本研究克隆获得银鲳（ＰａｍＰｕｓ ａｒｇｅｎｔｅｕｓ）雌激素受体α（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅＰｔｏｒα，ｅｒα）基因的部分ｃ Ｄｎａ序列，长度１９６ ｂＰ，编码６５个氨基酸。经ｂＬａｓｔ比对，与其它鱼类ｅｒα基因序列的一致性在８９％～９３％之间，证明实验所得序列为银鲳ｅｒα基因的部分片段。以１年龄雌性银鲳为实验对象，配制了４组等氮、等能及等脂的实验饲料，分别以１００％鱼油（Ｆｏ组）、７０％鱼油和３０％大豆油（Ｆｓｏ组）、３０％鱼油和７０％大豆油（ｓＦｏ组）、１００％大豆油（ｓｏ组）为脂肪源，研究银鲳在卵黄发生期间组织中ｅｒα基因表达量的变化以及饲料ｎ－３Ｌｃ－ＰｕＦａ对其组织表达的影响，实验．．．

研究了银鲳（ＰａＰｕｓ ａｒｇｅｎｔｅｕｓ）肝及卵巢组织中超氧化物歧化酶（ｓＯＤ）、过氧化氢酶（Ｃａｔ）活性、总抗氧化能力（ｔ－ａＯＣ）及丙二醛（ＭＤａ）含量在整个卵黄发生过程中的变化情况，并分析了饲料ｎ－３ ＬＣ－ＰｕＦａ对卵黄发生期间组织中抗氧化水平的影响。分别以１００％鱼油（ＦＯ组）、７０％鱼油和３０％大豆油（ＦｓＯ组）、３０％鱼油和７０％大豆油（ｓＦＯ组）、１００％大豆油（ｓＯ组）为脂肪源，配制了４组等氮、等能及等脂的试验饲料。以１年龄雌性银鲳为试验对象，每组饲料设３重复，试验周期１８５ Ｄ。研究结果表明，肝与卵巢组织ｓＯＤ、Ｃａｔ活性、ｔ－ａＯＣ水平及ＭＤａ含量在卵黄发生过程中均呈现．．．

本研究基于转录组学的分析结果，克隆分析了银鲳(Pampus argenteus)二肽酶(dehydropeptidase， dp1)、羧肽酶A (carboxypeptidases， cpa2l)和磺基转移酶(sulfotransferase， sult2) 3个营养代谢相关基因，并探讨了其在消化吸收水母(Scyphozoa)过程中发挥的功能。通过RACE技术克隆获得了银鲳dp1、cpa2l和sult2基因的cDNA全长序列。dp1基因全长2 522 bp，包含1个1 272 bp的开放阅读框(ORF)，含有1个由23个氨基酸组成的信号蛋白肽和1个典型的酰胺水解酶超家族的结构域。cpa2l基因全长1421 bp，ORF长1260 bp，含有1个由16个氨基酸组成的信号蛋白肽和1个典型的M14金属羧肽酶家族的结构域。sult2基因全长1 834 bp，ORF长714 bp，含有1个典型的磺基转移酶家族的结构域。银鲳Dp1、Cpa2l和Sult2与蓝鳍金枪鱼(Thunnus maccoyii)同源性最高，系统进化树结果也显示，银鲳dp1、cpa2l和sult2和蓝鳍金枪鱼对应基因聚在一个分支上，亲缘关系最近。运用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测了dp1、cpa2l和sult2基因在不同组织中的表达水平及摄食水母对3个基因不同组织中表达规律的影响。结果发现，银鲳dp1基因在肝脏中表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，dp1基因在摄食水母组的脑和鳃中表达量均极显著增加(P<0.01)，在中肠和肾脏中显著增加(P<0.05)，而在肌肉中显著下降(P<0.05)。cpa2l基因在未摄食水母组的中肠的表达量最高，而在摄食水母组的肾脏的表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，摄食水母组cpa2l基因在肝脏中的表达量极显著增加(P<0.01)，而在中肠和肌肉中却极显著下降(P<0.01)。sult2基因在肝脏中表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，sult2基因在摄食水母组的中肠、脑、鳃、肝脏和肾脏中表达量显著增加(P<0.05)。上述结果表明，dp1、cpa2l和sult2基因在银鲳摄食水母后机体营养物质的消化吸收和代谢过程中起重要的调节作用，基于摄食水母后3个基因组织表达模式的比较分析，推测dp1主要参与调控消化吸收和组织中营养素沉积的过程，cpa2l主要参与调控肝脏中营养代谢的过程，而sult2可能在整个消化吸收和代谢过程中均起到重要的调控作用。

