指数调查明确引起棉花黄萎病发生的病原菌浓度范围;对培养于培养瓶的大丽轮枝菌分别加入15、25、35和45 m L的灭菌水,利用血球计数板检测洗脱的孢子浓度,明确不同体积灭菌水对洗脱孢子悬浮液浓度的影响;以保存于96孔板的突变体为单位,在培养皿上进行单孢分离并挑取单个孢子于培养瓶中扩繁培养,培...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
彭成彬 陈美霞 魏日凤 孙云 张承康 刘伟
【目的】炭疽菌属(Colletotrichum spp.)病原菌主要引起茶树叶部炭疽病害。为了降低茶树受到炭疽菌的侵害,从而防控茶树炭疽病,作者进行了病原菌的分离鉴定和遗传体系的建立。【方法】对福建省的政和县、福州市、福安市和宁德市不同茶产区的茶树炭疽病病叶采用单孢分离法分离病原菌,对分离得到的菌株采用形态学结合分子鉴定方法(rDNA-ITS序列)进行鉴定。为深入研究其致病性机理,将含有潮霉的抗性标记基因片段和融合有绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein)GFP基因的Histone 1片段的质粒pCZ007,采用聚乙二醇PEG-CaCl_2介导法,转化茶树胶胞炭疽病原菌。【结果】从4个地区共分离得到致病炭疽菌12株,并进行观察和测定。发现引起茶树炭疽病的胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)是优势菌株,并成功建立的该茶树胶孢炭疽菌的遗传转化体系,随机挑取的4个经分子验证的转化子均能观察到定位于细胞核的绿色荧光和具有抗潮霉素的特性,随后的多次传代均能够稳定观察到绿色荧光定位信号。【结论】本研究分离并经形态学结合分子检测鉴定了福建省4个茶产区的茶树炭疽病的主要病原菌为胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides),成功建立能稳定表达目的基因的遗传转化体系,为后续深入研究茶树炭疽菌相关关键致病功能基因的分子机制提供新的线索,运用绿色荧光蛋白观察茶树胶孢炭疽菌对茶树叶片的侵染过程奠定基础。
关键词：
茶树 炭疽病 分离鉴定 遗传转化 GFP
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈双臣 刘爱荣 王凤华 王菲 周洲
Micro-Tom番茄植株矮小,生长密度高,生命周期短,转化效率高,成为功能基因组学研究的新型模式植物。对影响Micro-Tom遗传转化频率的共培养时间、AS的添加、工程菌液浓度和抑制农杆菌所用抗生素种类进行了分析,建立了Micro-Tom稳定高效的遗传转化体系。以bar基因设计引物对转化群体进行PCR检测,阳性率为72.3%,平均插入位点数为1.8个。遗传体系的建立为Micro-Tom在植物生物学研究中提供理论基础。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王春萍 谢树章 蒋晓英 吴红 周幼昆 林清 雷开荣
本研究以籼稻科恢675成熟种子为材料进行了农杆菌介导的ThIPK2基因遗传转化。结果显示:持续高温光照培养使得愈伤诱导和继代只需10～14 d,有效缩短了愈伤获得周期,且愈伤诱导率可达95.6%。抗性愈伤率为10.6%,持续高温光照培养使得抗性愈伤继代5～7 d就可大量繁殖,且抗性愈伤分化率达48.8%。经第一次继代后的愈伤转化效率显著高于未经继代的愈伤的转化效率。因此,此转化系统有效缩短了水稻转化周期,优化了籼稻遗传转化,同时为抗逆基因转入籼稻提供了参考。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张国裕 王岩 程智慧 王晓武
以建立的菜心高频再生体系为基础,利用GU S染色组织分析法研究了根癌农杆菌菌株、乙酰丁香酮(A S)、预培养时间、浸染时间和共培养时间等因素对菜心((B rassica camp estris L.var.p arach inesis)子叶遗传转化的影响,探讨了适宜菜心转化的卡那霉素与抑菌抗生素使用浓度。结果表明,农杆菌菌株AGL 0对菜心的浸染能力最强,添加100μm o l/L的乙酰丁香酮有利于菜心转化;子叶外植体预培养2 d后浸染(菌液浓度OD600值为0.8)15m in,共培养2 d,然后转移到含15 m g/L卡那霉素和100 m g/L T icarc illin的筛选培养基上,...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张自由 连青龙 辛海波 钟雄辉 罗弦 义鸣放
在唐菖蒲‘Advanced Red’胚性愈伤组织受体系统的基础上,建立其遗传转化体系。采用根癌农杆菌(GV3101)介导法,研究了侵染液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度、负压和筛选方式等因子对唐菖蒲遗传转化效率的影响。结果表明:在遗传转化过程中,不经预培养,负压处理下,农杆菌菌液OD600为0.6～0.8,侵染时间15～20min,添加100μmol/L AS,共培养3d,可获得较高的遗传转化效率。经过3～4个月选择培养,部分抗性植株经PCR和Southern杂交检测表明,目的基因gus已整合到唐菖蒲基因组中。
关键词：
唐菖蒲 gus 根癌农杆菌 遗传转化
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