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[期刊] 水产学报
[作者]
闫学春 孙效文 梁利群 曹顶臣
金属硫蛋白(metallothiontine,简称MT),又称重金属结合蛋白,是一种低分子量富含半胱氨酸的金属结合蛋白。锌、铜、镉等多种金属元素均可在体外或体内诱导组织MT大量合成。已有研究表明,MT在微量元素代谢、重金属富集、环境污染的清除等方面起重要作用,因此, 选择恰当的启动子是保证外源基因在转基因鱼中成功表达的最重要因素。在转基因鱼的研究过程中,使用的转基因材料从最初阶段的人及其它哺乳类如牛、羊等的生长激素基因发展到现在的鱼的生长激素基因,启动调控顺序也由小鼠的重金属螯合蛋白(MT-1)基因发展到鱼的重金属结合蛋白基因,如虹鳟金属硫蛋白基因、鲤β-肌动蛋白基因、美洲鲽抗冻蛋白基因...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
谢丽萍 李焘 蒋翠文 王彦力 牙禹 韦宇宁 何洁 闫飞燕
【目的】探索土壤环境中不同污染浓度的重金属镉(Cd)、汞(Hg)、铜(Cu)和铅(Pb)对荸荠生长的影响及空间分布规律,为荸荠的安全种植及合理布局提供理论支持。【方法】以广西主要荸荠品种桂蹄2号为研究对象,分别进行不同污染浓度的镉、汞、铜和铅的盆栽试验,设0、0.25、1、1.75、2.5 T(T为每个重金属土壤环境限量值)5个添加量浓度,土壤中重金属浓度为添加量浓度+试验土壤本底浓度。在荸荠成熟后,分析荸荠果肉、皮和茎叶中各元素分布及富集积累规律。【结果】荸荠在不同浓度的各重金属处理下均能正常生长,吸收重金属元素特征分别为:铜、铅和镉在不同部位含量分布为:茎叶>皮>果肉;汞分布为:皮>果>茎叶。荸荠中不同部位重金属的含量随着土壤中重金属含量的增加而增加。在0.25 T汞处理下和2.5 T铅处理下,荸荠果肉中汞和铅的含量分别超过《食品安全国家标准食品中污染物限量》(GB2762-2017)中新鲜蔬菜水果的限量值。【结论】低浓度重金属的处理会促进荸荠产量的提高,荸荠各部位对重金属吸收累积具有显著的分布规律:镉、铅和铜元素地上茎叶植株吸收多,块茎吸收少,汞则相反;荸荠对铅和镉耐受性强,在土壤达到环境限量值时,荸荠果肉中铅和镉含量符合标准要求;汞容易被荸荠吸收,在有汞污染风险的区域建议不要种植。
关键词：
荸荠 重金属 富集 质量安全
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
秦平伟 段明革 孙文婷 李名扬 徐晶
金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类富含Cys,能够结合重金属的低分子量蛋白质,广泛分布于生物界。在构建好的蜡梅花cDNA文库并进行EST分析的基础上,通过随机克隆测序得到了1个蜡梅金属硫蛋白的cDNA,命名为CpMetallothionein(CpMT)。CpMTcDNA全长为1083bp,基因内部含有一长度为240bp的开放阅读框,可编码79个氨基酸残基。将CpMT插入原核表达载体pET-32a,并转化Origami2感受态细胞。诱导表达产物经SDS-PAGE结果显示,目的蛋白约为30kD。表达的融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白2种形式存在,用His-Bind蛋白纯化回收试...
关键词：
金属硫蛋白 克隆 序列分析 原核表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
张玉刚 韩振海
以苹果属植物小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,将差异筛选消减cDNA文库得到的27个金属硫蛋白cDNA片段序列构建成本地数据库,通过电子拼接和RT-PCR相结合的方法,分离到了小金海棠金属硫蛋白基因MxMT2(Genbank登录号为GQ906589),该基因全长610个碱基,开放阅读框(ORF)为240bp,编码80个氨基酸,推测分子量7.74kDa。该基因具有金属硫蛋白基因的典型结构域特征,编码的氨基酸含有14个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈Cys-Cys、Cys-X-Cys、Cys-X-X-Cys形式排列。通过系统进化树分析...
