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[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
卫浩 许德晨 崔杨 魏开举 袁斯明 刘扬中
铜转运蛋白hCtr1细胞膜内的C端区域对于细胞的铜转运过程具有重要作用,然而这一结构域对铜离子的捕获和胞内蛋白的铜分布机理尚不清楚.为了研究hCtr1蛋白的C端结构域与铜的结合方式,通过紫外-可见吸收光谱、核磁共振谱和质谱等方法,对C端8肽(C8)与铜离子的结合进行了分析.结果表明,一价铜离子对C8有很高的亲和力(log K=16.6).C8能够结合多个铜离子,其HCH基序中的组氨酸和半胱氨酸残基是铜结合位点,而另一个天冬氨酸残基也可能参与铜结合.进一步研究发现,铜离子能够从C8转移到Atox1.实验数据揭示了铜与hCtr1结合的详情,也有助于理解铜在细胞中的分布.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘众杰 李傲 崔梦杰 许瀛之 上官凌飞 贾海锋 王晨 房经贵
[目的]本文旨在研究重金属铜对葡萄植物生长发育的影响,为揭示重金属铜对植物的伤害机制提供理论依据。[方法]采用过量的硫酸铜以及硫酸铜与其螯合剂混合液处理葡萄植株幼苗,以Hoagland溶液为对照,分析根和叶片的发育情况,叶绿素含量以及铜在植株中的分布情况;克隆了铜转运蛋白基因VvCTR1,分析其在果实发育过程中的表达量,并对其结构特征和物种间的同源性进行分析,同时分析铜胁迫下葡萄根、茎和叶中的VvCTR1表达情况。[结果]与对照相比,过量的硫酸铜、硫酸铜与柠檬酸或EDTA混合处理可以抑制葡萄植株新根的发育
关键词：
铜 葡萄 生理性状 基因表达
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
令狐远凤 杨阳 潘永 段世宇 张家莉 张宝太 杨琦
为了解RybB sRNA、RNA伴侣蛋白Hfq对沙门菌外膜蛋白fadL、ybfM、ompN的作用，利用λ-red同源重组系统构建fadL、ybfM、ompN基因lac融合菌株，通过P22噬菌体转导完成颜色指示菌株中RybB、hfq基因的单缺失与双缺失，进行β-半乳糖苷酶活性试验和qPCR,对其相应表达量进行分析.结果表明，Hfq抑制ybfM、ompN的表达，但fadL的表达上调；RybB sRNA抑制ompN、fadL的表达，但ybfM的表达上调.当Hfq与RybB共同对ybfM、fadL、ompN进行调控时，对ompN、ybfM的表达具有抑制作用，但fadL的表达上调，且Hfq的调控作用总体大于RybB.
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张家莉 潘永 段世宇 令狐远凤 郑如雯 杨琦
细菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)与毒力密切相关。为探究鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和伴侣蛋白Hfq对T3SS相关基因spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK的调控，利用Red同源重组技术构建了上述基因与lacZ的融合菌株，在此基础上利用P22噬菌体转导技术分别构建上述融合菌株与gcvB、hfq的单缺失菌株，通过qPCR和β-半乳糖苷酶试验分别检测gcvB、hfq缺失后各基因的转录水平和蛋白水平的变化。结果显示：与标准菌株相比，gcvB缺失后，spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调；prgJ、prgK的转录水平上调，蛋白水平下调。hfq缺失后，spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调，prgH、prgI、prgJ、prgK的蛋白水平下调。表明Hfq和GcvB均可对spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK进行调控。上述结果可为鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和Hfq的作用机理研究提供参考。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张家莉 杨阳 潘永 段世宇 令狐远凤 杨琦
为探究sRNA GcvB与伴侣蛋白Hfq对靶基因stm4351的调控作用，通过λred同源重组、FLP/FRT重组和转导构建了基因缺失菌株Δstm4351∷lacZ、stm4351ΔgcvB∷cat、stm4351Δhfq∷tetRA、stm4351Δhfq∷tetRAΔgcvB∷cat,并通过β-半乳糖苷酶(LacZ)试验和荧光定量PCR试验测定了gcvB与hfq缺失后LacZ活性和stm4351转录水平的变化情况.β-半乳糖苷酶试验结果显示：gcvB或hfq缺失菌株的LacZ活性均升高，表明stm4351基因的蛋白表达水平升高；hfq缺失菌株的LacZ活性高于gcvB缺失菌株；hfq和gcvB同时缺失后，LacZ活性比单缺失菌株高.荧光定量PCR结果显示：hfq缺失后，stm4351的转录量极显著下降；而gcvB缺失及hfq和gcvB同时缺失对stm4351转录量的影响不显著.以上结果说明：GcvB、Hfq均对stm4351的表达存在抑制作用；在Hfq的辅助作用下，GcvB对stm4351表达的抑制作用增强；Hfq协同GcvB对stm4351的调控途径可能有2种或更多；同时，Hfq对stm4351的保护或激活作用可能受到GcvB的影响.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
贺晓燕 龚义勤 徐良 赖德强 温天彩 柳李旺
运用PCR和RT-PCR技术从萝卜中克隆出RsIRT1基因,其cDNA包含一个长度为1 038 bp的开放阅读框,编码345个氨基酸,蛋白质相对分子质量为36.37×103。TMHMM Server v2.0分析RsIRT1蛋白有8个跨膜结构域,推测为一种膜蛋白;蛋白序列同源分析表明,萝卜RsIRT1(AFJ05595)与拟南芥AtIRT1(XP-002869968)、遏蓝菜TcIRT1-P(CAL25151)的遗传距离最近。半定量RT-PCR表达分析表明,正常铁营养时RsIRT1基因在萝卜花瓣、花蕾、叶片和根中均不表达,缺铁胁迫及缺铁加镉(100 mg·L-1)胁迫下表达,且缺铁加镉胁迫下,...
