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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王艳 尹静 马泓思 詹亚光 苏欣 梁甜 张梦岩
为探讨Ca2+作为信号分子在水杨酸(SA)诱导白桦悬浮细胞三萜合成中的作用,本文用SA、Ca2+及Ca2+阻断剂对白桦悬浮细胞进行处理,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定细胞中总三萜及其组分的积累量;同时利用荧光定量PCR方法检测了白桦细胞中三萜合成途径关键酶基因(FPS、SS、SE、BPW、BPY、CAS)和钙调蛋白基因表达变化。结果显示:水杨酸可诱导白桦悬浮细胞三萜物质(总三萜、齐墩果酸、白桦脂醇、白桦脂酸)的合成及相关基因的上调表达,且Ca2+的加入使得这种诱导效应更为显著,暗示白桦细胞中钙信号分子介导了水杨酸诱导三萜物质的合成。而对SA与各种Ca2+阻断剂互作处理结果显示,Ca2+...
关键词：
白桦 三萜物质 关键基因 钙调蛋白
[期刊] 林业科学
[作者]
翟俏丽 范桂枝 詹亚光
将促进白桦三萜积累的拟茎点霉属的内生真菌诱导子添加到白桦悬浮培养体系中,研究40,100,400μg·mL-1的真菌诱导子对生长初期、指数生长期和生长末期的悬浮细胞干质量和三萜积累的影响。结果表明:真菌诱导子的不同诱导方案均促进白桦悬浮细胞中三萜的积累,而细胞干质量积累却被抑制;其中最佳诱导条件为在指数生长期的白桦细胞中添加40μg·mL-1的真菌诱导子诱导1天,诱导后细胞中的三萜含量达29.47mg·g-1,比对照增长78%。在优化诱导条件下,考察培养液pH和电导率、细胞苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)活性,发现真菌诱导后6～10h内,引发培养液的碱化和电导率的升高,特别是白桦...
关键词：
白桦 真菌诱导子 三萜 悬浮细胞培养
[期刊] 林业科学
[作者]
范桂枝 翟俏丽 于海娣 王晓东 王博 詹亚光
以产三萜的白桦悬浮系为试验材料,在优化白桦悬浮细胞生长与三萜积累的培养基种类和接种量的基础上,分析白桦悬浮细胞生长和三萜积累的动力学关系,同时考察1个培养周期内白桦细胞内外主要营养成分的变化。结果表明:1)在MS,NT,IS,WPM,1/2MS,B56种培养基和10～40g·L-1接种量中,有利于白桦细胞生长和三萜生产的培养基为B5和接种量为20～30g·L-1FW;2)在1个培养周期内,白桦悬浮细胞培养过程中三萜的产量与细胞生物量是相偶联的,随着生物量的增加三萜产量呈增长趋势,其中,白桦细胞在第12天比生长速率达到最高0.18,三萜合成速率和比合成速率在第9天达到最高值,分别为0.73mg·...
关键词：
白桦 悬浮细胞 三萜 营养成分
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈阳辉 刘静 陈琰 侯春燕 王冬梅
【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,N...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
黄雅婷 詹亚光 马明媚 范桂枝
［目的］探究一氧化氮供体硝普钠（ＳＮＰ）对白桦悬浮细胞中Ｋ～＋、Ｃａ～（２＋）和白桦酯醇累积的影响及外源Ｋ～＋、Ｃａ～（２＋）与ＳＮＰ互作对白桦酯醇累积的影响。［方法］利用高效液相色谱法、原子吸收光谱法及比色法分别测定白桦酯醇、Ｋ～＋及Ｃａ～（２＋）含量。［结果］ＳＮＰ处理对白桦悬浮细胞中Ｋ～＋、Ｃａ～（２＋）的累积存在浓度和时间效应，其中１ ｍｍｏｌ·ｌ－１ＳＮＰ处理１２ ｈ时Ｋ～＋含量最高，是对照组的１．４７倍，而Ｃａ～（２＋）含量在５ ｍｍｏｌ·ｌ－１ＳＮＰ处理９６ ｈ时最高，是对照组的１．５０倍。１ ｍｍｏｌ·ｌ－１ＳＮＰ与不同浓度ＫＣｌ共同处理后，白桦酯醇含量高于单独ＳＮＰ与ＫＣｌ处．．．
关键词：
白桦悬浮细胞 白桦酯醇 硝普钠 钾 钙
[期刊] 中国农业科学
[作者]
柳金伟 焦娇 王蕾 王莲莲 褚小静 梁元存
【目的】阐明氯化汞处理烟草悬浮细胞产生的细胞死亡具有细胞编程死亡(programmed cell death,PCD)的特征和分子机制。【方法】采用形态和生物化学方法观察氯化汞处理细胞后的变化,并采用药理学方法,通过添加抑制剂和抗氧化剂阐明氯化汞引发的信号转导途径。【结果】氯化汞诱导产生的细胞死亡具有PCD特征,包括染色质浓缩、细胞核的TUNEL检测呈阳性和DNA ladder的形成。氯化汞诱导烟草悬浮细胞过氧化氢积累,过氧化氢酶和抗坏血酸等抗氧化剂能降低细胞死亡率。蛋白激酶抑制剂、磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂能显著地降低氯化汞引起的细胞死亡和过氧化氢积累。【结论】氯化汞引起的细胞死亡是一种PC...
