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[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 李鑫  吴元华  顾晶晶  李立梅  
采用病情指数调查、DAS-ELISA和生理生化指标测定的方法,研究了铁元素对烟草抗马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)的室内效果及对植株抗病性的诱导作用。结果表明:当烟草叶面喷施铁元素浓度为33.60 mg·L-1时,烟株显症时间要迟于对照,使病毒含量降低至7.31mg·mL-1,仅为对照的45%。单独喷施铁元素和喷施铁元素后再接种PVYN处理,均能提高烟株体内过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)活性,并且在短时间内使活性氧的生成速率提高1.6倍,叶绿素a的含量提高1.4倍,表明铁元素能诱导烟株防御反应的应答,但对苯丙氨酸解氨酶(PAL)影响不大。此外,铁元素处理后再...
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 李鑫  吴元华  顾晶晶  赵秀香  
通过气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)及生理生化指标的测定,研究了铜(Cu)元素诱导感染PVYN的烟株信号物质的积累及对系统抗性的影响。结果表明:喷施Cu元素能延迟烟株显症和叶脉出现褐色坏死时间,降低发病程度,病毒增殖受到抑制,烟株体内的与抗性相关物质如脯氨酸及可溶性糖含量升高,电解质的外渗减少。此外,Cu元素处理能诱导信号物质水杨酸和乙烯的积累,水杨酸含量在接种后15d达到最大量3.93μg·g-1,为接种对照的1.3倍;而乙烯释放量在3~9d内均高于接种对照,在12d时乙烯释放量显著低于接种对照,分析认为前期Cu元素处理后诱导了乙烯释放的增强,进行抗性信号的传递。因此,喷施Cu元素...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 陈帅  刘贯山  周佳  杨爱国  王元英  孙玉合  
【目的】通过筛选并克隆烟草抗马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)相关基因,分析其在不同诱导时间的相对表达量,揭示烟草抗病毒诱导的分子机理,以期为烟草抗病毒病育种奠定基础。【方法】通过抑制差减杂交和cDNA芯片从PVY诱导的抑制差减杂交文库中筛选上调表达(Ratio>2)的基因中间片段,用RACE技术克隆其cDNA全长,并利用实时荧光定量PCR分析其在不同诱导时期的相对表达量。【结果】从受PVY诱导的烟草叶片中筛选一条595bp的基因中间片段并克隆得到一个全长为1770bp的天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp(GenBank登录号为GU144571),该基因编码506个氨基酸。多序列比...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 黄子彧  钟军  宋浩  黄德文  戴彬  戴林建  
【目的】为了烟草胚状体诱导培养体系能得到优化。【方法】以2个烟草杂交品种的花药与叶片分别作为试验材料,对影响胚状体诱导的因子:基因型、外源激素浓度及比例、培养条件、接种密度等进行对比研究。【结果】所有的供试材料均可被诱导出烟草胚状体,但不同基因型间诱导率差异显著,且花药被诱导出胚状体的能力要强于叶片;在IAA与6-BA浓度不超过0.5 mg/L时,胚状体诱导率较不加激素能得到显著提升,超过该浓度后,随着激素浓度的提升反而会使胚状体诱导率下降,愈伤组织诱导率上升;进行10 d的暗处理能显著提升胚状体的诱导率。【结论】诱导胚状体产生的最佳培养条件为采用叶片为诱导材料,每培养皿接种35颗,使用1/2 MS+0.125 mg/L IAA+0.5 mg/L 6-BA培养基,在黑暗条件下诱导10 d后,再转移至光照下培养。
[期刊] 华北农学报  [作者] 师金鸽  李占杰  杨铁钊  
通过外源水杨酸(Salicylic acid,SA)处理烟苗,研究了水杨酸处理的烟草接种黄瓜花叶病毒后,其病情指数及抗病相关酶活性和H2O2含量的变化。结果表明:接种CMV后21 d,SA处理烟株的病情指数显著低于对照;SA预处理的烟株在接种CMV前后叶片内的过氧化物酶(POD)活性和过氧化氢(H2O2)含量提高,过氧化氢酶(CAT)活性下降。表明水杨酸具有诱导烟草抗黄瓜花叶病毒的效应。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 肖田  姚廷山  于庆涛  
为了探讨青枯无致病力菌株对烟草青枯病的控病作用和是否诱导烟草抗病及其控病机理。采用TTC培养基,从茄青枯病株上分离获到青枯无致病力菌株Au004-1,用喷雾法及含菌培养基法测定其对青枯致病菌的抑制作用,并进行烟草青枯病温室盆栽控病试验;用该菌伤根灌接烟草,然后用紫外分光光度计测定叶片的过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和多酚氧化酶(PPO)活性,电泳分析病程相关蛋白(PRP)变化。结果发现,该菌株对青枯致病菌具有抑制作用,抑菌带宽分别1.03和0.83 cm;在温室盆栽试验中它对烟草青枯病具有较好的防效,接种致病菌30 d后相对防效可达77.5%;该菌处理的烟草苯丙氨酸解氨酶(PA...
