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[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖海华 印莉萍 韩振海
【目的】研究MbNramp1基因的功能。【方法】通过异源互补试验鉴定该基因转运铁的功能,并对MbNRAMP1蛋白进行亚细胞定位研究。【结果】MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4在缺铁的培养基上恢复生长。在供试BPDS浓度的培养基上,MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4生长状况均明显好于空载体转化后的突变株。培养基中BPDS增加到15μmol·L-1时,转化了MbNramp1的酵母细胞生长状况与野生型相差无几。在30μmol·L-1BPDS时,MbNramp1转化的细胞与低浓度BPDS相比生长延缓,但是明显优于空载体转化的DDY4突变株。与较低浓度BPDS相比,野生型酵母(DY145...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
穆敏 舒娜 王帅 郭丽雪 樊伟丽 阴祖军 王俊娟 王德龙 叶武威
【目的】克隆酿酒酵母（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅＳ ｃｅｒｅｖｉＳｉａｅ）耐盐基因ｈａＬ１（ｈａＬｏｔｏＬｅｒａｎｃｅ）并转化棉花，探究该基因在棉花中的功能，进一步探究酵母耐盐相关基因在高等植物中的具体功能。【方法】根据随ｎｃＢｉ核酸数据库中酵母耐盐基因ｈａＬ１的ｍｒｎａ全长序列信息，利用ｒｔ－Ｐｃｒ技术从酿酒酵母ａＳ２．３７５中克隆该基因。选择酶切位点ＸＢａⅠ和ＳｍａⅠ对表达载体ＰＢｉ１２１：：ＧＦＰ进行双酶切，采用ｉｎ－ＦｕＳｉｏｎ技术构建ＰＢｉ １２１－ＳｃｈａＬ１：：ＧＦＰ融合表达载体。以自发荧光较弱的陆地棉品种ｙ－２０６７、Ｚａ－２３、ＧＺ－２的花粉为材料，用基因枪轰击棉花花粉进行瞬时．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯飞 纪春艳 杨秀芬 曾洪梅 邱德文
为阐明高渗透压甘油激酶在链格孢菌中的功能,通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissi-ma)cDNA酵母表达文库,并对其进行筛选而获得细极链格孢菌高渗透压甘油蛋白激酶AtHOG1基因,该基因全长1 539 bp,编码355个氨基酸。AtHog1p含有MAPK保守的激酶激活区域"TGY",与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)AfOsm1p(XP-752664)、稻瘟菌(M.grisea)MG01822(XP-363896)及酿酒酵母(S.cerevisiae)ScHog1p(AAB67558)高度同源,相似性分别为94%,90%和80%。在...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵亚婷 邢红侠 庞茜 郑旭 张靖 瓮巧云 邢继红 董金皋
利用酵母双杂交技术,鉴定拟南芥抗病相关基因T1N6-22的互作蛋白,为进一步明确T1N6-22基因调控拟南芥抗病的分子机制奠定基础。利用Gateway技术,构建T1N6-22基因及其候选互作蛋白基因的酵母双杂交载体AD-T1N6-22、AD-AT1G06050、AD-AT1G21400、AD-AT2G19480、BD-T1N6-22、BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480。将空载的AD载体分别与BD-T1N6-22、BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480载体组合共同转化酵母感受态细胞,检测各基因的自激活活性,发现T1N6-22、AT1G21400、AT2G19480基因无自激活活性,AT1G06050基因有自激活活性。将AD-T1N6-22载体分别与BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480载体组合,BD-T1N6-22载体分别与AD-AT1G06050、AD-AT1G21400、AD-AT2G19480载体组合,进行酵母双杂交试验。