关键词：
萝卜 IRT1基因 镉 表达分析
[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
侯文韬 王亮 徐达 陈宇星 周丛照
ABC转运蛋白,即ATP结合盒转运蛋白(ATP binding cassette transporters),是一类广泛存在于生物界的主动运输蛋白.它由四个结构域组成:两个跨膜结构域(transmembrane domain,TMD)和两个核酸结合结构域(nucleotide-binding domain,NBD).ABC转运蛋白通过NBD水解三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)将底物逆化学势能经由TMD进行跨膜运输.ABC转运蛋白广泛参与各种生理过程,因为几乎所有具有生理功能的分子都是ABC转运蛋白的底物.人类基因组共编码48个ABC转运蛋白,其功能的异常与人类重大疾病直接相关.本文简要介绍人类ABC转运蛋白的分类和结构特征,并着重关注人类ABC转运蛋白结构与功能研究的最新进展以及与人类重大疾病的关系.
关键词：
ABC转运蛋白 分类 结构 人类疾病
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
邵若玄 沈忆珂 周文彬 方佳 郑炳松
ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白家族庞大,种类繁多,包括全转运子和半转运子等2种类型。全转运子的核心单元包括2个核苷酸结构域(NBD)和2个跨膜结构域(TMD),而半转运子只含有1个膜结构域(MSD)和1个NBD。植物ABC转运蛋白不仅参与植物体内激素、脂质、金属离子、次生代谢物和外源物质的运输,并且有利于植物与病原体间的相互作用和植物体内离子通道调控等重要的生理过程的进行,是一类重要的跨膜运输蛋白家族。HUGO系统中ABC家族分为A～H 8个亚族,模式植物基因组测序的完成极大促进了ABC转运蛋白的研究与发现,近几年已从多种植物中克隆了不同亚族的基因并研究其表达与功能...
[期刊] 林业科学
[作者]
苏烁烁 李明 吴鹏飞 张颖 马祥庆
【目的】PHT1基因家族是影响植物吸收磷营养的重要磷转运子之一。从杉木32号磷高效家系c DNA中克隆得到PHT1基因家族的1个杉木磷转运蛋白基因ClPht1;1,并对不同程度磷胁迫下ClPht1;1的时空表达进行研究,为杉木PHT1基因序列特征和功能结构的研究以及磷高效利用杉木基因型的选育奠定基础。【方法】根据PHT1基因家族序列保守性设计简并引物,以32号磷高效杉木基因型根系c DNA为模板进行扩增获得目的基因ClPht1;1的c DNA序列,使用RACE技术对目的基因进行全长克隆,并对其序列特征、同
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周小琼 丁一琼 左丽 喻德跃
【目的】硫转运蛋白(sulfate transporter,SULTR)参与根系对外界环境中硫酸根(SO42-)的吸收与转运。大豆硫转运蛋白基因GmSULTR1;2b在根中特异表达,其功能是将外界的SO42-吸收转运到植物根系中。文章克隆大豆硫转运蛋白GmSULTR1;2b的启动子,研究该启动子的驱动活性和组织表达情况,从而了解GmSULTR1;2b的调控机制,为提高大豆含硫氨基酸含量提供分子依据。【方法】根据NCBI中GmSULTR1;2b的序列,分析预测该基因上游2 259 bp为启动子,并利用在线数据库PLACE和Plant-CARE预测该启动子序列的调控元件。以大豆品种南农N2899的...