[期刊] 华北农学报  [作者] 史宏志  于建军  刘国顺  Bush L P  江凯  
以白肋烟为材料研究了采用乙烯利处理对烟碱转化株进行早期鉴定的有效性以及取样时间和部位对鉴定效果的影响。结果表明,乙烯利处理早期鉴定的转化株包括了所有调制后自然形成的转化株,还可以鉴别出一些在正常晾制条件下不能有效鉴别的低转化株;早期测定的烟碱转化率一般高于烟叶自然晾制后的烟碱转化率,有利于提高鉴定的准确性和有效性。根据鉴定结果将非转化株、低转化株和高转化株分别自交留种,后代群体分别有8.6%,59.8%和100%的转化株,表明鉴定方法是有效的,且通过转化株的鉴别和清除可以对品种进行有效改良。对转化株的鉴定从苗期到开花前都可以进行,移栽后4~6周取样测定更利于大批量处理和检测。不同部位叶片都可用...
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 吴元华  董雪  安梦楠  苏燕妮  李晓冬  
植物原生质体是除去细胞壁后仍具有活力的裸露单细胞,其在植物RNA病毒的复制机理研究方面具有广泛的应用。为了获得高产、高活力的烟草原生质体,以烟草(Nicotiana tabacum Linn.)品种K326为材料,对原生质体制备体系中的不同细胞壁酶解液成分、酶解时间、酶解渗透压稳定剂含量、离心时间以及离心转速等因素进行优化。结果表明:在含1%纤维素酶,0.5%离析酶,0.6mol·L-1甘露醇的酶解液中,26℃慢速震荡(40r·min-1)酶解4h,700r·min-1离心3min,得到产量及活力较高的原生质体,可直接用于植物病毒的接种试验;利用聚乙二醇(PEG)融合法向获得的高活力原生质体中...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 商文静  吴云锋  赵小明  杜昱光  商鸿生  
采用ELISA-DSM法和半叶枯斑法,研究了壳寡糖诱导对普通烟(Nicotiana tabacum)体内TMV 增殖的影响。结果表明,普通烟经50μg/mL壳寡糖溶液诱导处理后,其对TMV的侵染表达了高水平的系统抗病性,显症推迟4~7 d,平均严重度降低了82.9%。ELISA-DSM法检测结果表明,壳寡糖诱导处理的普通烟植株体内病毒浓度明显降低;在接种后10 d,接种叶片OD值仅为0.400,相当于同期不诱导对照的23.0%;新生叶片OD 值为0.190,相当于同期不诱导对照的38.7%。以发病普通烟叶片为接种体,利用半叶法接种心叶烟(Nicotiana glutinosa),结果表明,壳寡...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 刘伟  王金信  杨广玲  隋标峰  鲁梅  
【目的】以烟草(NC-82)为试验对象,运用组织培养方法,通过对苯磺隆对烟草愈伤组织抗性发展的影响、对愈伤组织生长的影响、对愈伤组织分化率的影响、对愈伤组织乙酰乳酸合成酶活性的影响和抗性筛选再生烟草苗抗性潜势进行较系统的研究,以期对ALS抑制剂类除草剂的抗性研究和科学合理使用以延缓抗药性的发生,以及对作物的抗性育种提供一定的理论依据。【方法】将烟草诱导产生的胚性愈伤组织在含有不同剂量磺酰脲类除草剂苯磺隆的MS培养基上继代培养进行抗性诱导,并对愈伤组织的生长情况及其ALS对苯磺隆敏感性进行跟踪检测;对抗性筛选再生烟草苗进行抗性检测。【结果】随着培养代数的增加,愈伤组织对苯磺隆的抗药性逐渐增强,经...
