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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡璠 王莉 陈雯莉
为研究在不分化异形胞的钙化裂须蓝细菌Schizothrixcalcicola中schetR基因的功能,本研究构建由强启动子petE驱动的schetR基因的表达质粒,通过三亲本接合转移的方法将此表达质粒转入模式生物鱼腥蓝细菌AnabaenaPCC 7120的hetR突变体中进行功能验证。结果显示:超表达schetR能够互补鱼腥蓝细菌hetR突变体的表型,这说明schetR能够促进异形胞的发育。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李之萌 王莉 陈雯莉
在鱼腥蓝细菌PCC 7120中,all3555是一个乙酰羟酸合成酶的编码基因,为研究该基因在鱼腥蓝细菌PCC 7120的生长和环境适应过程中的作用,构建了该基因的超表达和缺失突变菌株,结果显示该基因缺失后鱼腥蓝细菌PCC 7120仍可继续生长,但对NaCl胁迫的敏感性有一定程度提高,而超表达该基因则会提高鱼腥蓝细菌PCC 7120对氧化胁迫和NaCl胁迫的抗性,表明all3555对鱼腥蓝细菌PCC 7120的正常生长影响较小,但对菌株的抗氧化胁迫和抗NaCl胁迫等有重要作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏 波 陈雯莉 王 莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC（all1692）基因与异形胞分化的关系，通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株，对其进行表型分析。结果表明，在缺乏化合态氮源时，MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中，异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏波 陈雯莉 王莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC(all1692)基因与异形胞分化的关系,通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株,对其进行表型分析。结果表明,在缺乏化合态氮源时,MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中,异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
牛天彩 胡胜 陈雯莉 王莉
利用单交换法将ｇｆｐ整合到鱼腥蓝细菌ｐＣＣ ７１２０基因组上，构建ｆｔｓＺ－ｇｆｐ的翻译融合菌株，并观察了ｆｔｓＺ蛋白的亚细胞定位。结果表明：通过同源重组，ｇｆｐ与基因组中唯一完整的ｆｔｓＺ融合，既保证了ｆｔｓＺ基因的正常表达又能准确反映ｆｔｓＺ蛋白的亚细胞定位，并且实验周期短、操作方便，是研究蛋白质亚细胞定位的一种简单有效的方法。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨兆辉 汪子洋 杨文涛 蔡瑜婷 谭伟龙 黄恩炯 张灵玲
乙酰化是蛋白质翻译后修饰的一种重要方式,可参与多种细胞进程,但迄今未见有关乙酰化修饰在Bt中发挥作用的报道.本课题组前期通过对高效杀虫Bt菌株LLP29的基因组进行测序分析,发现该菌株也存在编码乙酰转移酶的基因(如ykkB).为探讨乙酰化修饰在Bt菌株中的作用,以ykkB为靶标,利用无缝克隆技术成功克隆与测序了ykkB基因.通过生物信息学分析,发现该基因编码的蛋白可能是一类N-乙酰转移酶,赖氨酸和亮氨酸含量最高,半胱氨酸含量最低,是一种亲水性蛋白质,且无跨膜区;同时,成功表达、纯化了YkkB蛋白,通过体外自乙酰化分析,证实该蛋白可发挥乙酰基转移的作用.
[期刊] 淡水渔业
[作者]
姚佳俊 李忠 梁宏伟 罗相忠 王丹 邹桂伟
为了解c型溶菌酶基因与长丰鲫(Chang Feng Carassius auratus)的抗菌效应关系,本研究利用同源克隆方法获得长丰鲫c型溶菌酶基因cDNA全长序列。结果显示:c型溶菌酶基因全长698 bp,包括5'端非翻译区60 bp,3'端非翻译区200 bp,开放阅读框438 bp,编码145个氨基酸。长丰鲫c型溶菌酶基因在肾脏组织中表达量最大,在脾脏、肠道、心脏和脑中大量表达,在肝脏和鳃中表达量相对较低,在皮肤和肌肉中几乎不表达。长丰鲫在感染迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和金黄色葡萄球菌后,在肝脏
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
田琪琳 施定基 贾晓会 米华玲 黄希文 何培民
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC,EC 4.1.1.31)在植物碳代谢中处于代谢纽的关键位置,是调节细胞蛋白质和脂肪酸含量的关键酶,通过抑制pepc基因的表达,可以提高细胞的含油率。通过克隆莱茵衣藻"细菌型"pepc2基因的部分序列(简称Crpepc2)和莱茵衣藻融合启动子Hsp70A-RBCS2(简称HR),将HR和Crpepc2片段插入pSP124s中,获得Crpepc2反向表达的莱茵衣藻高效表达载体pSP124s-HR-reve-Crpepc2。利用基因枪将pSP24s和pSP124s-HR-reve-Crpepc2分别转入...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张文茂 彭楠 佘群新 葛向阳
