【目的】制备金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)基因工程亚单位疫苗,并以小白鼠为试验模型,检测其免疫保护效果。【方法】诱导表达FnbpA,经组氨酸标签亲合纯化后用Bradford法测定纯化的目的蛋白的含量,并检测其黏附活性及对动物的安全性。制备FnbpA亚单位疫苗,经无菌检验及安全检验后,进行免疫保护试验,用ELISA方法检测被免疫小鼠血清中的抗体效价,通过腹腔攻毒试验检测疫苗的免疫保护力。【结果】纯化的目的蛋白在80 ku处出现单一条带,蛋白质量浓度为0.245 mg/mL。细菌黏附抑制试验发现,经FnbpA蛋白预处理过的MDBK细胞黏附的金黄色葡萄球菌数较对照极显著减少;动物安全...

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原体,因其具有细胞内定殖和对抗生素极易产生耐药性的特点,使得用抗生素治疗的效果越来越差,为此疫苗防治成为首选。黏附素在金黄色葡萄球菌致病过程中起着至关重要的作用,在金黄色葡萄球菌感染的早期,黏附素是最重要的致病因子,只有当金黄色葡萄球菌黏附到宿主细胞上,毒素和荚膜才能开始表达。因此阻断金黄色葡萄球菌感染的初始阶段,特别是阻止细菌黏附到细胞和定殖在黏膜表面,将是预防和治疗奶牛乳腺炎的最有效途径。因此近些年研究者致力于黏附素的结构及功能的研究,试图以黏附素为靶点设计金黄色葡萄球菌疫苗。本研究对近几年黏附素的种类和作用,以及其相关疫苗的研究进行了综述。

【目的】研究大豆异黄酮(Soybean isoflavone,SI)的抑菌机制。【方法】本试验利用呼吸代谢抑制实验和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光染色对大豆异黄酮的抑菌机制进行研究。【结果】呼吸代谢抑制实验结果表明,当SI的终浓度为0.8mg·ml-1时,可显著抑制金黄色葡萄球菌苹果酸脱氢酶的活性,SI组苹果酸脱氢酶的比活性与对照组相比降低了74.97%。DAPI染色结果显示,DAPI可以和金黄色葡萄球菌内的核酸结合,经过SI作用28h后,菌体内的核酸含量呈明显下降趋势,其中DNA的荧光强度减少了33.53%,RNA减...

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆...

【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β-溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比:其β-溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10-1.83.mL-1远低下于亲本株的10-4.33.m...

目的利用PCR技术,无需增菌,直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。方法通过溶剂提取的方法从人工样品中提取模板,以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)为靶基因,经过PCR扩增得到279bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌,同时,与国标GB4789.10—94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片PetrifilmRSA.CountPlate及Baird-parker+RPFAgar进行了比较。结果PCR方法的灵敏度高,全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10CFU/ml,奶酪检测的检出限为55CFU/g,可在6h内完成对乳品中金黄色葡萄球...

[目的]研究苦参碱在金黄色葡萄球菌入侵奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)过程中的干预作用及其原因,为苦参碱的临床应用奠定基础。[方法]用CCK-8法检测苦参碱对BMECs增殖的影响,用庆大霉素保护试验检测苦参碱对金黄色葡萄球菌入侵BMECs的影响;并在苦参碱干预金黄色葡萄球菌感染BMECs后,分别采用RTqPCR检测BMECs中抗菌肽基因的表达,Greiss法检测NO的分泌,Western blot检测NF-κB通路蛋白p65的表达。[结果] 25～100μg/mL苦参碱均能促进BMECs的增殖,并能抑制金黄色葡萄球菌入侵BMECs;苦参碱干预能显著下调BMECs中抗菌肽基因TAP和BNBD5 mRNA的表达,抑制NO的分泌和NF-κB的活化,并呈剂量依赖性。[结论]苦参碱通过抑制NF-κB的活化来抑制金黄色葡萄球菌入侵BMECs,并可显著下调金黄色葡萄球菌感染的BMECs中抗菌肽基因的表达。

