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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李祥瑞 谢晋 孙梅 刘杰 潘红杰 沈永林 汪志楷
实验使用伊氏锥虫可溶性抗原免疫小鼠,研究了重组牛白细胞介素-2(rBIL-2)对小鼠 NK 细胞杀伤活性及特异性抗体水平的影响.试验鼠随机分为4个组:Ag 组、Ag+rBIL-2组、rBIL-2组和 PBS 对照组.以LDH 释放法和间接 ELISA 法分别检测各组小鼠 NK 细胞杀伤活性和抗体水平.结果表明,首次免疫后24d·Ag 组 NK 细胞杀伤活性为31.6%,rBIL-2组为99.66%,Ag+rBIL-2组为98.98%,对照组为19.73%,抗体效价 Ag 组为2~4,Ag+rBIL-2组为2~6.说明 rEIL-2可显著提高 NK 细胞杀伤活性及促进抗体生成,提高宿主免...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘金明 王美 叶萍 傅志强 蔡学忠 石耀军 陈永军 林矫矫 林邦发 施幅恢
免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
蔡建平 汪志楷 沈永林 李祥瑞 潘红杰
以超声波粉碎法裂解纯化的不同地理株伊氏锥虫(T.evansi)单虫克隆群体,提取可溶性蛋白组分,进行 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析,结果表明经 SDS-PAGE 分析,不同株 T.evansi 的可溶性蛋白组分中都包括20～30种蛋白成分,相对分子量(Mr)范围大约为7.9～109.5D,主要蛋白成分的 Mr 约为49～66kD 之间,Wertern botting 分析揭示不同株 T.evansi 间有10～20条为特异抗体所识别的抗原组
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵俊龙 刘恩勇 石俊华 丁书田 刘钟灵 姚宝安 赵胜明 刘朝华 罗永香
体外培养获得的东方巴贝斯虫可溶性抗原与等量弗氏完全佐剂混合后用作疫苗进行疫区免疫保护试验。试验动物共分 2组 ,免疫组 82头牛在发病季节前 1个月用疫苗间隔 2周免疫 2次 ,对照组不作处理。所有试验动物在试验前和发病季节后分别采血检测血清抗体水平 ,同时 ,在发病季节观察试验动物的发病情况。结果表明 :在发病季节内 ,免疫组牛无一发病 ,血清抗体水平与试验前相比升高明显 ,而对照组 86头牛有 5头出现临床症状 ,虽经治疗仍有 2头死亡 ,血清抗体水平与试验前相比变化不明显。结果说明由可溶性抗原制备的疫苗具有良好的免疫保护作用
关键词：
东方巴贝斯虫 可溶性抗原 免疫预防 水牛
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王琛 刘雪兰 陈芳芳 余为一
【目的】研究恒定链(Invariant chain,Ii)功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体(Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2),将其定向克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并用IPTG诱导表达,嵌合体融合蛋白纯化后免疫小鼠,用ELISA法测定血清抗体效价。同时,分别构建含鸡Ii和小鼠MHCⅡ类分子基因的真核表达载体,并将其共转染COS7细胞,通过激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的共定位。...
关键词：
恒定链 肽载体 嵌合体 异种免疫
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王潇 王志钢 杜瑞平
【目的】研究白细胞介素-10作为黏膜分子佐剂是否可以增强口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)的黏膜免疫应答。【方法】利用RT-PCR技术以Balb/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,扩增出小鼠的IL-10基因,并构建真核表达质粒proVAX-IL-10,通过鼻腔接种方式,将口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)和真核表达质粒(proVAX-IL-10)共同免疫小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠黏膜部位(肺脏、生殖道)sIgA滴度,免疫组织化学法检测气管、生殖道和小肠中sIgA的表达情况,CSFE染色法检测小鼠扁桃体淋巴细胞增殖反应水平,用胞内细胞因子染色法通过流式细胞仪检测扁桃体部位CD4+阳性T细胞内I...