关键词：
烟草 氯化汞 细胞编程死亡
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘子会 张红梅 郭秀林
【目的】以玉米第二真叶下表皮为材料,研究ABA诱导的保卫细胞胞质Ca2+浓度的变化,并探讨Ca2+来源。【方法】通过数字激光共聚焦显微镜测定ABA诱导的胞质钙离子浓度变化,并通过异搏啶、EGTA[乙二醇双(2--氨基)乙基醚-N,N,N’,N’四乙酸]药理实验探讨钙离子的来源。【结果】ABA不能诱导所有的保卫细胞胞质钙离子浓度的增加,而可被ABA诱导的保卫细胞中又表现了不同的钙离子浓度变化形式。异搏啶预处理后,不能改变保卫细胞对ABA的反应,但EGTA预处理,则抑制了ABA诱导的胞质钙离子浓度升高。此外,气孔运动观察结果显示:ABA可以明显的诱导气孔关闭,但EGTA、异搏啶的预处理延缓了ABA...
关键词：
ABA 胞质钙离子 玉米
[期刊] 华北农学报
[作者]
路艳 马明东 曹慧 李媛媛
朱砂根是紫金牛科中药植物，主要活性成分为齐墩果烷型三萜类化合物朱砂根皂苷。为探索朱砂根三萜皂苷生物合成的分子基础，采用Illunima HiseqTM 4000对无菌水、2 mmol/L SA处理的3年生朱砂根植株进行转录组测序，基于Blast完成Unigene分类、功能注释、代谢通路分析、蛋白功能注释、差异表达基因分析、代谢途径关键基因挖掘等。共获得41.63 Gb数据，拼接组装获得102 491条Unigenes,平均长度831 bp,注释率50.21%。筛选出3 417个SA应答差异表达基因，其中2 725个基因上调，692个基因下调。差异表达基因显著富集于次生代谢物生物合成、代谢途径、氨基糖和核苷酸糖代谢、糖酵解/糖异生、碳代谢等通路。与朱砂根三萜皂苷相关的代谢通路，包括萜类骨架生物合成(ko00900)和倍半萜与三萜生物合成(ko00909),共筛选出8个关键酶、11条差异表达Unigenes。SA处理后萜类骨架生物合成MVA途径HMGR、HMGS、MVK、GGPS、SS、SQE基因差异表达显著，MEP途径DXS、DXR、MCT、CMK、MDS、HDR基因差异表达不显著。催化生成齐墩果烷型五环三萜前体的关键酶β-香树素合成酶基因(β-AS)表达量下调，后修饰基因CYP450s(CYP72A67)表达量也下调。荧光定量qPCR值与RNA-seq表达量FPKM值变化趋势一致。推测SA通过诱导MVA途径的关键酶基因表达影响朱砂根三萜皂苷的积累，MEP途径中的酶基因可能参与其他支路次生代谢产物的合成。
[期刊] 林业科学
[作者]
王敬文 蒋晶
研究了脱落酸（ＡＢＡ）诱导黑荆树悬浮培养细胞抗冻性发育的有关问题，其中包括ＡＢＡ施用浓度、抗冻性发育的时间进程、ＡＢＡ诱导可溶性蛋白质含量增高、环己亚胺对抗冻性发育的抑制作用等。研究结果表明，黑荆树悬浮培养细胞能够在添加ＡＢＡ的ＭＳ培养基中，在２５℃进行抗寒诱导，以１０ｍｇ／ＬＡＢＡ处理８天的悬浮培养细胞在－６℃的存活率达８３．６％，而对照存活率为零。ＡＢＡ能够诱导悬浮培养细胞可溶性蛋白质含量增高５．５倍，环己亚胺能够抑制蛋白质含量增高，同时也抑制低温驯化和ＡＢＡ诱导的抗冻性发育。
关键词：
黑荆树,抗冻性,ABA
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
胡海英 赵亚美 阎晓磊 王华芳
香花槐是集绿化、固土、饲料等于一体的多用途林木,其细胞培养则是充分利用该树种优良特性的生物工程技术基础.该文以香花槐叶片为外植体,研究愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系.结果表明,愈伤组织诱导最适培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L.愈伤组织生长符合S型曲线,在固体培养基上,培养7 d进入指数生长期,到28 d,愈伤组织鲜重从1.329 3 g增长到10.763 7 g.悬浮培养的细胞,最大生长量为鲜重8.496 g或干重0.474 g.S型生长曲线分析表明,细胞生长迟滞期为3.6 d,最大生长量为14.6 g.