[期刊] 林业科学
[作者]
边晨凯 龙定沛 刘雪琴 魏从进 龚加红 赵爱春
【目的】研究川桑液泡膜型Ｎａ＋／Ｈ＋逆向转运蛋白（ＮＨＸ）基因的功能，探究桑树耐盐机制，为植物抗逆基因工程筛选提供优良的候选基因。【方法】以川桑基因组数据库为基础，基于同源基因序列的保守性，以川桑叶片ｃＤＮａ为模板克隆川桑液泡膜型ＮＨＸ基因；利用生物学软件和在线公共平台，分析所得基因编码的蛋白质序列及功能结构域，并构建系统进化树，分析与其他物种的亲缘关系。采用荧光定量ＰｃＲ方法研究在Ｎａｃｌ胁迫条件下不同时间段‘湖桑３２号’根、茎、叶等不同组织中桑树ＮＨＸ１表达量的变化情况；通过构建超量表达载体，将其转化到拟南芥中，分析转基因拟南芥在Ｎａ ｃｌ胁迫环境中的种子发芽数，根长、侧根生长情况和幼苗成．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
许海峰 刘静轩 王意程 左卫芳 曲常志 王得云 张静 姜生辉 王楠 陈学森
【目的】研究新疆红肉苹果杂种一代优系‘红脆１号’液泡膜葡萄糖转运蛋白基因ＭｄＶＧＴ１生物学信息、表达水平及其在糖代谢中的功能，旨在为进一步完善功能型苹果育种的理论与技术体系提供参考。【方法】以新疆红肉苹果杂种一代优系‘红脆１号’为试材，克隆ＭｄＶＧＴ１，对其进行生物信息学分析；并采用荧光定量ＰＣＲ分析该基因在不同组织及不同发育时期的表达，分析‘嘎啦’组培苗中该基因在葡萄糖诱导下的表达，通过酵母双杂交验证其互作关系，并通过原核诱导获得重组蛋白。【结果】在‘红脆１号’中克隆获得ＭｄＶＧＴ１全长，测序发现其包含１ ５０６ ｂＰ完整的开放阅读框，编码５０１个氨基酸，预测其编码蛋白质分子量为５３．１６ ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
李孟军 高欣娜 傅晓艺 史占良 郭进考
根据普通小麦HKT1 cDNA序列(GenBank登录号:U16709)设计基因特异引物,通过筛选矮败中国春BAC文库,获得含有HKT1基因组序列单克隆BAC。根据HKT1 5'-端已知序列设计测序引物,以单克隆BAC质粒为模板进行测序,序列经Sequencer软件拼接,获得了HKT1基因起始密码子上游4 192 bp序列。用Neural Network PromoterPrediction(NNPP)软件分析此序列,预测存在9个转录起始点。PLACE软件分析表明,该序列具有启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box,包含多个胁迫诱导元件,如盐诱导元件GAAAAA,抗冻、缺水、脱落酸、...
关键词：
小麦 高亲和性钾转运蛋白 启动子
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈红梅 李小娟 马春英 段巍巍 肖凯
以通过在国际生物信息学网站中获得的、尚未开展分子特征和功能研究的小麦磷转运蛋白基因TaPT2;1为基础,研究了该基因的分子特征和应答外源Pi特征。结果表明,TaPT2;1的cDNA长2 094 bp,编码568个氨基酸,编码蛋白中含有13个保守跨膜域,翻译后蛋白在亚细胞水平上定位于线粒体。在表达特征上,TaPT2;1呈明显的丰磷高表达特征,遭遇低磷逆境后根、叶中的表达水平明显下调;不同器官相比,丰、低磷条件下的该基因表达均为叶片明显高于根系。遗传转化TaPT2;1启动子和报告基因GUS的T2转基因烟草植株证实,供试基因启动子驱动下游基因的表达,与上述TaPT2;1在不同供磷水平、组织间的表达结...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭丽 郭程瑾 路文静 李小娟 肖凯
【目的】以中国春遗传背景的整套B染色体双端体为材料,鉴定磷转运蛋白基因TaPHT2;1的染色体定位特征。解析不同供磷水平下,上述材料和不同磷利用效率小麦品种该基因的表达特征及其与植株干物质生产能力和磷效率特征的联系。【方法】采用溶液培养法水培中国春(CS)及该品种遗传背景的整套B染色体组双端体和不同磷效率小麦品种材料。以B染色体组供试端体为材料进行TaPHT2;1 PCR扩增,鉴定TaPHT2;1在染色体上的定位。采用半定量RT-PCR及qRT-PCR技术分析B染色体组供试端体和小麦品种TaPHT2;1的表达水平。采用常规分析技术,测定供试材料单株干重和磷吸收参数。【结果】①PCR检测发现,在...
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