[期刊] 华北农学报
[作者]
肖治军 张改平 杨汉春 杨艳艳 赵东 李学伍 邓瑞广 柴书军 邢广旭 杨继飞
为检测Ⅰ型IBDVVP2蛋白线性B细胞抗原表位肽PJ14和PJ5的免疫原性,将人工合成并纯化的PJ14和PJ5分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联;将与BSA偶联的PJ14和PJ5分别免疫BALB/c小鼠,然后以与OVA偶联的PJ14和PJ5作为间接酶联免疫吸附试验抗原,分别测定免疫鼠血清中抗相应多肽的抗体。结果显示,免疫小鼠产生了抗PJ14和PJ5的抗体,抗体持续期达21周。表明PJ14和PJ5具有免疫原性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙岩 仲飞 李秀锦 王幸兴 王璐 贾启恒 韩冬梅 李振 张峰 潘红丽
【目的】白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒VP2 DNA疫苗,在小鼠体内分析了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作用。【方法】采用RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中扩增cIL-7基因,然后将cIL-7基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,分别构建成与Myc/His标签融合和非融合的cIL-7真核分泌型表达载体pcDNA-cIL7/MH和pcDNA-cIL7。由磷酸钙介导将pcDNA-cIL7/MH质粒转染HEK 293T细胞使其进行瞬时表达,以Western-blot...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王存波 常国斌 周琼 廖菁 龚琳琳 陈蓉 胡国顺 雷黎丽 张海波 王克华 包文斌 陈国宏
【目的】以白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)基因为候选基因,研究其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),及其与部分免疫性状的关系。【方法】根据红色原鸡IL-1β基因序列设计引物一对,利用PCR-SSCP方法检测了如皋鸡、文昌鸡以及安卡鸡IL-1β基因内含子1、2的SNP,同时检测了56日龄的血清IL-1浓度、异嗜性粒细胞/淋巴细胞(heterophil/lymphocyte,H/L)值、绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)抗体滴度、新城疫(newcastle disease,ND)抗体滴度、...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杜露平 侯立婷 于晓明 程海卫 郑其升 陈瑾
[目的]本试验旨在探究免疫增强剂CVC1302促进淋巴滤泡生发中心(GC)应答的作用机制。[方法]将模式抗原4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)与CVC1302配伍后，与ISA206佐剂乳化制备疫苗NP-CVC1302,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠。免疫后不同时间点，利用NP-BSA作为捕获抗原检测小鼠血清NP~+抗体水平及亚型抗体水平。免疫后14 d,流式细胞术检测腹股沟淋巴结的滤泡辅助性T细胞(T_(FH)细胞)、NP~+ GC B细胞、NP~+浆母细胞比例；激光共聚焦显微镜检测GC数目；免疫后42 d,流式细胞术检测骨髓处NP~+长寿浆细胞(LLPC)比例。[结果]NP-CVC1302组小鼠NP特异性抗体水平极显著高于NP组(P<0.01),且NP特异性IgG_1、IgG_(2a)抗体水平也显著高于NP组(P<0.05或P<0.01或P<0.001),且GC数目也极显著高于NP组(P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
周金林 沈杰 周勇志 石滨海 王云飞
为了解伊氏锥虫在动物体内抗原变异情况,用伊氏锥虫安徽株克隆虫体 ShTat1分别感染兔和豚鼠。在兔体30d 中,每3d 分离兔血中锥虫并克隆,获得10个克隆锥虫,经间接免疫荧光试验和生物素抗生物素酶标试验鉴定,为9个抗原性互不相同的抗原变异体 ShTat1.1～1.9.同中方法在4只兔体内30d 获得同样9个变异体,并且出现顺序一致,该克隆在豚鼠体内15d 所获得的5个变体,经鉴定均在兔体现出过,
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谢超 孙恩贵 刘俊华 王祥生 杨发青
以不同剂量的伊氏锥虫排泄分泌抗原（ＥＳＡ）对小鼠进行常规免疫，用同株伊氏锥虫攻击，观察并记录小鼠死亡时间、死亡只数，比较免疫后血清抗体水平。结果表明：除对照组和５μｇ组未产生特异性抗体外，其余各组均产生较高滴度的抗体，其中２００μｇ组为１∶６４００，１００μｇ组为１∶３２００。ＥＳＡ５０，１００和２００μｇ免疫组可对小鼠产生有效的保护，小鼠存活时间较对照组延长２～３倍，以１００μｇ组产生的保护作用最好
关键词：
伊氏锥虫 排泄分泌抗原 小鼠 免疫原性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谈永松 韦习会 徐银学 王林云 黄瑞华
采集二花脸猪、大约克夏猪和大二杂种猪的外周血，分离淋巴细胞，取其中一部分经丝裂霉素Ｃ处理后作为刺激细胞，另一部分为反应细胞，以３Ｈ标记的胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）作标记，进行单相混合淋巴细胞培养（ｍｉｘｅｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｃｕｌｔｕｒｅ，ＭＬＣ）。结果表明：对于猪白细胞Ⅱ类抗原（ｓｗｉｎｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎⅡ，ＳＬＡⅡ）经自身、有血缘关系和无血缘关系个体的淋巴细胞间相互刺激后，所得放射性脉冲频率（脉冲数／分钟，ＣＰＭ）及刺激指数（ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ＳＩ）存在显著性差异。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
蔡建平 汪志楷 沈永林 李祥瑞 潘红杰
以经生物素标记、Triton X-114相分离、ConA-sepharose 和 Streptavidin-agarose 亲和沉淀抽提、SDS-PAGE 分离并经 wester blotting 鉴定的伊氏锥虫(T.evansi)一种60kD 非变异性表面蛋白质免疫 ICR 小鼠,制备高免血清,用间接免疫荧光技术对该60kD 蛋白的细胞表面分布进行了初步定位研究。结果表明,在同源和异源株虫体表面都有强烈的特异性荧光染色。以该蛋白经直接脾内免疫 ICR 小鼠(总剂量约10μg·鼠~(-1)),可获得对10~2条同源和异源株虫体攻击的部分保护作用,表现为虫血症出现的时间("潜隐期")
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈吉刚 陈维虎 周继勇 王金勇 齐静 郑肖娟 俞照正 孙红霞
将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-...
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