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[期刊] 中国农业科学
[作者]
沈林林 邹文超 高芳銮 詹家绥
【目的】马铃薯Ｙ病毒（Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ，ＰｖＹ）是马铃薯生产上危害较为严重的病毒，也是制约马铃薯可持续发展的主要病毒之一。论文旨在开发一套简便、准确、快速的ＰｖＹ分子鉴定技术，并采用该技术及时查明福建省部分产区ＰｖＹ病害的发生、分布及ＰｖＹ株系组成。【方法】采用ＥＬｉｓａ方法对采自福建省长乐市、福清市马铃薯种植区疑似受ＰｖＹ感染的样品进行检测，并根据文献报道的ＰｖＹ Ｐ１、ｖＰｇ和ＣＰ基因保守区设计３对简并引物，对ＥＬｉｓａ检测后的阳性样品进行基因扩增、克隆，并将获得的序列进行核苷酸序列一致性、重组位点、基因型分布和系统发育分析。【结果】ＥＬｉｓａ检测结果表明，１７份样品中有１３个．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高芳銮 沈建国 史凤阳 方治国 谢联辉 詹家绥
【目的】查明马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)病在中国的发生情况,及时、准确地鉴定出PVY并对其分子变异进行分析。【方法】采用ELISA方法对采自中国14个省(直辖市)马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行了检测,并对其中的部分材料镜检验证,然后根据CP基因序列设计1对简并引物针对随机选择感染PVY的14个省(直辖市)代表样品进行CP基因扩增克隆,将测序得到的序列进行分子变异分析,并使用贝叶斯法(Bayesian inference,BI)重建系统发育关系。【结果】ELISA检测结果表明,691份样品中220个样品与PVY抗体呈阳性反应,其余呈阴性反应;ELISA检测的阳性材...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张永鹏 杨钰泽 咸文荣 马永强
【目的】为了解马铃薯主要病毒对青海省部分地区马铃薯生产的危害，明确青海省部分马铃薯产区主要病毒类型及PVY株系类别，对马铃薯病毒病的防治和品种选育工作提供科学依据。【方法】利用DAS-ELISA和RT-PCR结合生物信息学分析方法对采自青海省大通县和互助县的181份疑似马铃薯病毒病样品进行病毒种类检测和Y病毒株系类型分析。【结果】181份样品中，PVY、PVS、PVM和PLRV病毒的检出率分别为17.68%、19.34%、4.42%和4.42%，其中，PVY单独侵染率最高，达14.92%，其次PVS为12.71%，样品中未检出PVX、PVA和AMV病毒。复合侵染中以2种病毒复合侵染为主，其中PVS+PVM、PVY+PVS和PVS+PLRV发生情况较为常见。DAS-ELISA检测PVY单独侵染结合RT-PCR混检获得20份PVY阳性样品，对其进行马铃薯Y病毒株系血清学检测分析发现，青海省部分地区马铃薯Y病毒株系以PVY~(O+C)血清型为主，其中PVY~(O+C)血清型阳性株系19份，占比为95%，PVY~(N)与PVY~(C)血清型阳性株系各1份，均占比为5%。为进一步明确PVY亚株系，根据血清学检测结果，对获得的19个PVY分离物的基因序列进行分析，发现PVY病毒核苷酸一致率为97.0% ～100%，氨基酸一致率为95.8% ～ 100%，且未发现重组位点，种群基因较稳定，PVY分离物系统发育分析发现，16个PVY分离物与PVY~(N:O)株系亲缘关系较近，3个PVY分离物PVY~(NTN-NW)株系亲缘关系较近，青海省部分地区马铃薯Y病毒株系类型以PVY~(N:O)、PVY~(NTN-NW)株系为主，与血清学检测结果一致。【结论】青海省部分地区主要马铃薯病毒种类有PVY、PVS、PVM和PLRV，PVY和PVS是青海地区马铃薯病毒的主要流行种类，其中Y病毒株系类型以PVY~(N:O)和PVY~(NTN-NW)株系为主，且同源性很高，PVY的种群基因较稳定。
[期刊] 华北农学报
[作者]
周巧梅 谢晓亮 温春秀 马恢 尹江 吴志明
对张家口分离的马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS-Hebei)的CP基因进行了克隆和序列分析。以提纯的马铃薯植物总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增目的基因,PCR扩增产物克隆到质粒pMD18-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由885个核苷酸组成,编码294个氨基酸组成的33 kD蛋白,与PVS外壳蛋白的大小一致,与国际基因库登记的几个株系相比,结果表明,PVS-Hebei与它们之间的核苷酸序列同源性为82.4%~95.6%,氨基酸序列的同源性为93.9%~98.0%,进化树分析表明,PVS明显存在2个组(组Ⅰ和组Ⅱ),PVS-Hebei归类为Ⅰ组,与来...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄婷 袁治礼 成巨龙 吴云锋 武占敏 代锦
