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[期刊] 中国农业科学
[作者]
穆敏 舒娜 王帅 郭丽雪 樊伟丽 阴祖军 王俊娟 王德龙 叶武威
【目的】克隆酿酒酵母（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅＳ ｃｅｒｅｖｉＳｉａｅ）耐盐基因ｈａＬ１（ｈａＬｏｔｏＬｅｒａｎｃｅ）并转化棉花，探究该基因在棉花中的功能，进一步探究酵母耐盐相关基因在高等植物中的具体功能。【方法】根据随ｎｃＢｉ核酸数据库中酵母耐盐基因ｈａＬ１的ｍｒｎａ全长序列信息，利用ｒｔ－Ｐｃｒ技术从酿酒酵母ａＳ２．３７５中克隆该基因。选择酶切位点ＸＢａⅠ和ＳｍａⅠ对表达载体ＰＢｉ１２１：：ＧＦＰ进行双酶切，采用ｉｎ－ＦｕＳｉｏｎ技术构建ＰＢｉ １２１－ＳｃｈａＬ１：：ＧＦＰ融合表达载体。以自发荧光较弱的陆地棉品种ｙ－２０６７、Ｚａ－２３、ＧＺ－２的花粉为材料，用基因枪轰击棉花花粉进行瞬时．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁林云 张微 王晋成 田亮亮 李妮娜 郭琪 杨淑明 何曼林 郭旺珍
【目的】SAP(stress-associated protein)是一类涉及胁迫应答和调控的锌指蛋白。克隆并分析其对逆境胁迫应答的反应,为棉花抗逆育种提供候选基因。【方法】通过电子克隆方法并经RT-PCR验证获得棉花锌指蛋白基因GhSAP1,将带有目的基因的载体质粒通过PEG介导转化棉花叶肉原生质体细胞,瞬时表达分析其编码蛋白的特性及亚细胞定位信息。通过qRT-PCR技术分析目标基因的组织表达特征及非生物胁迫条件下的表达特性。通过农杆菌介导叶盘转化法,经组织培养获得转基因烟草进行异位表达,检测其与抗逆相关的生理指标,证明其提高植物抗逆能力。【结果】GhSAP1 ORF长度为543 bp,编码...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄鹭强 张丽萍 雷秀清 林志钦 郑宝东
以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模版,逆转录获得cDNA;以cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增,得到苹果酸通透酶(mae1)基因,将其与pMD-18T连接并测序.结果表明cDNA全长为1316 bp,编码438氨基酸,分子质量49ku,与已报道的mae1基因序列的同源性达到99%.mae1与整合型表达质粒pSH47连接后,用重组的表达质粒转化产朊假丝酵母,经PCR验证筛选阳性克隆子.通过对转化子的摇瓶筛选,发现重组子的降酸幅度均大于原始菌株,培养40 h降解了48.6%的L-苹果酸,降解率比原始菌株提高了9.8%.
[期刊] 林业科学研究
[作者]
梁重钧 李麟坤 胡振华 张薇 许慧慧 王利兵
[目的 ]探究调控文冠果种子神经酸合成关键基因。[方法 ]本研究根据参考基因组联合转录组分析文冠果3-酮酯酰-CoA合酶（3-ketoacyl-CoA synthase,KCS）基因家族在不同发育时期种子中的表达模式；通过RT-PCR扩增文冠果XsKCS7基因并进行生物信息学分析；XsKCS7基因异源转化酿酒酵母鉴定基因功能。[结果 ]文冠果XsKCS7基因在不同发育时期种子中的表达量远高于其他KCS基因；克隆XsKCS7基因，生物信息学分析显示，XsKCS7基因的开放阅读框为1 512 bp，编码503个氨基酸，含有典型的KCS家族保守基序“GMGCSA”、“FGNTSSSS”以及“GSGFKCNSAVW”，与橡胶树KCS的亲缘性关系最近，为67.62%; XsKCS7异源转化酿酒酵母鉴定其具有调控芥酸和神经酸合成的功能。[结论 ]XsKCS7基因确为调控文冠果种子芥酸和神经酸合成的关键基因。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘延琳 李华
【目的】进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌SD-2a(Oenococcus oeni SD-2a)的苹果酸-乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation,MLF)同时进行。【方法】克隆Oenococcus oeni SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因mleA,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母整合型质粒YIp5为载体,构建重组表达质粒pYILmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS59,经筛选鉴定获得酵母转化子YS59/pYILmleA。进行转化子的营养缺...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