关键词：
苹果属小金海棠 金属硫蛋白 MxMT2
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王顺才 梁东 马锋旺
【目的】克隆平邑甜茶金属硫蛋白(metallothionein,MT)基因,探讨该基因对逆境的响应机理,为苹果抗逆分子育种提供依据。【方法】采用电子克隆和RT-PCR技术从平邑甜茶叶片中克隆MhMT2基因,利用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推测氨基酸序列进行分析,通过定量PCR技术研究在胁迫条件和激素处理下该基因在叶片中的表达模式。【结果】平邑甜茶MhMT2基因cDNA全长534 bp,具有1个243 bp的完整开放阅读框,编码含80个氨基酸的多肽,其分子量为7.87 kD。同源性比对显示,MhMT2编码的氨基酸序列与其它植物的MT2蛋白有很高的相似性,其中与小金海棠的同源性最高,达到9...
关键词：
平邑甜茶 金属硫蛋白基因 克隆 表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王宝维 陈苗璐 王秉翰 张名爱 葛文华 程凡升 岳斌
【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)mRNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王明发 田亚东 钟翔 康相涛 冯培刚 王恬
为了研究肉鸡肝脏中金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量和MT mRNA表达水平作为评定锌源生物利用率的有效性,在固始鸡和AA肉鸡饲料中添加不同水平的饲料级硫酸锌(ZnSO4·H2O)、氧化锌(ZnO)和氨基酸络合锌(ZnAA),分别测定了2、3、4、5和6周龄末肝脏中MT含量和MT mRNA的表达水平。结果表明:品种间肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平差异极显著,固始鸡高于AA肉鸡。锌源和锌添加水平对所测定指标产生显著影响,氨基酸络合锌显著高于硫酸锌,这两种锌源极显著高于氧化锌;随着锌添加水平增加,肉鸡肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平提高,锌水平之间差异极显著。4周...
[期刊] 水产学报
[作者]
吴婷婷 魏华 郭敏 曹娜 李国鹏
研究了镉诱发鲫肝细胞相关的胞内游离钙离子变化,以及Ca2+-ATP酶及金属硫蛋白表达量的变化。试验分为对照组、5、10、15、20μmol/L CdCl25个组。Ca2+用Fura-2/AM方法检测,试验后24 h用荧光倒置显微镜观察细胞内游离钙离子变化;分光光度法检测Ca2+-ATP酶;石墨炉—原子分光光度法检测了细胞内镉离子浓度;免疫酶联法(ELISA)检测了金属硫蛋白(MT)含量。结果显示,镉可导致细胞存活率下降,具有一定的毒性。镉离子引起胞内Ca2+荧光强度和Ca2+-ATP酶活性增加(P<0.01)。随镉浓度升高,处理组Ca2+-ATP酶浓度活性分别是对照组的4.52、6.73、6....
[期刊] 海洋渔业
[作者]
张慧婷 庄平 章龙珍 侯俊利 张涛 闫文罡 冯广朋
为评价重金属污染对长江口中华鲟幼鱼生长的影响,在长江口水域采集了日本沼虾(Macrobraohium nipponense)、中国毛虾(Acetes chinensis)、狼牙鳗虾虎鱼(Taenioides rubicundus)、矛尾虾虎鱼(Chaeturichthys stigmatias)、窄体舌鳎(Cynoglossus gracilis)等5种中华鲟幼鱼重要饵料生物,研究了Cu、Cd、Hg3种重金属元素在这些饵料生物体内的积累特征,评价了饵料生物受重金属污染的程度。结果显示,虾类Cu的单项污染指数(Pi)均大于0.5,鱼类Cu的Pi均小于0.5;5种饵料生物Cd和Hg的Pi均大于1。...