【目的】对21份我国生产中大面积推广使用的烟草品种和抗源材料进行烟草蚀纹病毒(TEV)和马铃薯Y病毒(PVY)的抗病性鉴定,为烟草抗病品种的利用与品种合理布局,以及烟草抗病毒病育种的亲本选择提供依据。【方法】以21份烟草品种为材料,于2009-2011年采用大田人工接种鉴定的方法,对21分烟草种质资源进行了TEV和PVY的抗病性鉴定。【结果】在供试种质中,对TEV表现抗病的有双抗70、云烟97、中烟103、秦烟96、辽烟17、云烟203、秦烟98、云烟85、G28共9份材料,表现中抗的有中烟90、龙江237、NC89、G80共4份材料,表现中感的有云烟87、RG11、净叶黄共3份材料,表现感病...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
文才艺 吴元华 张艳红
感染马铃薯Y病毒脉坏死株系 (PVYN)后 ,敏感烟草体内的多酚氧化酶 (PPO)活性升高 ,而抗性烟草的PPO活性降低 ,但其活性值均高于敏感烟草健康植株 ;敏感烟草从接种PVYN 后第 8d起出现 2条新的PPO同工酶谱带 ,而且随着病害程度的加重其强度增加 ,抗性烟草则没有新的PPO同工酶谱带出现 .在未接种的情况下 ,抗性烟草体内的PPO活性明显高于敏感烟草 ,其PPO同工酶谱带数比敏感烟草多 1条
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
夏范讲 郭玉双 贾蒙骜
为了解马铃薯Y病毒在贵州烟田的发生和流行规律,对2013—2015年采集到的贵州省多个烟区呈现典型茎脉坏死症状的疑似受马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)侵染的烟草样品进行单斑分离和病毒鉴定,并以现有PVY序列信息为参考,设计了4对PVY特异引物,经过RT-PCR扩增、T载体连接、序列测定以及序列拼接,并利用MEGA软件进行系统进化分析。结果发现PVY福泉分离物(PVY Fuquan isolate,PVY-FQ)和PVY大方分离物(PVY Dafang isolate,PVY-DF)为优
关键词：
马铃薯Y病毒 基因组序列 系统进化分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
程亮
【目的】本研究通过对不同PVY分离物基因的测序及分析,了解青海省PVY株系特点,进而对PVY病毒的分子检测和预防控制提供理论基础。【方法】采用RT-PCR扩增的方法,对青海省18个PVY的P1基因进行克隆测序和进化树分析。【结果】P1目的基因共825个碱基,编码275个氨基酸;经比对样品的P1基因序列,核酸一致率达90.3%～100.0%,其中Y-39、Y-47和Y-513个样品与其它样品有55～61个碱基的差异;试验样品与国内外已报道的PVY P1基因相比较,经进化树分组后,主要分为A、B、C 3组,其中A组包含了大部分来自青海的样品,是本地区的优势组群;而另一组4个样品的P1基因与本地优势组群有较大差异,且4个样品间也有一定的差异。通过与GeneBank中已上传的序列提供的信息相比对,发现14个样品的P1基因与PVY~(N-Wi)株系较近;其余4个样品与PVP~(NTN)株系较近。【结论】由P1基因分析表明,青海省马铃薯Y病毒株系具有地域特点,另外的4个样品说明青海PVY有可能是不同区域间种薯调运以及PVY本身重组特性而产生的。
关键词：
马铃薯Y病毒 P1基因 序列分析 青海
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
詹琳琳 郭玉双 蔡健宇 武晓云 杨靓
为了探明微管结合蛋白７０（ＭＡＰ７０）在抗马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）中的作用机制，克隆了烟草Ｎｔ ＭＡＰ７０基因的全长，并进行了生物信息学分析．利用实时荧光定量ＰＣＲ研究了该基因在烟草不同时期和不同部位中的表达水平，结果表明，ＮｔＭＡＰ７０在烟草的各个生长期均有表达，且在根中的表达量最高．构建了基于双生病毒卫星诱导的烟草Ｎｔ ＭＡＰ７０的沉默载体，以中国番茄黄化曲叶病毒（ｔＹＬＣＣＮＶ）为辅助病毒在烟草中沉默了该基因．与对照相比，在Ｎｔ ＭＡＰ７０基因沉默的烟草中ＰＶＹ侵染速率明显减缓，病毒含量显著降低．
关键词：