付永平 李博 王丕武 高玮 夏海丰 张卓
【目的】克隆绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因,并在粟酒裂殖酵母细胞中进行表达分析。【方法】利用PCR技术,从绿色木霉中克隆纤维素酶β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,再通过XhoⅠ和NotⅠ2个酶切位点与粟酒裂殖酵母表达载体pREP5N连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后采用DNS法测定表达产物的酶学活性。【结果】PCR扩增得到2 380bp的bglⅠ基因序列,包括完整的CDS序列和信号肽序列,编码序列与已报道的里氏木霉纤维素酶基因序列相似性为100%;对酵母转化子进行诱导培养后,SDS-PAGE电泳检测得到大小...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赫卫 刘林 关荣霞 邱丽娟
【目的】鉴定大豆基因GmNcl1的序列多态性,探求逆境下该基因的表达模式。【方法】通过BLASTP比对GmNCl1的氨基酸序列,寻找同源基因。测定50个大豆品种中GmNcl1的启动子和基因的DNA序列差异以及这些品种的耐盐性差异,利用MAGE软件进行单倍型聚类分析和进化树分析,寻找品种耐盐性和序列间的相关性。以耐盐品种铁丰8号和盐敏感品种85-140的幼苗根为材料,利用实时荧光定量PCR分析GmNcl1在多种处理下的表达模式,处理条件包括蛋白抑制剂阿米洛利(Na+/H+逆转运蛋白抑制剂)和钒酸钠(Ca2+-ATPase抑制剂)、pH4.0和pH5.7、ABA处理及多浓度盐、碱、旱逆境胁迫。【结...
关键词：
大豆 离子交换蛋白 耐逆 表达分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡根海 张晓红 付远志 董娜 王清连
为了探讨棉花过表达SOD基因的遗传效应,利用Gen Bank数据库中棉花胞质SOD基因的核酸序列,设计1对特异引物,克隆了棉花胞质Cu/Zn-SOD基因,构建了植物双元表达载体;采用农杆菌介导的子叶腋芽遗传转化新技术,获得了过量表达的转基因棉花植株。利用PCR扩增报告基因和Southern Blotting证明目标基因已经整合到棉花基因组上;转基因材料T1种子的耐盐性发芽试验表明,在NaCl胁迫下,与对照(非转基因)相比,转基因材料主根平均长度、芽平均长度和侧根平均数量均大于阴性对照,转基因植株与阴性对照
[期刊] 水产学报
[作者]
胡澄溪 刘伟 毕燕会 周志刚
三酰甘油（TAG）合成缺陷型酿酒酵母突变株H1246常用于其他生物二酰基甘油酰基转移酶（DGAT）的基因功能鉴定。为了解外源DGAT的基因表达对酵母细胞脂质及生长的影响，实验将缺刻缘绿藻1个I型和3个II型的DGAT分别转化H1246菌株，经筛选获得tDGAT1、tDGAT2A、tDGAT2B及tDGAT2C等4株转目的基因酵母。通过显微观察、分光光度法、重量法、棒状色谱分析、气相色谱-质谱分析对酿酒酵母的形态和脂滴、细胞密度、生物量、总脂、总脂肪酸以及TAG含量进行检测。稳定生长期时的显微观察结果显示，这4个外源基因均能使H1246菌株恢复TAG的合成和贮存能力进而在细胞中出现油滴；油脂分析结果表明，tDGAT1菌株的TAG及脂肪酸含量最高，且显著高于野生型Scy62及其他3株转目的基因菌株的水平；生长性能的数据显示，4个外源基因均能使H1246菌株的细胞密度达到Scy62的水平，这可能是由于TAG的合成消耗了游离脂肪酸，以减轻其对细胞产生的伤害而致；但tDGAT1菌株的生长迟滞期明显延长，以致其生长速率最低。本研究结果表明，将缺刻缘绿藻不同类型的外源DGAT转化酿酒酵母后，使后者的生长性能及脂质含量产生不同的变化。该结果为利用基因工程改造酵母菌株以生产人类所需要的目的油脂研究奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
皇甫海燕 燕孟娇 宋培玲 郝丽芬 皇甫九茹 贾晓清 李子钦
