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[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
万柔 胡亚平 景文轩 胡博 郭起荣
【目的】倍体材料的发现及其育种基础研究一直是林木遗传育种工作的重要内容。天然银杏单倍体的发现打破了银杏只有二倍体的认识，银杏单倍体与二倍体的表型及生理差异的调控机制不清楚。蛋白质是遗传信息的执行者，本研究通过分析单倍体银杏的蛋白质组学特征，以探究其单倍体的特殊性状和机制。【方法】以二倍体银杏为对照，在8月叶片性状、功能最强时采集材料，采用DIA(Data independent acquisition)蛋白质组学定量测序，开展蛋白鉴定、差异蛋白富集、亚细胞定位、蛋白互作网络和GSEA分析，研究单倍体银杏的蛋白质组学差异。【结果】在银杏单倍体中鉴定到6 012个蛋白；获得686个表达差异蛋白，其中397个蛋白表达上调，289个蛋白表达下调。GO功能注释结果显示，差异蛋白主要富集在叶绿素代谢过程和含卟啉化合物的代谢过程；KEGG通路分析表明，差异蛋白主要参与97个代谢通路，包括代谢途径、核糖体和单萜生物合成等。亚细胞定位发现，差异蛋白在叶绿体中所占的比例最大，为37%。蛋白质网络互作的主要通路为核糖体途。GSEA分析发现，差异蛋白主要富集于代谢途径、次级代谢产物的生物合成中。【结论】银杏单倍体差异蛋白主要在代谢、叶绿体和核糖体相关蛋白中起调控作用，可能与其单倍体代谢物质含量降低，光合能力、生长势弱的性状相关。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
徐文斌 吴彩娥 李婷婷 范龚健 贾韶千 彭方仁
以蛋白质提取率为考察指标,选取不同溶液提取银杏营养贮藏蛋白质;运用均匀设计法考察提取时间,提取液pH值、浓度和液料比等对银杏营养贮藏蛋白质提取率的影响,得到了蛋白质提取率的回归模型.经优化筛选后得到如下工艺参数:提取时间为10 h,提取pH为9.0,提取液Tris-HCl浓度为0.25 mol.L-1,提取液液料比为10∶1.在此条件下蛋白质提取率为70.22%.SDS-PAGE电泳分析结果表明,该蛋白质提取液主要含有15、18、23、32、36和44 ku 6种蛋白质.
[期刊] 林业科学
[作者]
郭红彦 吴青霞 彭方仁
采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和电子显微镜技术,对银杏枝条营养贮藏蛋白质组分及其动态变化规律进行研究。结果表明:银杏营养贮藏蛋白质主要存在于枝条的树皮和木质部中;当年生枝条含量高于2年生枝条,树皮的含量高于木质部;枝条中营养贮藏蛋白质组分主要是分子质量为36ku和32ku的蛋白质;银杏营养贮藏蛋白质的动态变化分为积累和降解2个阶段,5月中旬新叶形成后即开始积累,12月份达到最高,翌年春季降解满足芽的萌发,至4月上旬逐渐消失。
[期刊] 林业科学
[作者]
彭方仁 郭红彦 吴青霞
采用光学和电子显微镜技术、SDS-PAGE技术、间接免疫酶标光镜定位和胶体金免疫电镜定位技术对银杏枝条中的营养贮藏蛋白质(VSPs)进行分离鉴定,并对其细胞学特性及动态变化规律进行初步研究。研究结果:运用制备型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并制备银杏32和36ku2种营养贮藏蛋白质抗原,通过免疫新西兰大白兔成功获得银杏32和36ku2种营养贮藏蛋白质的多克隆抗体。银杏VSPs主要分布于落叶期当年生枝条的次生韧皮部细胞中,呈现出团块状、颗粒状和均一状3种形态。在新梢生长期,积累在枝条中的VSPs逐渐降解消失,表现出明显的季节变化。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王月英 黄广学 孟利前 肖海峻
蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)是禾本科冰草属多年生草本植物,对干旱、寒冷及风沙具有很强的抵抗力,是干旱草原和荒漠地带的重要牧草。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantification)技术即同位素相对标记与绝对定量技术,是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术,具有分离能力强、定量结果可靠、灵敏度高、可检测出低丰度蛋白等特点。以蒙古冰草为材料进行干旱处理12d后复水处理,分别在处理0,4,8,12,16d取样,利用iTRAQ技术分析蒙古冰草叶片在干旱胁迫及复水处理下蛋白质组学的变化,并进行生物信息学分析,研究结果表明:在干旱情况下持续上调的蛋白15个,持续下调的蛋白6个,在干旱复水处理中发现有1个基因(Q40001)是在干旱处理中处于下调状态,但是在复水处理后处于上调状态,通过查询蛋白的注释信息发现,该蛋白是一种镁离子螯合酶,其含量的变化与叶绿素的变化趋势相符。
关键词：
蒙古冰草 蛋白组学 ITRAQ技术
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘红霞 赵鑫 毕阳 张增艳 陈佰鸿 安成才
【目的】为揭示豌豆的抗病反应机理,采用蛋白质组学方法对豌豆上胚轴组织中应答GSH的抗病防御蛋白质种类和信息进行分析研究。【方法】以50mmol·L-1还原性谷胱苷肽(reduced glutathione,GSH)作为抗病激发子,利用高通量2-DE和MALDI-TOFMS质谱技术大规模分离和鉴定豌豆白化苗中与抗病防御相关的差异蛋白质点。【结果】从GSH处理48h的豌豆白化苗上胚轴组织中共分离筛选得到4种蛋白质与豌豆的抗病防御反应密切相关,包括病程相关蛋白PR10(PI49)、脱落酸胁迫响应蛋白ABR17和ABR18及1个富含甘氨酸的RNA束缚蛋白(GRPs)。发现ABR17与PI49在GSH逆...
[期刊] 林业科学
[作者]
郭红彦 彭方仁 吴青霞 白晋华
依据银杏枝条中32和36ku蛋白质含量的明显季节变化,推测它们是银杏的营养贮藏蛋白质。采用间接免疫组织细胞化学定位技术,对这2种蛋白质进行细胞化学定位。32和36ku蛋白质具有一定的免疫相关性,它们分布在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中,存在于这些细胞的小液泡里。研究结果揭示这2种蛋白质的组织分布式样,为这2种蛋白质是银杏的营养贮藏蛋白质提供有力证据。
关键词：
银杏 营养贮藏蛋白质 免疫细胞化学定位
[期刊] 林业科学
[作者]
吴彩娥 范龚健 李婷婷 吴海霞 徐文斌
为探究银杏营养贮藏蛋白质的结构与功能的关系,采用DEAE-Sepharose FF离子交换色谱和Sephadex G-75葡聚糖凝胶色谱对银杏营养贮藏蛋白进行分离纯化,得到一条36 kDa的蛋白。质谱分析结果表明:该蛋白中的2个肽段序列与大豆贮藏蛋白质(29 kDa)和薯蓣块茎贮藏蛋白质(30 kDa)的部分氨基酸序列吻合。红外光谱结果表明:β-折叠构象是银杏营养贮藏蛋白质的主要二级结构。
关键词：
银杏 营养贮藏蛋白质 分离纯化 结构鉴定
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郭红彦 吴青霞 彭方仁
采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和电子显微技术,对银杏不同部位的营养贮藏蛋白质组分及其动态变化规律进行了研究.结果表明,银杏营养贮藏蛋白质主要存在于枝条的皮层和木质部中;当年生枝条含量高于二年生枝条,皮层的含量高于木质部;枝条中营养贮藏蛋白质组分主要为36、32、28、23、18和15kD的蛋白质;银杏营养贮藏蛋白质的动态变化分为积累和降解两个阶段,5月中旬新叶形成后即开始积累,12月份达到最高,翌年春季降解满足芽的萌发,至4月上旬逐渐消失.