[期刊] 华北农学报  [作者] 赵春颖  王凤茹  李兴红  
本试验用天然抗病毒剂VA作诱导因子 ,抗病品种枯斑三生烟 (NicotianatabacumL SamSunNN)和感病品种三生烟 (NicotianatabacumL SamSun)经VA诱导处理后 (清水作对照 )接种TMV。结果表明 ,VA可局部和系统地诱导烟草叶片对TMV产生抗性 ,其枯斑抑制率可达 4 0 %~ 6 0 % ,枯斑直径比对照减少 30 %~ 5 0 % ,且在抗病品种SamSunNN中 ,VA +TMV处理明显增加了PR蛋白的含量 ,在不接种情况下VA诱导的烟草叶片中PR蛋白表现很弱。在感病品种SamSun烟中 ,VA不能诱导PR蛋白产生。说明VA诱导PR蛋白含量的增...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王荣  梁元存  王丹丹  刘爱新  孟庆伟  
【目的】研究烟草细胞对parasiticein的反应,了解parasiticein诱导烟草细胞的PCD的发生机制。【方法】用浓度约100nmol·L-1的parasiticein处理烟草悬浮细胞,相差显微镜下观察细胞的形态变化。【结果】发现烟草细胞的细胞膜收缩,与细胞壁间形成空隙,原生质浓缩等;用trypanblue染色后观察到类似现象。对诱导处理的悬浮细胞经DAPI(4,6-diamino-2-phenylindole)染色后,通过荧光显微镜观察,发现细胞核先后表现染色质凝集、形成颗粒状等特征;对处理的悬浮细胞提取基因组DNA并进行琼脂糖凝胶电泳,可观察到梯状的DNA条带(DNA ladde...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 刘廷利  茹艳艳  刘莉  刘沛菡  窦道龙  
CRN(crinkling and necrosis induced protein)蛋白是卵菌所特有的一类效应因子,在已经测序的疫霉种中,每个基因组中预测都含有上百个CRN基因,关于其功能和分子机制目前研究不多。前期研究发现,大豆疫霉效应因子PsCRN115是大豆疫霉的致病性必需因子且能抑制植物的细胞死亡。为了进一步研究PsCRN115的功能,本研究采用农杆菌渗入法介导的基因瞬时转化技术在烟草上过表达该基因,发现PsCRN115可显著提高烟草对烟草疫霉的抗性。随后采用荧光定量PCR研究了其作用机制,发现PsCRN115可诱导水杨酸(SA)通路防卫反应基因的高表达,但对乙烯(ET)和茉莉酸(J...
[期刊] 华北农学报  [作者] 赵春颖  李兴红  商振清  李广敏  
本试验采用天然抗病毒剂VA作诱导因子 ,抗病品种枯斑三生烟和感病品种三生烟经VA诱导处理后第 7d (清水处理作对照 ) ,在其新生长的叶片上接种TMV (不接种的烟草为对照 )。结果表明 ,VA可以系统诱导枯斑三生烟对TMV产生抗性 ,其枯斑数抑制率达 6 4 3% ,枯斑大小抑制率为 37 3% ;超氧化物歧化酶 (SOD) ,过氧化物酶 (POD)活性均比对照明显提高 ,其中接种后 4 8h变化幅度最大 ;丙二醛 (MDA)含量的变化与酶活性变化呈相反趋势。说明VA和TMV共同作用系统诱导枯斑三生烟对TMV产生抗性。
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 余朝阁  周娣  吕亭辉  李天来  
为研究钙对β-氨基丁酸(BABA)诱导番茄抗病性的调控与防御酶活性的关系,本研究通过外源增钙和缺钙处理,系统探索β-氨基丁酸诱导的番茄抗病性和主要防御酶活性的变化。结果表明:用β-氨基丁酸处理番茄叶片后,处理叶片及其上位非处理叶片对灰霉病的抗性均显著增强,二者病情指数比对照分别降低35.4%和23.9%;外源CA2+可以显著促进BABA诱导的番茄抗病程度,用BABA诱导同时外源喷施CA2+,番茄诱导叶和非诱导叶的病情指数分别低于对照53.6%和34.4%;而EGTA(CA2+螯合剂)和LA CL3(质膜钙通道抑制剂)则不同程度地抑制了BABA诱导的抗病性。外源BABA同样提高番茄处理叶片和非处...
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