为探讨ＰＧＩＰ蛋白与ＰＧ的互作及ＰＧＩＰ基因在油菜抗黑胫菌病中的作用，根据Ｇｅｎ Ｂａｎｋ中油菜ＰＧＩＰ９、ＰＧＩＰ１５ＣＤＳ序列设计引物，并去掉信号肽序列，以接种黑胫病病原菌ＬｅＰｔｏＳＰｈａｅｒＩａ ＢＩＧＬｏＢｏＳａ（菌株ｎＭ－１）７ Ｄ后油菜叶片总ｒｎａ反转录的Ｃ Ｄｎａ为模板，ＰＣｒ扩增出ＰＧＩＰ９、ＰＧＩＰ１５除信号肽以外的编码区片段，并克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体Ｐ ＰＩＣＺαａ中构建重组质粒Ｐ ＰＩＣＺαａ－ＰＧＩＰ９、Ｐ ＰＩＣＺαａ－ＰＧＩＰ１５。重组质粒经单、双酶切、菌落ＰＣｒ筛选鉴定后热激化法转化酵母细胞ＰＭａＤ１６，再经ＺｅｏＣＩｎｔＭ的ＹＰＤ平板和菌落ＰＣｒ筛选鉴定．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张桂敏 张晚鸣 何国帮 马立新
根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列,设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR,扩增出了1条约1.4 kb的带,将该片段进行DNA序列测定,其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致,但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上,获得表达质粒pHBM108。该质粒转化毕赤酵母KM71所得重组子经PCR验证后进行诱导表达,其中一重组子经144 h诱导,植酸酶表达量至少为1.25 mg/ml,比同类报道的表达量高出60％以上,以植酸钠为底物测得酶活为11.17U/ml。
[期刊] 华北农学报
[作者]
倪志勇 吕淑萍 李波 范玲
根据棉花GhCAD1基因的cDNA序列设计引物,采用PCR技术从棉花中克隆了GhCAD1基因的DNA序列,采用半定量RT-PCR方法研究GhCAD1基因在不同组织中的表达。结果表明:GhCAD1编码区DNA序列长度为2 898bp,包含5个外显子和4个内含子。分析发现这些内含子富含AT,在第1内含子中发现一个SBF-1因子结合位点。半定量RT-PCR检测表明,GhCAD1基因在不同组织中均有表达,其中叶部的表达量最高。GhCAD1表达量依次为叶>铃壳>苞叶>花瓣>根>子叶。
关键词：
棉花 GhCAD1 内含子 表达分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
张晓红 王寒涛 王聪聪 张芳芳 邓妍 魏恒玲 胡根海
为解析棉花中磷脂酰乙醇胺结合蛋白GhTFL1b基因对胁迫的响应及生理功能,从棉花中克隆了磷脂酰乙醇胺结合蛋白GhTFL1b基因,并对该基因进行表达分析和蛋白质互作研究。利用启动子分析软件PlantCARE预测得出,GhTFL1b启动子区域有茉莉酸响应元件、脱落酸响应元件、干旱诱导的MYB结合位点和光周期响应元件等。对GhTFL1b进行组织特异性表达分析,发现该基因在花中表达量最高,其次是根和顶芽,其他组织中表达量极低。进一步比较栽培种和半野生种不同时期的表达,发现无明显差异。激素和胁迫处理研究表明,GhTFL1b基因受水杨酸(Salicylic acid,SA)诱导低调表达,而受盐胁迫处理后高调表达。酵母双杂交验证GhFD与GhTFL1亚组蛋白互作,结果表明GhFD蛋白只能与GhTFL1b互作,而不与GhTFL1a、GhTFL1b、GhTFL1c互作。GhTFL1b基因不参与光周期调控通路,可能参与植物逆境胁迫水杨酸和盐胁迫响应的调控。
关键词：
棉花 GhTFL1b基因 表达分析 调控
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
缪卫国 宋从凤 乔子辰 王金生
采用H2O2和酶活性检测、DAB染色、定量实时PCR等方法研究转hpa1Xoo基因棉花T-34叶组织中的活性氧。结果显示:无病原菌侵染时,T-34和出发品种Z35均未产生活性氧。在接种黄萎病菌分生孢子悬浮液后,与Z35相比,在T-34叶组织中接菌0～8 h H2O2含量变化呈现2个峰值;接菌8 h时PAL和POD酶活性显著增强;DAB染色显示褐红色斑产生;2个防卫基因ghAOX1和hsr203J超表达。这些结果表明,转hpa1Xoo基因棉花为某些防卫基因超水平表达提供了分子基础,使受到病原菌侵染时才诱导产生的高水平活性氧及相关基因表达,并且组成型表达的HarpinXoo赋予转基因棉花对黄萎病菌...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
刘庆慧 陈婷 黄倢
研究发酵时间和接种量对WSSV-VAP1重组菌蛋白表达量的影响及重组毕赤酵母中外源基因的稳定性。结果表明,构建的重组菌SMD1168/pGAPZaA-VAP1在发酵72h后,蛋白表达量占总蛋白10.45%,控制接种量对基因工程菌Pichia pastoris表达WSSV-VAP1非常重要。外源基因的插入对宿主菌的生长未产生明显的影响,重组质粒在毕赤酵母SMD1168中很稳定。
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