关键词：
香花槐 愈伤组织 悬浮细胞 细胞培养
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
夏启中 张明菊 张献龙 郭小平
棉花悬浮细胞经高浓度细胞分裂素(2mg/LKT或4mg/LKT)处理后第4天大量死亡,培养物呈褐黑色;抽提总DNA,进行琼脂糖胶电泳,结果表明:2mg/LKT和4mg/LKT两处理中有明显的大小为140~180bp及其倍增量片段的DNA“梯”。进行PI和FDA染色显微观察可以看到:2mg/LKT处理中大部分细胞的细胞核较小,核质浓缩,呈棒形或弯月形;胞质浓缩,出现了不对称的质壁分离,且丧失了FDA染色活性。这些结果表明,由高浓度细胞分裂素处理引起的棉花悬浮细胞大规模死亡是一种细胞程序性死亡(PCD)。不同的生理状态(UCSA和BAE)和不同生长时期(指数增长期和静止期)的棉花悬浮细胞对高浓度细...
[期刊] 林业科学
[作者]
尹忠平 上官新晨 陈继光 吴少福 黎冬明
通过大孔树脂吸附、硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶层析、半制备高效液相色谱及重结晶对青钱柳悬浮培养细胞三萜酸进行分离纯化,获得5个单体三萜酸,经高分离度快速液相-飞行时间质谱(RRLCTOF/MS)、核磁共振氢谱(1H NMR)和核磁共振碳谱(13C NMR)等分析,分别被鉴定为2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基熊果酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸,其中2α-羟基齐墩果酸和白桦脂酸是首次在青钱柳中得到分离鉴定。
[期刊] 水产学报
[作者]
庞敏 屈佩 高春蕾 王宗灵 张镱
通过MTT分析、光学显微镜观察、Hoechst33342染色质荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、罗丹明123染色及钙离子激光扫描显微镜检测等手段,分析了虾夷扇贝毒素(yessotoxin,YTX)对Hela细胞的毒性作用。通过实验发现,正常Hela细胞与不同浓度YTX共孵育24 h后,一定浓度的YTX能对Hela细胞产生毒性作用,使其发生明显凋亡特征,如形态变化、染色质凝缩、DNA片段化以及线粒体膜电位降低。此外,YTX还能造成Hela细胞内胞质钙离子升高。这种毒性作用可能是YTX通过对胞内钙离子浓度的影响进而诱导发生的。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘菲 刘辉 梁元存 刘爱新 魏芳芳 林琎
【目的】阐明核黄素对烟草悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性以及抗病相关的酚类物质、木质素等次生代谢产物含量的影响。【方法】1mmol·L-1的核黄素处理烟草悬浮细胞,用生物化学、细胞化学和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定苯丙烷代谢有关的生理和生化指标。【结果】核黄素处理后,PAL和POD活性明显升高,处理12h和24h后酶活性分别达到峰值;荧光观察细胞壁积累了更多的酚类物质,胞内和胞外scopoletin(7-羟基...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨起简 周禾 于同泉 张蕾
研究了不同激素组合处理对鲁梅克斯K 1杂交酸模子叶愈伤组织的诱导 ,试验结果表明 ,2 ,4 D配合使用 6 BAP时愈伤组织诱导率最高。在附加 1 0mg/L 2 ,4 D的液体MS培养基中通过悬浮培养分离出的单细胞 ,经数次继代后获得良好的悬浮培养体系
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