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[期刊] 中国水产科学
[作者]
王潇 刘福利 梁洲瑞 袁艳敏 张朋艳 汪文俊 孙修涛
利用海带‘黄官1号’雌、雄配子体克隆系为材料，以有、无额外氮(N)、磷(P)营养盐的天然海水和人工海水为培养液，添加不同浓度的铁离子(Fe~(3+))，通过观察配子体营养生长和生殖生长状况、测定光系统Ⅱ的最大荧光产量(F_(v)/F_(m))、计算发育率(包括卵囊形成率、排卵率、幼苗形成率)，探究Fe~(3+)在不同氮磷条件下对海带配子体生长发育的影响。结果显示：在额外添加氮磷营养盐条件下，浓度为3.60 μmol/L的Fe~(3+)对海带配子体营养生长阶段的促进作用最大；Fe~(3+)浓度为3.60～17.80 μmol/L时能够提高海带配子体的最大荧光产量，促进光合作用；加Fe~(3+)能够促进海带配子体由营养生长转向生殖生长；在氮磷营养盐满足的条件下，Fe~(3+)浓度为3.60 μmol/L、8.90 μmol/L、17.80 μmol/L时可促进海带配子体的生殖生长且它们之间没有显著性差异(P>0.05)；Fe~(3+)和氮磷营养盐对海带配子体的营养生长和生殖生长具有协同促进作用，即使氮、磷营养盐充足，在无铁条件下所有的海带配子体维持在营养生长状态；即使铁营养充足，在低氮、磷浓度条件下，大部分海带配子体(65%)维持在营养生长状态，虽然小部分海带配子体 (35%) 进入了生殖生长状态，但生殖生长明显滞后于较高氮磷浓度组。本研究表明，铁和氮磷营养盐对海带配子体的营养生长和生殖生长具有协同促进作用，铁是海带配子体由营养生长到发育成熟再到有性生殖过程中的关键因素；在添加适宜浓度的氮(0.275 mmol/L)、磷营养盐(0.0112 mmol/L) 条件下，添加Fe~(3+ )3.60 μmol/L对海带配子体的生长发育促进作用最大。该结果可为提高海带育苗效率提供支撑。
[期刊] 水产学报
[作者]
史西志 毕燕会 周志刚
利用抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)获得了海带雌、雄配子体差异表达的cDNA片段,将雄配子体差异表达的cDNA片段克隆于pGEM-T载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli)JM109,构建雄配子体差异表达的cDNA消减文库。自750个阳性克隆中随机挑选100个进行PCR扩增鉴定,电泳图谱表明插入片段大小在200~1000bp之间。进一步经过Southern斑点杂交筛选后,选取10个阳性克隆进行测序和序列分析,有7个片段与GenBank数据库中已知基因序列无明显同源性,初步判断为新的基因序列,3个片段与已知Fcp基...
[期刊] 水产学报
[作者]
许玲 毕燕会 周志刚
本研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)等技术获得海带配子体细胞一个γ-亚型碳酸酐酶(CA)基因的cDNA及DNA全长序列。其cDNA长为1 618 bp,编码由305个氨基酸组成的蛋白;DNA长为11 812 bp,具6个内含子,将开放阅读框(ORF)分割成7个外显子;其具有一个gamma-CA的结构域,并具有一个独特的左手平行β-螺旋结构域;由36个CA的氨基酸序列所构建的聚类图显示,该CA与其他物种的γ-CA聚为一支。因而,将该克隆的基因命名为Sjγ-CA。为了解其编码蛋白的功能,将Sjγ-CA的ORF亚克隆至表达载体pET28a上,导入大肠杆菌表达菌株BL21中,培养并诱导目的基因表达,亲和层析以纯化重组蛋白。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)、免疫印迹和质谱技术鉴定结果表明,纯化所获得的重组蛋白是Sjγ-CA。利用电极法和分光光度计法分别检测重组的Sjγ-CA在CO2与示,重组Sjγ-CA的水合酶比活力为0.82 U/mg,但没有酯酶活性,从而从功能上鉴定了Sjγ-CA。该研究为后续探讨Sjγ-CA在海带配子体乃至孢子体细胞或组织中的亚细胞定位等研究奠定了基础。
关键词：
海带 碳酸酐酶 亚型 基因克隆 功能鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
毕燕会 周志刚
根据糖海带(Laminaria saccharina)光捕获蛋白基因lhcf4的cDNA全长序列(GenBank登录号:AF226860)设计引物,通过RT-PCR方法获得海带(Saccharina japonica)配子体lhcf4基因的cDNA全长序列,共1 042 bp,编码一个含218个氨基酸的前体蛋白LHCF4,推测分子量为23.11 kDa,等电点为5.36。与其同源基因相似度分析表明,lhcf基因的开放阅读框(Open reading frame,ORF)在家族内及物种间高度保守,变异主要发生在非翻译区(Untranslated re-gion,UTR)。预测LHCF4成熟蛋白三...
