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[期刊] 华北农学报
[作者]
范晓军 曹建斌 许成钢 付月君 张志云 梁爱华
苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒作为新型生物杀虫剂已应用于农作物病虫害防治。对构建的重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)进行了杀虫活性和生物安全性初步研究。结果显示,重组病毒和野生型病毒的LC50分别为7.5×102,3.3×104PIBs/mL,重组病毒比野生型病毒具有更好的杀虫活性;检测了该重组病毒和野生型病毒对小鼠的易感性,所试小鼠未见明显急性毒性反应,高剂量重组病毒灌胃小鼠的脾脏增大,小鼠胸腺、脾、肾组织切片未有异常,重组病毒对小鼠具有较高的生物安全性。
关键词：
重组杆状病毒 杀虫活性 生物安全性
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
袁哲明 游兰韶
从亲本病毒及其启动子的选择 ,外源毒素基因、昆虫专性激素和酶基因、增效基因、标记基因、宿主反义RNA基因的引入 ,病毒自身基因的修饰以及重组病毒的安全性等方面综述了该领域的最新研究进展 .
关键词：
昆虫杆状病毒 重组病毒 基因工程
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李兰 郑其升 张元鹏 李鹏成 肖希龙 付言峰 侯继波
为研究重组猪肺表面活性蛋白A(RpSP-A)的抗病毒活性,采用Bac-to-Bac系统对RpSP-A蛋白进行表达。首先PCR扩增目的基因并将其克隆至pFastBac1转移载体获得pFast-SP-A,通过转化DH10Bac感受态细胞获得重组Bacmid,然后转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-SP-A,在sf9细胞上进行目的蛋白的表达,经镍柱纯化、脱盐柱处理后,采用蚀斑减少方法评价RpSP-A对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用。结果显示RpSP-A在sf9细胞中得到正确表达,并且能够降低PR
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
欧艳梅 许晓东
【目的】构建包含Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１反向重复序列的重组杆状病毒ｖａｃＭＮｐｖ－ｄＳｃａＳｐ，并在草地贪夜蛾（Ｓｆ９）细胞中表达Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１双链ＲＮａ，用以抑制Ｓｆ９细胞的凋亡，为未来优化杆状病毒表达系统提供试验依据。【方法】将Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１反向重复序列构建到ｐＢａｃ５上，与ａｃＭＮｐｖ ＢａｃＭｉｄ共转染Ｓｆ９细胞产生重组杆状病毒，用ＲＴ－ｐｃＲ和ｐｉ活细胞染色方法，分别检测Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１ＭＲＮａ含量及Ｓｆ９细胞的凋亡情况。【结果】ｐｃＲ和双酶切检测结果表明，成功构建了重组质粒ｐＢａｃ５－ｄＳｃａＳｐ，并得到重组杆状病毒ｖａｃＭＮｐｖ－ｄＳｃａＳｐ。ｐｉ染色．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李响 张小涵 李美琪 陈冉 冯颖 李林 桑晓宇 杨娜
为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性，通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中，将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞，通过蓝白斑筛选获得重组杆粒，转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示，Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变；间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达；纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力，同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体（>1∶25 600）。以上结果表明，通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王彩平 龚晓明 杜念兴
以促黄体素释放激素(LHRH)基因克隆质粒(pBS-LHRH)为乙肝表面抗原(HBsAg)基因的插入受体,使LHRH基因融合到HBsAg基因的3'末端(224位氨基酸处),实现HBsAg基因3'末端的Bgl Ⅱ与LHRH 基因5'末端BamH 切口按连续框架的融合。酶切分析得到大约740 bp的LHRH::HBsAg融合基因。序列分析表明融合基因阅读框架正确。将此融合基因经酶切位点改造,插入到家蚕核多角体病毒转移载体pBE 284的多克隆位点中。经酶切分析和southern blot鉴定,证实重组转移载体构建成功。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
范国成 高芳銮 黄美英 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉
为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpF-BDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物...
[期刊] 华北农学报
[作者]
田飞鹏 曹轶梅 卢曾军 孙普 高云英 刘在新
构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表...