分离、克隆了吉富罗非鱼脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)基因的部分cDNA片段,共557bp,编码185个氨基酸,序列分析表明吉富罗非鱼FAS与其他物种的相似性为62%～82%。为了研究饲料中脂肪对吉富罗非鱼FAS活性和表达的影响,设置3组含不同脂肪含量的等氮饲料组(3.71%组、7.67%组和16.55%组),饲养90d,禁食48h,测定吉富罗非鱼肝脏中FAS的生物活性,使用实时荧光定量PCR分别测定了饲喂3.71%组、7.67%组和16.55%组饲料的吉富罗非鱼肝脏和肌肉中FASmRNA的表达丰度以及再投喂后6、12、24、48h肝脏中FASmRNA的表达丰度。...

为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1β基因在草鱼能量代谢中的作用,本研究克隆了草鱼PGC-1β基因的核心序列,并对其进行了生物信息学分析;利用Real-time PCR技术检测了PG C-1β在不同组织中的表达状况;同时研究了饥饿、饥饿再投喂及高糖(糖含量45%)高脂(脂含量8%)饲料对草鱼肝脏PGC-1β表达的影响。结果显示,所获得的草鱼PGC-1β基因部分c DNA片段长为885 bp(Gen Bank登录号:KM580493.1),共编码293个氨基酸,与斑马鱼的同源性为81%;该基因在脑中的表达量最高,肠和肝脏次之;与正常投喂组相比,饥饿(7 d)导致PGC-1β在肝脏中的...

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)卵黄蛋白原Vtg基因的生物学信息与表达及其作为生理与毒理研究标志物的可行性，本实验克隆获得VtgAB1、VtgAB2、VtgAB3(GenBank登录号OK287927、OK287929、OK287928)基因序列，其cDNA长分别为5 055、5 537、5 306 bp,分别编码了1 684、1 760、1 725个氨基酸。三种亚型Vtg蛋白均由脂蛋白N-末端(Vitellogenin＿N)、1943DUF、1944DUF、PV、D型血管血友病因子(VWD)5个保守结构域构成，为完整型Vtg。同源性分析发现皆与龟鳖目具有更近的亲缘关系，同时在3种亚型中VtgAB2与VtgAB3更相似。荧光定量PCR显示，3种亚型Vtg只在雌性肝脏中强烈表达。在60日龄、2龄、4龄雌性个体肝脏中，Vtg表达量随年龄呈上升趋势，VtgAB1、VtgAB2为主要表达亚型。原位杂交结果显示，3种亚型Vtg在卵原细胞内未发现杂交信号；在生长期卵母细胞胞质和滤泡细胞中发现杂交信号；成熟期卵母细胞胞质中未发现杂交信号，在滤泡细胞和周围的网状组织中发现杂交信号。信号在初级卵母细胞的细胞质中分布较为均匀且表达最强，随着卵母细胞的发育信号聚集在核周区且信号逐渐减弱。以雄性中华鳖为对象，注射雌激素E2,3种亚型Vtg表达量表现出明显的时间和剂量相关性。研究结果表明，在中华鳖卵黄积累过程中Vtg发挥重要作用，首次证实其Vtg存在内源性合成，并发现其可以作为雌激素暴露的生物标志物。

本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法。根据已发表的底(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%。在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白。表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后...

为研究饲料中添加维生素Ｄ＿３对黄颡鱼基因表达的影响，实验基于ＲＮＡ－Ｓｅｑ技术对用添加不同水平维生素Ｄ＿３［０（ＶＤ０），１２４３（ＶＤ２），２２７００（ＶＤ２０）ＩＵ／ｋｇ］的饲料喂养的黄颡鱼肾脏和小肠的转录组数据进行分析。通过对３０５ ５６８９８２条原始ＲｅＡＤＳ的筛选和排除，得到了８３ ２６５条ＵＮＩｇｅＮｅＳ，平均长８４５．３８ Ｎｔ，Ｎ５０为１６２０ Ｎｔ。利用ＢｌＡＳｔ等相关软件对数据进行深度分析，得到功能注释基因共２９ ２２４个。根据ｇＯ富集分析发现，差异表达基因主要集中在细胞过程、代谢通路、生物调控等通路中，ｋｅｇｇｐＡｔｈｗＡｙ富集分析结果显示，代谢通路涉及基因最多，有１５３．．．

P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本研究采用RT-PCR和RACE(Rapid Ampli-fication of cDNA Ends)法,分离和克隆了黄颡鱼(Pelteobasrus fulvidraco)卵巢P450芳香化酶基因HP450arom A,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了分析。结果表明,HP450arom A cDNA全长1 914 bp[不包括poly(A)],5′端非翻译区有13 bp,3′端362 bp[不包含poly(A)],阅读框(Open Reading Frame,ORF)1 539 bp,翻译成513个氨基...