[期刊] 水产学报
[作者]
余贞 毕燕会 周志刚
根据海带雄配子体抑制消减cDNA文库2个长为376 bp的表达序列标签(expressedsequence tag,EST),Blastn搜索发现它们与掌状海带的碳酸酐酶(carbonic anhydrase,CA)基因序列(GenBank登录号:AJ130777)有70%的相似性,结合该EST以及掌状海带CA基因保守序列设计引物,扩增得到海带配子体CA基因部分开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,再以此为基础设计基因特异性引物,然后利用cDNA末端快速扩增技术(rapidamplification of cDNA ends,RACE),克隆得到一条长2 804 bp...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
方璐 徐永江 崔爱君 姜燕 王滨 周鹤庭 柳学周
热休克蛋白(heat shock proteins， HSPs)在鱼类的应激与免疫反应中发挥重要的生理调控作用，HSP70是该家族的重要成员。为探讨热休克蛋白在大洋性经济鱼类黄条（鱼师） (Seriola lalandi)生长发育中的生理作用，本研究克隆获得了黄条（鱼师） hsp70基因的全长cDNA序列，并采用定量PCR技术测定了其组织分布及在早期生长发育过程中的表达特征。结果显示，黄条（鱼师） hsp70基因的cDNA序列全长为2332 bp，其中，5′-UTR长度为187 bp，ORF长度为1920 bp，3′-UTR长度为225 bp，编码639个氨基酸，蛋白质分子量为70.1 kDa，等电点为5.16。黄条（鱼师） hsp70 mRNA的组织表达具有性别二态性差异，其中，在雌性鳃、心、脾脏和卵巢组织中显著高表达(P<0.05)，且以卵巢中表达量最高；雄性垂体、鳃、头肾和精巢组织显著高表达(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
唐倩莹 吕凤 王启明 王倩 尤世民 柏文婷 郑海 王沛然 赵志刚 万建民
[目的]水稻的育性对产量有非常重要的影响,对水稻雌、雄不育(female and male sterility)突变体fms进行表型研究和基因图位克隆以丰富水稻生殖发育的分子机制。[方法]用甲磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)化学诱变粳稻品种‘宁粳4号’,获得1个稳定的雌、雄不育突变体fms,利用醋酸洋红染色、半薄切片和激光共聚焦显微技术对野生型和突变体的花药和胚囊进行细胞学观察和比较;利用FMS/fms杂合子和‘N22’杂交构建的F2群体进行遗传分析和基因图位克隆。[结果]细胞学观察发现:fms的花药壁中绒毡层和中间层缺失,花粉母细胞发育停滞,导致雄配子完全不育;突变体胚囊发育早期孢母细胞增多,成熟胚囊完全退化或出现多于8个的细胞核,导致雌配子不育。遗传分析表明,该不育性状由1对隐性核基因控制。通过图位克隆将FMS基因初步定位在第12号染色体长臂上的分子标记RM27877和RM28404之间。进一步扩大群体并加密分子标记,最终将候选基因定位在标记Ta-4和Ta-7之间,物理距离818 kb,该区间内预测有13个开放阅读框。基因组测序结果显示,fms在Os12g0472500的第1个外显子上有1个碱基突变,使色氨酸变成终止密码子,造成翻译提前终止。表达分析显示FMS在花药中特异性高表达,在胚囊中表达量较高。[结论]水稻育性突变体fms突变性状由Os12g0472500基因的隐性突变引起,该基因编码的蛋白影响水稻花粉和胚囊的发育。
关键词：
水稻 不育 突变体 基因克隆
[期刊] 华北农学报
[作者]
王敏 陈青云 陈光良 杨思泽
利用自制新型大气压等离子体装置对生菜种子进行处理,研究了不同电压的大气压等离子体处理对生菜种子萌发、幼苗生长及产量品质的影响。试验结果表明:不同电压的等离子体处理对生菜种子萌发的影响效果不同。其中,5610和5950 V处理对种子的萌发有促进作用,种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数与对照相比均有所提高,而6290~7310 V处理则抑制了种子的萌发,且电压越高抑制效果越明显。同时,等离子体处理种子α-淀粉酶活性提高,电导率降低,幼苗地上部鲜干质量、地下部鲜干质量、根体积、根活力及过氧化物酶活性也有不同程度的增加。不同电压的等离子体处理促进了生菜定植后的生长发育,产量最高比CK提高12.5...
[期刊] 水产学报
[作者]
王新安 马爱军 黄智慧 马得友 王婷 田岳强 王广宁 曲江波
采用全长/体长、体高/体长、全长/体高和体质量为评价指标,分别对9~33月龄大菱鲆雌、雄群体在生长发育过程中体型的动态变化及生长性能差异进行了比较。大菱鲆雌、雄群体形态比较结果显示,雌、雄群体的全长/体长、体高/体长、全长/体高在不同发育阶段呈现特有的变化,但在雌、雄群体间,除33月龄的体高/体长和全长/体高差异达到显著水平外,3项指标在不同阶段没有差异或差异不显著,即可以认为,对于统计初始体质量相同或相近的大菱鲆雌、雄群体,全长/体长、体高/体长和全长/体高3个形态比例指标是随发育时间序列同步变化。基于Logistic模型对大菱鲆雌、雄群体生长性能的比较结果显示,雌性群体的拐点月龄、拐点体质...