利用araS启动子并在穿梭载体pZC1及pEXA的基础上构建硫化叶菌超表达载体pZC2,成功超表达了带有C端6×His标签序列的DNA双链断裂修复蛋白Mre11,进一步采用共纯化法鉴定到Mre11蛋白的作用配体Rad50,确定上述蛋白在高浓度盐(500mmol/L NaCl)中仍能形成MR复合体,表明该复合物在逆性条件下可能仍保持DNA断链修复的功能。进一步共纯化分析表明,基因组DNA片段是MR复合体形成的必需条件,在缺乏基因组DNA片段的情况下古菌分子伴侣蛋白结合并可能保护Mre11,该表达系统能够有效地应用于鉴定蛋白质的体内作用网络。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
翟焕趁 连壁 王杏杏 王宝华 鲁国东 王宗华
对稻瘟病菌菌株FJ81278进行基因组和转录组分析,发现一个新的特异基因MoHsbA编码的蛋白具有疏水表面结合蛋白A(HsbA)结构域和一个信号肽.进一步的生物信息学分析发现,该基因组中另外7个基因编码的蛋白也具疏水表面结合蛋白结构域.稻瘟病菌中的HsbA蛋白聚集于系统发育树的同一个大的分支上,说明它们具有较近的亲缘关系.转录组和EST数据库中HsbA的表达情况不同,但在菌株GUY11侵染阶段基因芯片中均表现为上调.实时定量PCR分析表明,MoHs-bA在菌株FJ81278不同生长发育阶段均有表达,但在附着胞阶段表达量相对较高,推测该基因与附着胞的形成相关.研究结果为进一步揭示稻瘟病菌HsbA...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马小娟 韦小敏 来航线 房艳华 胡轶伦
【目的】以增强型绿色荧光蛋白为报告基因，构建斜卧青霉转录调控蛋白Ｈａｃ１激活形式基因（Ｈａｃ１ｉ）随机插入过表达菌株和非激活形式基因（Ｈａｃ１ｕ）原位插入过表达菌株，并初步观察Ｈａｃ１基因的２种不同编码蛋白在菌丝内部的运动情况，为进一步研究转录调控蛋白Ｈａｃ１的功能奠定基础。【方法】分别克隆ｐｔｒａ筛选标记、ｇｐｄａ启动子、Ｈａｃ１ｉ编码区、ｅｇＦｐ编码区及终止子，利用融合ｐｃｒ融合克隆片段，构建Ｈａｃ１ｉ随机插入表达盒；再分别克隆Ｈａｃ１上游臂及编码区、ｅｇＦｐ编码区及终止子、ｐｔｒａ筛选标记、Ｈａｃ１下游臂序列，融合克隆片段，构建Ｈａｃ１ｕ原位插入表达盒。将２种表达盒分别转化斜卧青霉原生质．．．
关键词：
斜卧青霉 荧光蛋白 转录调控蛋白Hac1
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王婧蓝 胡胜 王莉 陈雯莉
为研究核糖体小亚基ｒｒＮＡ双甲基化酶基因ｋｓｇＡ的进化关系、蛋白结构和功能，利用ＭＥｇＡ ５．２软件构建了３７种蓝细菌ｋｓｇＡ基因和１６ｓｒＤＮＡ的系统进化树，通过ｓＷＩｓｓ－ＭＯＤＥＬ分析和预测ｋｓｇＡ的蛋白质结构模型，并通过克隆集胞蓝细菌ｓｙＮＥｃｈＯｃｙｓｔＩｓ ｓｐ．ｓｔｒＡＩＮ ｐｃｃ ６８０３、鱼腥蓝细菌ＡＮＡｂＡＥＮＡ ｓｐ．ｓｔｒＡＩＮ ｐｃｃ７１２０和聚球蓝细菌ｓｙＮＥｃｈＯｃＯｃｃｕｓ ＥＬＯＮｇＡｔＥｓ ｓｐ．ｓｔｒＡＩＮ ｐｃｃ ７９４２的ｋｓｇＡ基因对大肠杆菌ｋｓｇＡ突变体进行了异源互补。结果表明：ｋｓｇＡ基因在蓝细菌中与１６ｓｒＤＮＡ进化分支高度相似，且体现出蓝细菌．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王培 张家君 吕蒙蒙 马志慧 陈宇 林思祖
以杉木52号家系不同表型杉木幼苗为试验对象,选择Y52(黄化苗)和G52(正常苗)幼苗不同部位的组织为材料,以杉木EF1α为内参基因,采用qRT-PCR技术对幼苗NIPAs基因进行相对表达量分析,选择新叶和老叶进行叶绿素含量的测定.结果表明,Y52新叶中叶绿素a、b和总叶绿素含量都显著降低;老叶中,叶绿素a含量有所升高,但叶绿素b和总叶绿素含量仍显著降低.G52幼苗除了NIPA3在新叶中表达,其他的NIPAs基因主要在成熟茎中高度表达;Y52幼苗NIPAs则在不同部位都有高度表达.与G52相比,Y52的NIPAs相对表达量均存在不同程度的变化差异.
[期刊] 林业科学
[作者]
峥嵘 王琚钢 邰丽华 白淑兰 牛艳芳
以油松的优良外生菌根真菌即浅黄根须腹菌为对象,用简并PCR法和RACE技术分离其γ-肌动蛋白基因(Rl-act)的全长cDNA序列。该全长序列为1 339 bp,包含一个1 128 bp的开放阅读框(ORF),编码375个氨基酸,5'端非翻译区(5'UTR)95 bp,3'UTR长度116 bp。Port Param软件在线分析结果表明,该cDNA所编码的蛋白质理论等电点为5.01,相对分子质量为94.929 kD,具有真菌γ-actin基因3个保守特征序列。Blast同源性检索结果表明,Rl-act序列与12种担子菌actin序列同源性均在97%以上,与同为外生菌根真菌的双色蜡蘑actin的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱慧 王云霞 胡白石 刘凤权
利用PCR方法从产酶溶杆菌OH11菌株中克隆到编码几丁质酶的chiA基因。同源性比较发现,其推测产物与产酶溶杆菌C3菌株和N4-7菌株的ChiA有97%以上的序列一致性。基因经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到含T7启动子的高表达载体pET21a(+)上构建重组质粒pChiA,并转化宿主菌BL21(AI)产生BLChiA表达菌株。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后发现,BLChiA菌株产生相对分子质量约为75×103的蛋白质。生物活性试验表明,该蛋白能水解几丁质,在几丁质培养基上产生一透明的水解圈,并对立枯丝核菌菌丝的生长有抑制作用。因此该蛋白具有一定的生物防治作用。
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