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[期刊] 华北农学报
[作者]
隋娟娟 李晓昕 吴健 曹兴 吴泽 何俊娜 义鸣放
为了深入研究重瓣百合花形成的分子机制,以重瓣百合比罗尼卡为试验材料,从中分离得到1个AGL6基因,其开放阅读框为744 bp,共编码247个氨基酸,蛋白质分子量为28.3 ku。亲水性平均系数为-0.748,等电点为8.23。蛋白结构分析显示,百合AGL6蛋白具有典型的MADS-box结构域、K-box区及2个AGL6基序。系统进化树分析结果显示,百合AGL6编码的蛋白属于AP1/AGL9亚家族AGL6分枝的单子叶植物类群,与同为单子叶植物的风信子亲缘关系最近,相似度达到78%,说明克隆得到的基因即为AGL6的同源基因,将其命名为LiAGL6。亚细胞定位表明,LiAGL6在洋葱表皮细胞的细胞核中表达,具备转录因子的基本特征。实时荧光定量PCR结果分析表明,LiAGL6基因在花中表达量最高,在茎、叶中几乎不表达;在整朵花中,LiAGL6在第7轮花瓣中的相对表达量最高,其次依次是第6轮和第3轮,第2轮花瓣中几乎检测不到表达。研究表明,LiAGL6基因可能在百合重瓣花形成方面发挥了调控作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王爱菊 唐金富 赵祥云 朱立煌
【目的】分离百合的LFY类基因,检测百合中LFY类基因的拷贝数并分析其表达模式。【方法】利用RT-PCR结合RACE的策略克隆百合的LFY类基因,通过Southern杂交检测百合中LFY类基因的拷贝数,通过RT-PCR分析LiLFY1基因的表达模式。【结果】获得了包括全长开放阅读框(ORF)的LiLFY1基因的cDNA序列。与已克隆的LFY类蛋白的同源性分析表明,LiLFY1编码的蛋白与单子叶植物水稻和玉米的LFY类蛋白具有更高的同源性。Southern杂交结果表明,二倍体百合中有2个拷贝的LFY类基因。LiLFY1基因在百合的幼嫩花芽和顶端分生组织中表达,而在根、茎、成熟的叶片和成熟花的各轮...
[期刊] 林业科学
[作者]
陈莉 辛海波 李晓艳 李晓昕 义鸣放
抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)作为植物细胞内重要的自由基清除剂,是通过参与一系列的氧化还原反应而发挥抗氧化剂的功能。单脱氢抗坏血酸还原酶(monodehydroascorbate reductase,MDHAR)在抗
关键词：
铁炮百合 MDHAR 克隆 表达
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李路路 王欢 孙明 张启翔
以岷江百合花被片为材料,通过RT-PCR方法,克隆单萜合酶基因,命名为LreTPS.该基因包含1770 bp的开放阅读框,编码590个氨基酸,编码蛋白质分子质量为68.18 ku,等电点为5.77.LreTPS编码的蛋白含有单萜合酶蛋白特有的DDXXD、RRX8W保守基序,氨基酸序列N端含有一段转运肽,与其他植物的单萜合酶基因蛋白同源性为40%-50%.系统进化树分析表明,LreTPS基因属于TPS-b亚家族.荧光定量表达结果表明,LreTPS在岷江百合花被片中表达量最高,其次在叶片中,在雄蕊与柱头中微量表达.
关键词：
单萜合酶 基因克隆 基因表达 岷江百合
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
薛晓霞 邵杨 张克中 崔金腾
为研究NIP5-1基因(Nodulin26-like intrinsic protein)在百合生长发育方面的作用机理,利用RACE技术克隆得到百合NIP5-1基因的全长cDNA序列。运用多个软件进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及RT-PCR技术检测其表达特性。结果表明:1)百合NIP5-1基因全长为1 492bp,包含1个900bp的完整开放阅读框(Open reading frame,ORF),共编码299个氨基酸;2)百合NIP5-1蛋白属于跨膜通道蛋白MIP超家族。具有
[期刊] 林业科学研究
[作者]
孙迎坤 李纪元 殷恒福 范正琪 周兴文
为研究A功能基因在山茶花重瓣形成过程中所发挥的功能,利用同源克隆和RACE扩增方法,从重瓣山茶花品种‘金盘荔枝’发育早期的花芽中获得了山茶花AP基因全长cDNA,命名为CjAPL1,GenBank登录号JX657332。该基因全长1 149 bp,其中,开放阅读框(ORF)长度为741 bp,5’非编码区长度206 bp,3’非编码区长度202 bp。经氨基酸序列分析表明:CjAPL1基因编码一条含有246个氨基酸的蛋白质,与猕猴桃、八仙花等植物的Ap1蛋白同源性均在75%以上。Rea-time PCR结果显示,CjAPL1基因在‘金盘荔枝’不同发育时期花芽中的表达量为:花芽发育早III期>花...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘志雄 于先泥