[期刊] 水产学报
[作者]
彭爱红 高爽 陈俊 庄梅珍 王凡 陈晓梅 林郑忠 黄志勇
研究锌离子胁迫对海洋小球藻生长和金属硫蛋白诱导的影响,当小球藻达到对数生长期,用不同离子浓度(5、10、20、50和100μmol/L)的锌盐(氯化锌、柠檬酸锌、乙酸锌和葡萄糖酸锌)分别进行胁迫培养,通过测定小球藻的生物量和锌结合金属硫蛋白含量,考察锌胁迫对海洋小球藻的生物量、热稳定蛋白含量以及锌结合金属硫蛋白含量的影响。结果显示,当浓度分别小于5和10μmol/L时,柠檬酸锌和氯化锌对小球藻生长无显著抑制作用;而浓度为5μmol/L时,乙酸锌和葡萄糖酸锌对小球藻生长即产生显著抑制,且抑制作用皆随锌离子浓
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
魏华 佟金凤 赵莹莹 李晓东
为系统研究重金属离子(镉和锌)诱导的金属硫蛋白在中华小长臂虾(Palaemonetes sinensis)不同组织(肝胰脏、肌肉)中的表达,采用水相暴露法对中华小长臂虾进行镉(0,0.05,0.08,0.10和0.15mg·L~(-1))与锌(0,5,8,15和18mg·L~(-1))的急性染毒试验。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法分析不同浓度的镉、锌离子在不同染毒时间下(0,24,48和96h),诱导金属硫蛋白(metallothionein,MT)在中华小长臂虾不同组织中的表达差异。结果表明:镉和锌诱导中华小长臂虾MT的表达存在组织差异性和时间效应关系。在肌肉中镉离子和锌离子不能诱导MT的表达。在肝胰脏中,0.05mg·L~(-1)的镉离子可诱导MT的表达,而5mg·L~(-1)的锌离子才能达到相同的效果。两种离子相比较,镉对中华小长臂虾的MT诱导能力更强。时间效应表现为染毒48h肝胰脏中MT表达量最高,诱导表达量随暴露时间的增加而加大,但达到一定程度后即呈下降至稳定趋势。两种重金属对中华小长臂虾肝胰脏MT的诱导能力:Cd~(2+)>Zn~(2+);MT在中华小长臂虾不同组织中的分布顺序为:肝胰脏>肌肉。染毒后中华小长臂虾肝胰脏中MT的表达有一定的时间效应关系,48h的表达量最高。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周兴虎 祝常青 吴洪洪 沈文飚 周光宏 黄明
采用PCR和Western-blot方法,研究了储藏过程中不同温度(4、25和37℃)和不同时间(10、30、50、70和90 d)对转基因大豆外源cp4-epsps基因和EPSPS蛋白的影响。结果表明:在储藏过程中外源cp4-epsps基因没有发生明显变化;外源EP-SPS蛋白发生轻微降解,降解产物相对分子质量约为46.2×103,而且37℃降解条带较25℃明显,说明相对较高的温度(25和37℃)在储藏90 d期间能够促进外源EPSPS蛋白的降解,而对基因完整性影响较小。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张林宝 孙伟 蔡文贵 贾晓平
研究了菲律宾蛤仔(Venerupis philippinarum)两种谷氧还蛋白Vp Grx1和Vp Grx2 m RNA在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)和重金属镉(Cd)作用下的表达调控规律。结果表明,正常菲律宾蛤仔Vp Grx1和Vp Grx2在所检测组织中均有表达,其中Vp Grx1在鳃中的表达量最高,而Vp Grx2在蛤仔血淋巴细胞、鳃和肝胰腺中的表达量均较高。鳗弧菌和藤黄微球菌侵染在某些时段可显著诱导Vp Grx1和Vp Grx2基因的表达水平(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵彩春 李一星 陈大松 李友国
采用实时荧光定量PCR技术,研究了紫云英共生表达的非特异性转脂蛋白编码基因AsE246和AsIB259在根瘤发育和固氮过程中的组织和时空表达特征,并初步考察了其在重金属镉胁迫条件下表达水平的变化。结果表明:2个目标基因仅在紫云英根瘤中特异表达,并且均在接种华癸中慢生根瘤菌7653R后22 d左右表达量达到最高。在低浓度重金属镉胁迫条件下,AsE246和AsIB259在处理早期的表达量明显升高。在低或高镉胁迫条件下,在处理中期其表达量均显著低于正常根瘤,在处理后期则维持在较低水平,表明它们参与紫云英应对镉胁迫的应答机制。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
解家松 许婷 刘玮 何中央 吴信忠
采用RT-PCR方法扩增、克隆和鉴定了泥蚶(Tegillarca granosa)的金属硫蛋白(Metallothionein,MT)基因(TgMT)的开放阅读框(ORF)。基于金属硫蛋白氨基酸序列构建的系统进化树表明,泥蚶和魁蚶(Scapharca broughtonii)的亲缘关系最近。利用ORF序列,构建原核重组表达质粒。重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,表达重组蛋白,重组蛋白的分子量约为28.3 kD。可溶性分析表明重组蛋白主要以可溶性形式存在。用His-tag柱亲和纯化重组蛋白,并利用重组蛋白制备...
关键词：
泥蚶 金属硫蛋白 原核表达 组织细胞分布
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