关键词：
口蹄疫病毒 衣壳蛋白 重组杆状病毒 构建
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯平 李云章 孙丰廷 屈雷 闫海龙
【目的】克隆分析羊口疮病毒（ORFV）榆林株（ORFV-Yulin）的F1L基因序列，通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因，测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因（rB2L）和 F1L融合基因（cF1L），利用碱基linker连接，通过重叠PCR方法扩增获得ORFV rB2L-linker-cF1L重组基因(rB2Lc-F1L)，将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-r
[期刊] 水产学报
[作者]
陈细法 吴定虎 黄槐 池信才 陈平
应用超薄切片技术，研究班节对虾卵细胞和各变态期病毒及其包涵体的分布和超微结构。在糠虾前期各期未找到病毒，而糠虾后期各期的肝和中肠上皮细胞核中则有典型的病毒及其包涵体存在。这提示着ＭＢＶ可能不经由卵细胞传播给子代。病毒粒子单个散在于核质和包涵体基质中，一端钝圆，另一端稍尖，形似葵花子，而不是如文献所言的长圆柱体，长度２７０—３００ｎｍ，直径平均７５ｎｍ，由囊膜、衣壳和核心三部分组成，囊膜上无纤突。这与文献上报道的斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）相仿，因此，所观察到的病毒应是ＭＢＶ。这表明ＭＢＶ分布地域波及我国大陆南方沿海。此外，作者所见的核衣壳是偏心位置，而非居中排列，并指出这有利于核衣壳更快进入靶细...
关键词：
斑节对虾,杆状病毒,超微结构
[期刊] 水产学报
[作者]
常青山 包振民 潘洁 王伟继 郭福生 龚振华
:以海捕中国对虾为材料 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术和核酸探针技术 ,对从中国对虾杆状病毒核酸随机文库中筛选的 4个片段 (大小分别为 80 0 ,1 1 0 0 ,1 5 0 0 ,2 5 0 0bp)用地高辛标记作为探针 ,进行斑点杂交 ,检测对虾杆状病毒。结果表明海捕中国对虾的鳃、中肠、肝胰腺、卵巢等组织检测为阳性 ,肌肉组织为阴性。实验表明中国对虾杆状病毒存在垂直传播的可能性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
于峰 朱姗颖 李兵 沈卫德 王文兵
【目的】改进用于同源重组研究的制备杆状病毒DNA的方法。【方法】采用PCR方法从BmNPV中扩增出多角体基因,并在其两端引入Bsu36I酶切位点。将此片段克隆入转移载体pBacPAK8中,与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞,获得重组病毒。该病毒能形成多角体,便于纯化,同时可以被Bsu36I酶切。该重组病毒的多角体纯化后被裂解,并提取病毒DNA。病毒DNA经Bsu36I酶切后,与含gfp基因的转移质粒共转染家蚕BmN细胞,在荧光显微镜下观察重组病毒的转染效率。【结果】BmNPV多角体基因克隆入转移载体pBacPAK8中后,与线性化的AcPak6及BmPak6DNA共转染sf细胞及BmN细胞,...
[期刊] 水产学报
[作者]
汝少国 姜明 李永祺 贾翠红
中国对虾杆状病毒垂直传播途径的研究对切断病毒的传播途径，培育健康的对虾种质资源，具有重要的理论和实践意义。本文利用电镜技术，对中国对虾亲虾的卵巢、卵细胞和无节幼体、状幼体、糠虾、仔虾、幼成虾进行病毒检测，结果发现卵巢和卵细胞中有似病毒粒子，无节幼体、糠虾、仔虾、幼成虾有杆状病毒感染，并初步探讨了中国对虾杆状病毒垂直传播的可能性
关键词：
中国对虾,杆状病毒,垂直传播
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯平 李云章 孙丰廷 屈雷 闫海龙
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王彦彬 孙向丽 魏战勇 陈红英 杨明凡 崔保安
【目的】制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual,分别置于PH和P10启动子控制下,引入蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因以实现分泌型表达,并在C端分别融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染昆虫细胞,鉴定重组蛋白的活性。【结果】通过间接免疫荧...
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