为探讨急性操作胁迫对银鲳生长的影响，首次克隆了３种生长调控相关基因－生长激素受体１（ｇｈｒ１）、生长激素受体２（ｇｈｒ２）和胰岛素样受体１（ｉｇｆｂｐ１），并对３种基因在银鲳肝脏、心脏、性腺、肌肉和肾脏等不同组织中的表达进行了比较。定量表达结果表明３种基因均广泛分布于所研究的各个组织中，而其中肾脏、性腺和心脏中的表达量较其它组织低。在银鲳受到外界操作胁迫刺激后，３种基因呈现不同的表达模式：其中ｇｈｒ２和ｉｇｆｂｐ１的表达下调，而ｇｈｒ２的表达量与对照组无显著性差异。结果表明，ｇｈｒ２和ｉｇｆｂｐ１在银鲳生长调节中起到重要的作用；在胁迫环境中，外界刺激可通过下调生长相关基因表达以影响鱼体的生长。

为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响,本研究采用2×2双因子随机区组设计(日粮类型:0%和4%大豆卵磷脂;三疣梭子蟹交配处理:已交配和未交配),共4个处理组,以大豆卵磷脂0%和4%两种人工配合饲料分别投喂交配和未交配两组三疣梭子蟹雌蟹,进行了为期12周的饲养实验。结果显示,无论三疣梭子蟹是否交配,饲料中添加4%大豆卵磷脂可显著增加三疣梭子蟹的卵巢指数,提高血清中卵黄蛋白原、孕酮和雌二醇的浓度,增大卵母细胞直径;同时上调肝胰腺卵黄蛋白原m RNA相对表达

为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响,本研究采用2×2双因子随机区组设计(日粮类型:0%和4%大豆卵磷脂;三疣梭子蟹交配处理:已交配和未交配),共4个处理组,以大豆卵磷脂0%和4%两种人工配合饲料分别投喂交配和未交配两组三疣梭子蟹雌蟹,进行了为期12周的饲养实验。结果显示,无论三疣梭子蟹是否交配,饲料中添加4%大豆卵磷脂可显著增加三疣梭子蟹的卵巢指数,提高血清中卵黄蛋白原、孕酮和雌二醇的浓度,增大卵母细胞直径;同时上调肝胰腺卵黄蛋白原m RNA相对表达

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)和肝脂酶(Hepatic lipase,HL)的表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,本研究采用荧光定量PCR技术检测LPL和HL基因在普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中的表达情况及m RNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因m RNA表达量的影响。结果显示,LPL和HL基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达,且LPL和HL m RNA表达量呈上升变化。葡萄糖组LPL和HL m RNA表达量呈上升变化,维生素C组也呈上升变化。...

同源克隆了半滑舌鳎Dmrt3基因的部分cDNA片段,片段长度为228bp,NJ系统发育树显示,半滑舌鳎Dmrt3基因cDNA片段与红鳍东方鲀、青鳉以及斑马鱼的Dmrt3基因cDNA片段同源性最高,首先聚为一支。实时定量分析了Dmrt3基因在半滑舌鳎雌性和雄性个体的各组织中的表达情况,以及在高温处理和甲基睾酮处理组的雌性、雄性和伪雄鱼的性腺组织中的表达。Dmrt3基因在雌性和雄性的脑、垂体、性腺、肝脏、脾脏、心脏、肾脏7个组织中都有表达,但是表达量有差异,在精巢中的相对表达量高,Dmrt3基因在精巢的表达与其它组织中的表达差异极显著(P<0.01),而在卵巢中的表达很微弱,结果预示Dmrt3基因...

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法,克隆获得剑尾鱼卵黄蛋白原C(Vg C)基因的全长cDNA序列。剑尾鱼Vg C基因cDNA序列全长4 011 bp,其5'非编码区包含12 bp和3'非编码区包含246 bp;含有一个3 753 bp的开放阅读框(ORF),编码1 250个氨基酸,推测其编码氨基酸分子量大小为141.7 ku,编码氨基酸序列与其他鱼类卵黄白原C编码氨基酸序列相似性在44%～85%。荧光定量PCR结果显示,Vg C在剑尾鱼肝脏中表达量最高,脾、肾、卵巢中有微量表达,脑、肌肉、鳃中几乎没有检测到表达;对不同时间暴露在雌激素中剑尾鱼肝脏进...