用同源克隆的方法和3′RACE技术,从日本晚樱(Prunus lannesiana)中分离得到了1个AP3同源基因PrseAP3的cDNA全长,GenBank登录号为JF710371。其cDNA全长977bp,包括1个编码235个氨基酸共708bp的开放阅读框。序列比对和分子系统发生分析表明,PrseAP3是拟南芥的AP3同源基因,其蛋白质的C末端具有2个保守基元:PI-derived模体和paleoAP3模体,属B类转录因子中paleoAP3进化系。半定量RT-PCR分析表明,PrseAP3主要在单瓣日本晚樱品种大岛的萼片、花瓣和雄蕊中表达;在重瓣品种一叶的花瓣、雄蕊和叶化心皮中表达。其表达...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李晔 张宝乐 丁建华 张子敬 徐银学
为了探明G蛋白偶联受体6基因(Gpr6)的结构、功能与表达模式,克隆了含有完整阅读框的猪Gpr6的cDNA序列。利用生物信息学方法对Gpr6基因的结构及功能进行了系统研究,运用Real-time PCR技术对其在组织中的表达规律进行了分析,并利用构建的原核表达载体pET32a-Gpr6对其在BL21菌株中的最佳蛋白表达条件进行了筛选。结果表明:猪Gpr6基因的cDNA序列由1 664个核苷酸组成,编码366个氨基酸残基,等电点为7.63,相对分子质量为38.38×103,与牛、犬、人、黑猩猩、大鼠和小鼠的氨基酸相似性分别为91.2%、89.5%、88.3%、88.3%、86.3%和86.1%。...
关键词：
猪 Gpr6基因 组织表达谱 原核表达
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
卓娟 侯丹 林新春
【目的】研究PhebHLH6转录因子在毛竹Phyllostachys edulis逆境胁迫应答中的作用，为毛竹抗逆分子机制研究奠定一定的基础。【方法】以毛竹实生苗为材料进行非生物胁迫处理[干旱胁迫、盐胁迫、水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)处理]，利用转录组数据筛选出1条差异表达基因，命名为PhebHLH6，并对其进行了基因克隆及生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR方法分析PhebHLH6在干旱、盐胁迫及SA、ABA处理下的表达模式。【结果】PhebHLH6基因编码区长度为801 bp，编码266个氨基酸，包含bHLH结构域，属于典型的bHLH转录因子。组织特异性表达分析表明：PhebHLH6在毛竹各个组织均有表达，其中在1.5和3.0 m的笋顶部表达丰度最高。在干旱和高盐胁迫处理下，PhebHLH6的表达水平在处理3 h时被强烈诱导，但在处理24 h后显著下调。在SA和ABA激素处理下，PhebHLH6的表达水平被SA和ABA诱导也呈先上升再下降的趋势，其中受SA强烈诱导，受ABA诱导作用较弱。【结论】PhebHLH6可能参与了毛竹干旱和盐胁迫早期响应途径，并可能在SA和ABA激素信号通路中起一定的调控作用。图4表2参32
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈华涛 陈新 顾和平 陈满峰 张红梅 袁星星 崔晓艳
为探明大豆中HKT蛋白基因的耐盐作用机理,从耐盐大豆材料中克隆到GmHKT6;2基因完整的cDNA序列,GmHKT6;2基因的开放阅读框(ORF)全长1 644 bp,编码547个氨基酸。序列比对与进化树分析表明:GmHKT6;2是大豆中的一个新HKT蛋白基因;GmHKT6;2基因在大豆的根、茎及叶中均能表达,150 mmol/L NaCl处理后,该基因在大豆根、茎及叶中的表达被强烈诱导并高效表达。结构域分析结果表明:大豆GmHKT6;2基因拥有10个可能的跨膜结构域(TMD)和阳离子转运蛋白保守结构域,推测其是通过调节相关阳离子的转运来调控大豆的耐盐性。
关键词：
大豆 耐盐性 基因克隆 表达分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
张鹏 江明锋 马晓瑞 方毅 王永
基于物种同源性,应用PCR和RT-PCR技术,克隆得到藏山羊瓣胃溶菌酶基因cDNA编码序列,并命名为TGOLyz,应用生物信息学软件对TGOLyz基因核苷酸序列及预测的蛋白序列进行了分析,并预测该蛋白的三级结构;应用qRT-PCR技术检测了TGOLyz在5个组织中的定量表达。结果表明,藏山羊瓣胃溶菌酶基因TGOLyz cDNA编码区长444 bp(Accession No.KC558501),编码147个氨基酸,分子量为16.29 kDa,等电点为6.08。同源性对比显示,TGOLyz与牛胃1(Cow stomach 1)的同源性最高,达95.24%,与牦牛胃(Yak stomach)的同源性...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
石玉波 张荻 申晓辉 王玲 卓丽环
根据前期百子莲转录组测序分析的结果,获得了1个与光周期调控开花途径关键基因CONSTANS(CO)同源性较高的核心片段。采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法得到了百子莲CO基因cDNA全长序列,命名为ApCOL,GenBank登录号为KF683287。序列分析表明,百子莲ApCOL基因cDNA全长1 648 bp,5'非编码区(5'UTR)和3'非编码区(3'UTR)分别为126和355 bp,开放阅读框(ORF,127~1 293 bp)1 167 bp,编码388个氨基酸。ApCOL具有CO蛋白典型的结构域:氨基末端有2个B-box结构域,羧基末端有1个CCT保守结构域。氨基酸同源性比...