为了快速检测出实验动物临床样品中的金黄色葡萄球菌（SA），建立了一种普通PCR方法。同时合成3对引物，用金黄色葡萄球菌的阳性核酸DNA做模板，进行引物扩增，筛选出一对能扩增出270 bp单一目的片段的引物。逐一对该引物灵敏度、重复性和特异性进行了测试。实验结果显示，该方法具有高度的特异性，除了识别金黄色葡萄球菌基因组外，对小鼠其他常见病原菌均不发生交叉反应，具有优良的敏感性和稳定性。两个不同操作人员，在两个不同时间段，利用两台不同品牌的PCR仪器，用金黄色葡萄球菌阳性样品进行测试，结果显示此方法再现性良好。用该方法检测待测样本，效果也良好。

【目的】调查产生生物被膜的金黄色葡萄球菌流行病学特征，探究生物被膜形成能力与分子型之间的相关性，为治疗动物金黄色葡萄球菌感染提供理论依据。【方法】以广东省兽药研制与安全评价重点实验室保存的98株金黄色葡萄球菌为研究对象，用结晶紫半定量法测定所有菌株生物被膜形成能力，将产膜菌株进行22种常见抗菌药的最小抑菌浓度测定，通过金黄色葡萄球菌常见3种（spa、MLST和PFGE）分型方式进行分子分型，并分析产膜能力与分子型之间的相关性，最后通过全基因组测序技术分析生物被膜产生菌株中耐药基因和毒力基因携带状况。【结果】结晶紫半定量结果显示，98株金黄色葡萄球菌中能产生生物被膜的菌株共计23株，占23.47%。包括牛乳源22株（占比25.29%,22/87），其中14株（占比60.87%,14/22）来自浙江奶牛养殖场，8株（占比39.13%,8/22）来自福建奶牛养殖场，以及猪源1株（占比9.10%,1/11），来自广东屠宰场，说明牛乳源金黄色葡萄球菌产膜潜力高于猪源；将产膜能力划分为强、中、弱3个等级，23株产膜菌株中，其中强产膜菌株2株（占比8.70%,2/23），中产膜菌株9株（占比39.13%,9/23），以及弱产膜菌株12株（占比52.17%,12/23）。药敏试验显示，牛乳源产膜菌株对所有受试抗菌药物敏感，而猪源产膜菌株对青霉素、阿莫西林、头孢噻呋、头孢西丁、恩诺沙星、环丙沙星、克林霉素、多西环素、红霉素、氟苯尼考、复方新诺明、泰妙菌素、替米考星13种抗菌药均表现出耐药；spa分型结果显示，98株金黄色葡萄球菌共获得8种spa型，产膜的23株金黄色葡萄球菌占其中3种：1株t2922型来自广东猪源，14株t2119来自浙江牛乳源，8株t189来自福建牛乳源；MLST分型结果显示，98株菌共分为9种ST型，其中6种ST型不具有产生生物被膜的能力，分别为ST398、ST522、ST705、ST1651、ST479和ST151，仅3种ST型的菌株具有生物被膜产生能力，分别为ST9、ST7和ST188。结果表明，强产膜菌株分子型主要为ST7-t2119，中产膜菌株主要为ST7-t2119和ST188-t189，弱产膜菌株为ST9-t2922、ST7-t2119和ST188-t189；同时结合PCA分析不同ST型组间差异性发现，弱产膜菌株的ST型能与中强产膜菌株很好的区分开来，只有特定ST型的金黄色葡萄球菌才具有产生生物被膜的能力。23株产膜菌株PFGE分型全部成功，结果显示，广东、福建、浙江三省产膜菌株共分为3种PFGE型，且PFGE型存在地域分布特征，同一地区的分离株可能存在克隆传播，但克隆株之间生物被膜产生能力有明显差异；全基因组测序结果显示，产膜菌株中耐药基因和毒力基因根据分子型不同携带情况呈现多样性。【结论】不同来源的金黄色葡萄球菌有不同程度产生生物被膜的潜力，且均携带多种不同的产膜基因，牛乳源金黄色葡萄球菌产膜潜力远远高于猪源；菌株能否产膜与ST型存在强相关性，特定的ST型如ST9、ST7和ST188更容易产生生物被膜。