[期刊] 华北农学报
[作者]
高娜 徐庚全 王萌 王立斌 邱山桐 余震 余四九 潘阳阳
利用蛋白质组学的方法对娟犏牛奶与牦牛奶乳清和乳脂球膜(MFGM)相同蛋白进行分析，而娟犏牛产奶量高于牦牛，若娟犏牛奶的功能与牦牛奶相近，将提高当地牧民的经济水平。通过离心法分离乳清与乳脂，分别提取蛋白；通过串联质量标签(TMT)技术，进行蛋白质定性与定量分析得到相同蛋白；对相同蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白互作等生物信息学分析。结果表明，利用标记定量蛋白质组学技术在娟犏牛奶与牦牛奶中共鉴定到651种乳清蛋白和990种MFGM蛋白，筛选出298种乳清相同蛋白，283种MFGM相同蛋白。GO注释分析发现，鉴定的娟犏牛奶与牦牛奶乳清相同蛋白主要参与的生物过程是内肽酶活性的负调控、免疫应答和免疫球蛋白产生，MFGM相同蛋白参与的生物过程主要是内肽酶活性的负调控和补体激活，经典途径乳清与MFGM相同蛋白定位的细胞成分主要是胞外间隙和胞外区，参与的分子功能主要是三磷酸鸟苷(GTP)酶活性、GTP结合。KEGG富集分析发现，娟犏牛奶与牦牛奶乳清与MFGM相同蛋白主要富集的途径包括补体和凝血级联反应、吞噬体和内质网中的蛋白加工。娟犏牛奶和牦牛奶中丰度较高的蛋白显示出其在免疫和促进营养吸收等方面表现优异，然而，娟犏牛产奶量高于牦牛，这将增加当地牧民的经济收入，也为人们提供更多有价值的高原奶制品。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张洁 游向阳 郭文杰 蔡宣梅 方少忠
为研究百合抽薹调控机理，以自繁的百合小鳞茎‘Ｓｉｂｅｒｉａ’为材料，分析小鳞茎在抽薹前后蛋白质组表达差异。经双向电泳分离，共得到差异表达蛋白质点２１个。１１个蛋白质点获得ＭａＬＤｉ－ＴＯＦ－ＴＯＦ－ＭＳ的鉴定，其中包含２个伴侣蛋白质、４个参与能量代谢的蛋白质、１个胁迫诱导表达的ｃ ＤＮａ产物、３个百合花中的ｃ ＤＮａ片段和１个未知蛋白质。结果表明，在百合抽薹过程中，参与能量代谢的蛋白质表达量受到调控，为抽薹过程准备能量或重新合成储能物质；分子伴侣蛋白质或胁迫诱导蛋白质的表达量发生变化，是百合植株应对低温春化的生理反应。
关键词：
百合 小鳞茎 抽薹 差异表达蛋白
[期刊] 西南农业学报
[作者]
罗文举 李亚娇 路雪萍 童伟杨 陈才俊 马培杰 陈泽辉 王小利
【目的】探明长日照条件下玉米九叶期差异蛋白的特性，为揭示玉米的分子机理提供生物学基础。【方法】以LP光敏感(NT32)和光钝感(NQR273)玉米自交系为试验材料，采用人工控制长日照条件（16 h光/8 h暗）的方法对试验材料进行处理，于九叶期采集幼嫩叶片，利用TMT技术对不同光敏类型自交系材料进行蛋白质组学分析，同时结合生物信息学分析，研究其在长日照条件下差异蛋白的表达特性。【结果】共检测到差异蛋白191个，其中上调表达107个，下调表达84个；GO富集分析显示，差异蛋白主要参与核糖体的结构组成、半胱氨酸型肽酶活性及锰离子结合过程等生物学过程。蛋白水解和翻译过程是重要的分子功能类别。差异蛋白主要富集次生代谢物的生物合成、谷胱甘肽代谢、卟啉和叶绿素代谢等通路。筛选到氨基酸合成、核糖体代谢过程是关键途径。