NtMAP70 马铃薯Y病毒 烟草 抗性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
竺晓平 朱常香 宋云枝 温孚江 刘红梅 李向东
目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试验表明前者没有一例转基因植株表现为抗病,而转化反向重复结构的转基因植株82.8%表现近似免疫的高度抗病型,Southern印迹杂交证明目的基因已整合到烟草基因组,Northern印迹杂交结果显示反向重复结构转基因植物的抗病性与RNA的表达量呈现负相关。结论抗病性是RNA介导的病毒抗性。3′端短片段诱导产生的转基因抗病株比例比5′端短片段诱导产生的高。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
崔晓艳 魏太云 陈新
马铃薯Y病毒属(Potyvirus)是包含范围广、增殖过程复杂但基因组简单的一类重要病毒,对农业生产造成重大的经济损失。笔者介绍了马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展,并对potyviruses的复制模型、运动方式和途径等作了相关总结。
关键词：
马铃薯Y病毒属 细胞生物学 增殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周佳 李凤霞 陈帅 罗成刚 刘贯山 蒋彩虹 杨爱国 苏振刚 王元英
【目的】从高抗PVY烟草品种VAM中克隆抗病相关基因,分析该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在烟草抗PVY防御反应中的作用,为培育抗PVY烟草新品种奠定基础。【方法】利用SSH结合cDNA芯片筛选出来的病害诱导特异表达基因片段,通过RACE技术克隆烟草抗病相关基因;生物信息学分析该基因保守结构域以及序列特征;采用MEGA4.0软件构建系统进化树;利用实时荧光定量RT-PCR技术研究该基因的表达特性。【结果】克隆了1个烟草抗病相关基因,命名为NtPsaN,该基因具有PsaN基因家族保守结构域,OFR长度507bp,编码168个氨基酸;构建了PsaN亚基系统进化树;实时荧光定量RT-PC...
关键词：
PVY NtPsaN 进化树 基因表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
钟婷婷 蒲志刚 何俊蓉 吴洁 杨春林 阎文昭
应用血清学双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对采自四川省21个马铃薯主产区的981份田间病株、试管苗及薯块进行了马铃薯病毒检测鉴定。检出的病毒种类有马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯M病毒(PVM)以及马铃薯卷叶病毒(PLRV)等6种病毒,其中PVS的检出率最高。同时对在安第斯山地区新发现的安斯山马铃薯潜隐病毒(APLV)、安第斯山马铃薯斑驳病毒(APMoV)2种病毒进行了检测,检测结果表明,四川还未发现这2种病毒。
关键词：
马铃薯病毒普查 DAS-ELISA
[期刊] 华北农学报
[作者]
贾慧 王艳辉 王进忠 王升启 董金皋
黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大。农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法。本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以从病毒侵染样本中检测到特异性识别信号,检测灵敏度比RT-PCR高10～100倍,该技术能对植物病毒做出快速、准确的检测。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋静静 蒙姣荣 邹承武 李璞 王志强 陈保善
【目的】对广西冬种马铃薯病毒进行鉴定,为无病毒种薯选择和大田防治提供依据。【方法】2012年在马铃薯主要产区采集具有明显病毒病症状的样品,在血清学ELISA检测的基础上,进一步用小RNA深度测序对按症状分类的样品进行混合样本的病毒种类鉴定,再用RT-PCR方法对分组混合样本进行验证。【结果】在109个样本中检测到马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)、马铃薯A病毒(Potato virus A,PVA)、马铃薯H病毒(Potato virus H,PVH)、马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)...
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