分别用透析法和DEAE离子交换层析法分离蜂王浆抗金黄色葡萄球菌肽.用透析法分离获得了分子质量≤3.5 ku、介于3.5 ku与12 ku之间以及≥12 ku的3种组分,测定结果显示分子质量≤3.5 ku和介于3.5 ku与12 ku之间的蜂王浆组分具有抗金黄色葡萄球菌的活性.用DEAE离子交换层析法分离了分子质量≤3.5 ku和介于3.5与12 ku之间的2种蜂王浆透析组分,其中分子质量≤3.5 ku的6个离子交换分离组分中,组分1和组分6具有抗金黄色葡萄球菌活性;分子质量介于3.5 ku与12 ku之间的6个离子交换分离组分中,组分1具有较强的抗金黄色葡萄球菌活性.

为了解拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌的杀菌作用及机理,将拮抗菌X23发酵液与金黄色葡萄球菌作用后,运用琼脂平板倾注法检测菌体克隆数,扫描电镜观察菌体形态,透射电镜观察菌体超微结构。结果表明:拮抗菌X23发酵液与金黄色葡萄球菌作用60、90、120 min后,金黄色葡萄球菌克隆数极显著低于生理盐水对照组(P

采用微量肉汤稀释法、荧光共振能量转移试验和分子对接技术,分别探究毛兰素对金黄色葡萄球菌的体外抑制作用、对分选酶A(Srt A)的抑制作用及其作用的分子机制;通过构建小鼠腹膜炎模型,评价毛兰素对金葡菌腹膜炎的缓解作用。结果表明:毛兰素对金葡菌的体外最小抑菌质量浓度为512μg/m L,最小杀菌质量浓度大于1024μg/m L;毛兰素对SrtA活性有明显抑制作用,IC50为(20.91±2.31)μg/m L;毛兰素以紧凑的构象结合至SrtA的活性中心,与SrtA形成稳定的复合物来影响SrtA的生物活性;毛兰素对金葡菌引起的腹膜炎有良好的缓解作用,可减轻金葡菌所导致的小鼠脓肿症状。

【目的】研究枯草芽孢杆菌素(Bacillus subtilis bacteriocin)Subticin112在体内外对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CVCC 1885的抑菌活性(bacteriostatic activity),为Subticin112的临床应用提供理论依据。【方法】体外抑菌:取相同有效质量的Subticin112、土霉素、青霉素、万古霉素、新霉素、链霉素和庆大霉素等分别溶于等体积的无菌生理盐水中,然后采用琼脂扩散法比较相同浓度的上述药物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。体内抑菌:将体重为18-22 g的SPF级KM雄鼠120只分成6组,分别为空白对照...

参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152)设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因。将基因克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,相对分子质量约5 000的重组抗菌肽Des-HF获得表达。抗菌试验结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性。以小鼠为试验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,试验结果表明,240μg重组Des-HF可分别保护小鼠免受10倍最小致死浓度的金黄色葡萄球菌(ATCC26003)和Cowan...

为寻找一种对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)具有抑制作用的抗生素替代物,从568株芽孢杆菌中筛选出抑MRSA的芽孢杆菌5株,其中芽孢杆菌64-3的抑菌活性最强。生理生化特性鉴定和16s rDNA基因序列比对分析结果表明,菌株64-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌种(Bacillus subtilis)。该菌株菌体破碎物、菌悬液、发酵上清液和活菌对MRSA的抑菌效果表明,B.subtilis64 3的发酵上清液对MRSA的抑制效果最好。B.subtilis64 3产生的胞外抑菌物质对MRSA具有良好的抑制效果。