关键词：
大菱鲆 选育家系 雌雄群体 生长发育差异
[期刊] 华北农学报
[作者]
宁璞 毕燕会 周志刚
根据海带配子体光捕获蛋白基因lhcf6的cDNA全长序列(GenBank登录号:DQ250739)设计引物,利用基因组步移技术克隆得到其在雌、雄配子体中的5'-侧翼序列,长度分别为932,901 bp。测序结果比对显示二者相似度为33.3%,说明该基因在雌、雄配子体中具有不同的上游调控区。网络服务器PlantCARE和Softberry启动子元件预测结果表明,二者均含有TATA框、节律性相关元件MBS、光反应相关元件MNF1和GAG-motif,其中雌配子体lhcf6基因5'-侧翼序列还特有LHC基因特征元件AT-rich序列,雄配子体特有节律性相关元件Circadian元件,这些元件可能与该...
关键词：
海带 配子体 lhcf6 启动子 GFP
[期刊] 水产学报
[作者]
陈晶 王丽丽 石微微 周志刚
从已构建好的海带雄配子体抑制消减cDNA文库中,通过Southern点杂交及序列分析,发现一未知功能的差异表达基因片段(克隆b9)。首先根据该克隆序列设计基因特异性引物,利用cDNA末端快速扩增技术,自雄配子体中克隆了一条长831bp的cDNA序列,其中开放阅读框450bp,5'-非翻译区182bp,3'-非翻译区199bp且具有明显的poly(A)尾巴。同样利用PCR方法自雌配子体中克隆了该基因的cDNA序列,它与雄配子体的完全一致。蛋白同源搜索结果显示,该基因编码蛋白与点形念珠藻含有SpoIID/LytB结构域蛋白(SpoIID/Lyt Bdomain-containing protein...
[期刊] 华北农学报
[作者]
毕燕会 邹丹燕 周志刚
通过基因克隆和序列测定,获得了海带(Laminaria japonica)配子体的18S rRNA基因序列,其长度为1 716bp,GenBank登录号为EU293553。以蓝藻为外类群,采用邻接法(NJ)对分属9个门的藻类的18S rRNA基因序列进行系统发育分析。结果显示,褐藻门的海带与蓝藻门的念珠藻Nostoc sp.PCC7120、红藻门的日本凋毛藻(Griffithsia japoni-ca)、绿藻门的莱哈衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)遗传距离依次为0.819,0.303和0.219;杂色藻类中,海带与隐藻门的蓝隐藻(Rhodomonas sp.CS24)...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨青华 韩锦锋 刘华山 李巨
研究了液体地膜对棉花生长发育的影响。结果表明:液体地膜能加快棉花前期生长速度、适度抑制后期旺长、调控和优化棉花株型,使棉花早发、早熟。
关键词：
棉花 液体地膜 生长发育
[期刊] 水产学报
[作者]
陈昌生 章景荣 张振皎
礁膜(Monostroma nitidum)是我国重要的经济海藻之一,隶属于绿藻门,绿藻纲,石莼目,礁膜科,礁膜属。礁膜广泛分布于我国的东南沿海,生长在内湾静水处的岩石上或具有泥砂的石块上。日常所见的礁膜叶状体是配子体,为膜状,呈绿色或黄绿色,体软并具光泽。礁膜是绿藻中食用价值最高的一种,体软味美,我国南北沿海居民有食用。日本人也喜食“紫菜酱”(原料以礁膜为主,掺入少量紫菜,加入调味料,高压烹煮而成)。此外,礁膜还具有一定的药用价值,如清热化痰,利水解毒以及降低胆
关键词：
礁膜 配子体 发育 盐度 营养盐
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李霞 逄少军 苏丽
为了能够节约制冷成本，合理延长种海带在海上的预留时间，系统研究了不同温度（２０、２１、２２、２３、２４℃）和培养时间（４、８、１２、１６ ｄ）对两个海带品系（＂２０５＂和＂Ｃ０３３＂）孢子放散能力及胚孢子萌发率、受精率、雌配子体发育和幼孢子体生长的影响。结果显示，当海水温度达到２４℃时，孢子囊几乎丧失了放散能力，２０–２３℃的游孢子放散量差别不显著。在相同温度下，孢子囊培养时间为１２、１６ ｄ的胚孢子萌发率大于４、８ ｄ；同时，孢子囊培养１６ ｄ的雌配子体和幼孢子体具有最小值。在相同培养时间下，２３℃（或２４℃）的雌配子体和幼孢子体远远小于２０–２２℃的。相关性分析表明，海带雌配子体大小与幼孢．．．
关键词：
海带 孢子囊 游孢子萌发 养殖
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