关键词：
百子莲 ApCOL 克隆 基因表达
[期刊] 水产学报
[作者]
雷丽娜 高谦 王伟 孙兆盛 罗璋 刘其根
为进一步了解花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用，本研究通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了免疫球蛋白M重链（IgMH）和主要组织兼容性复合体（Major histocompatibility complex class II，MHCII）β基因的全长；通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测它们在花鲈各组织中组织分布情况以及LPS、Poly (I:C) 刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染后mRNA水平的表达变化情况；构建了IgMH-pET21d、IgMCH_(1-2)-pET21d和MHCⅡ β-pET21d原核重组表达质粒，进行重组蛋白表达，并通过分子筛层析技术纯化花鲈IgMH、IgMCH_(1-2)和MHCⅡ β重组蛋白，进而制备了抗花鲈IgM的多克隆抗体。结果表明，花鲈IgMH和MHCII β的cDNA全长分别为1 977 bp和1 242 bp；它们在鳃、脾脏和头肾等免疫相关组织中mRNA水平的表达量较高；LPS、Poly (I:C) 刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染花鲈导致鳃、脾脏和头肾中这两个基因的表达水平发生显著变化，表明IgMH和MHCII β均参与了花鲈的抗感染免疫反应；此外，抗花鲈IgM的多克隆抗体能与花鲈全血清发生强烈反应，与鳜全血清弱反应，与大口黑鲈和草鱼的不发生反应，推测其反应强度反映了物种间亲缘关系的远近。本研究首次克隆了花鲈的IgMH和MHCⅡ β基因全长，表达了IgMH和MHCⅡ β原核重组蛋白，制备了抗花鲈IgM的多克隆抗体，揭示了IgMH和MHCⅡ β基因参与花鲈的抗感染免疫应答，为深入研究花鲈的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张响玲 罗建让 张延龙 牛立新 孙道阳 梁振旭
【目的】探索岷江百合(Lilium regale)的抗病毒病机制,为开展百合抗病毒育种工作奠定基础。【方法】对岷江百合叶片接种黄瓜花叶病毒(CMV),采用RACE技术克隆岷江百合NAC转录因子基因(LrNAC),对其全长cDNA序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR对LrNAC转录因子基因的器官特异性及CMV侵染后该基因的表达模式进行分析。【结果】LrNAC转录因子基因全长827bp,可编码由208个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白具有NAC家族保守结构域;该蛋白为碱性、亲水性、非分泌、不具跨膜区蛋白;分子质量为23.4ku,等电点为9.48。LrNAC转录因子基因在岷江百合嫩叶中相对表达量...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
闵芮涵 孙敏译 吴昀 李世琦 夏宜平
【目的】淀粉是百合Lilium spp.鳞茎的主要组成成分,淀粉代谢对于百合鳞茎发育至关重要,对其开展深入研究有助于解决鳞茎繁育慢等产业化难题。【方法】以主栽品种东方百合’索邦’ Lilium ’Sorbonne’离体鳞茎为材料,在观测不同发育时期形态和淀粉积累的基础上,利用c DNA末端快速扩增技术(RACE),克隆淀粉合成代谢关键酶颗粒结合型淀粉合成酶基因LohGBSSI,并对其开展不同组织及发育期基因表达谱分析。【结果】①根据形态及源-库转换,离体百合鳞茎形成和发育过程可分为小鳞茎膨大初期(0～15 d),小鳞茎快速膨大期(15～55 d)及小鳞茎膨大后期(55～75 d)。②’索邦’颗粒结合型淀粉合成酶基因LohGBSSI(GenBank登录号:MF101407.1)全长1 913 bp,开放阅读框(ORF)长为1 665 bp,编码554个氨基酸。氨基酸序列与兰州百合Lilium davidii var. unicolor GBSSI同源性较高(92%),推测该基因可能属于GBSSI基因家族。③LohGBSSI基因在鳞茎和叶中表达显著高于茎段和根,表明直链淀粉合成的最主要部位为源-库关键器官;不同发育时期鳞茎内LohGBSSI的表达在15 d时最高,暗示鳞茎形成初期需淀粉快速合成以便形态建成。【结论】为后续解析淀粉合成关键酶基因GBSS在鳞茎发育中的功能奠定了基础,也为百合进行淀粉相关基因修饰提供了依据。图9表1参17
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