有79个差异蛋白具有功能注释，分别参与ROS体内平衡(19个)、贮藏物质保护(7个)、氨基酸代谢(8个)、其他功能基因(45个)。【结论】光敏感NT32玉米在长日照条件下ROS清除能力增强，贮藏物质保护能力及氨基酸代谢下降，其他功能基因以不同的方式发挥作用，即在长日照条件下，光敏感NT32玉米叶片以氨基酸合成、核糖体代谢过程为主的调控系统，维持了玉米的稳定生长。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王冲 周惜时 夏妍 陈晨 郑录庆 沈振国 陈亚华
［目的］通过对黄花月见草（ＯｅｎＯｔｈｅｒａ ｇｌａｚｉＯｖｉａｎａ）幼苗根系铜胁迫下蛋白质组变化的研究，从蛋白质表达水平上来阐述黄花月见草根系铜胁迫响应分子机制。［方法］采用水培方法比较０、２５、５０和１００μｍＯｌ·ｌ～（－１）铜浓度处理下黄花月见草生长状况和植株内铜元素含量，运用基于质谱的非标记相对定量技术（ｌａｂｅｌ－ｆｒｅｅ）筛选差异表达蛋白组。［结果］黄花月见草能够耐受低浓度（５０μｍＯｌ·ｌ～（－１））铜胁迫，而高浓度（１００μｍＯｌ·ｌ～（－１））铜胁迫使黄花月见草生长受到抑制，根系幼小、发黄，根系中铜含量显著增加。此外，根系蛋白组检测到４６个差异表达趋势蛋白（ＤｅＰ），这些蛋．．．
关键词：
黄花月见草 铜 蛋白质组学 差异表达蛋白
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘怀华 王莉雯 刘楠 刘旭 马侠 宁丽华 张华 崔德周 姜川 陈化榜
【目的】分离授粉早期玉米花丝的总蛋白质,为从蛋白质组角度揭示玉米花粉与花丝早期的相互作用奠定基础。【方法】以玉米(ZeamaysL.)自交系Ga25为试材,采用三氯乙酸-丙酮法提取总蛋白质,运用双向电泳、质谱分析与检索技术,比较自交授粉后1h和2h的花丝蛋白质组的差异。【结果】与授粉1h的蛋白质组相比,在授粉2h后的蛋白质组中出现28个差异蛋白点,其中,6个蛋白质点特异表达,19个蛋白质点上调表达,3个蛋白质点下调表达;通过MALDI-TOF-MS质谱测序和MASCOT序列分析,注释了23个蛋白质点,其余5个为未知蛋白;功能分类表明,差异蛋白质分别参与细胞壁合成(21.4%)、防御/抗胁迫(1...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂红毅 钟晓武 衣启营 张利平 邹勇 赵萍
【目的】研究家蚕不同发育时期精巢组织中小热激蛋白(sHSP)变化,为阐明其在家蚕精子发生中的重要作用提供理论参考。【方法】利用双向电泳技术建立家蚕5龄第5天、化蛹第1天和化蛾第1天3个时期的精巢电泳图谱,并用Imagemaster2D 6.0软件分析不同时期图谱中的差异蛋白,再用基质辅助激光解析离子质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定。【结果】鉴定出家蚕精巢中5个小热激蛋白,分别为sHSP23.7、sHSP20.8、sHSP 20.4、sHSP19.9和sHSP19.8,它们在化蛹第1天和化蛾第1天的蛋白合成量比5龄第5天显著降低。【结论】在家蚕精巢中,5龄第5天是形成有核精子的...
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