结果发现,AD-T1N6-22与BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480,BD-T1N6-22与AD-AT1G06050、AD-AT1G21400、AD-AT2G19480共转化的酵母细胞在二缺(-Leu/-Trp)、三缺(-Leu/-Trp/-His)和四缺(-Leu/-Trp/-His/-Ade)培养基上均可以生长,表明T1N6-22与AT1G06050、AT1G21400和AT2G19480在酵母细胞中直接互作。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
肖新云 刘又嘉 邓艳玲 郭抗萧 谭周进
为研制新型微生态制剂，从试验小鼠中分离出１株肠道酵母菌，采用形态学、生理生化、基因测序和系统发育树分析等方法对其进行鉴定。结果显示，该菌菌落呈白色、圆形，在显微镜下细胞呈椭圆形，出芽生殖；该菌能发酵葡萄糖、蔗糖和Ｄ–甘露醇，能够同化蛋白胨和硝酸钾，不能耐受高浓度乙醇，脲酶试验结果为阴性。序列分析结果表明，该菌株１８ＳｒＤＮＡ（登录号为ＫＣ５３４８４３）与汉逊德巴利酵母（ＤｅｂＡｒｙｏｍｙＣｅＳ ｈＡＮＳｅＮｉｉ）１８ＳｒＤＮＡ（登录号为Ａｂ０１３５６７）的同源性达９９％，２６ＳｒＤＮＡ（登录号为ＫＣ５３４８４２）与汉逊德巴利酵母（ＤｅｂＡｒｙｏｍｙＣｅＳ ｈＡＮＳｅＮｉｉ）２６ＳｒＤＮＡ（登录．．．
[期刊] 林业科学研究
[作者]
梁重钧 李麟坤 胡振华 张薇 许慧慧 王利兵
[目的 ]探究调控文冠果种子神经酸合成关键基因。[方法 ]本研究根据参考基因组联合转录组分析文冠果3-酮酯酰-CoA合酶（3-ketoacyl-CoA synthase,KCS）基因家族在不同发育时期种子中的表达模式；通过RT-PCR扩增文冠果XsKCS7基因并进行生物信息学分析；XsKCS7基因异源转化酿酒酵母鉴定基因功能。[结果 ]文冠果XsKCS7基因在不同发育时期种子中的表达量远高于其他KCS基因；克隆XsKCS7基因，生物信息学分析显示，XsKCS7基因的开放阅读框为1 512 bp，编码503个氨基酸，含有典型的KCS家族保守基序“GMGCSA”、“FGNTSSSS”以及“GSGFKCNSAVW”，与橡胶树KCS的亲缘性关系最近，为67.62%; XsKCS7异源转化酿酒酵母鉴定其具有调控芥酸和神经酸合成的功能。[结论 ]XsKCS7基因确为调控文冠果种子芥酸和神经酸合成的关键基因。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘宁 刘延琳
核糖体DNA在酵母分类鉴定中发挥着重要作用。本文介绍了核糖体的构成,核糖体RNA基因26S rDNAD1/D2区域、18S rDNA、ITS-5.8S rDNA和IGS rDNA片段作为分子标记的原理方法、在酵母菌种鉴定和分子系统发育中的应用,同时对rDNA各个序列片段在国内外酵母分类鉴定应用中的问题和前景进行探讨。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄鹭强 张丽萍 雷秀清 林志钦 郑宝东
以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模版,逆转录获得cDNA;以cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增,得到苹果酸通透酶(mae1)基因,将其与pMD-18T连接并测序.结果表明cDNA全长为1316 bp,编码438氨基酸,分子质量49ku,与已报道的mae1基因序列的同源性达到99%.mae1与整合型表达质粒pSH47连接后,用重组的表达质粒转化产朊假丝酵母,经PCR验证筛选阳性克隆子.通过对转化子的摇瓶筛选,发现重组子的降酸幅度均大于原始菌株,培养40 h降解了48.6%的L-苹果酸,降解率比原始菌株提高了9.8%.
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李燕妹 吕峰 许雅楠 汤陈鹏
采用酵母发酵结合酶法纯化石莼功能性低聚糖.以蛋白脱除率、低聚糖保留率和低聚糖含量为指标,探讨影响石莼功能性低聚糖脱蛋白、去除游离糖的主要因素,并采用U_(10)*(108)拟水平均匀试验设计优化其关键工艺参数.结果表明,酵母发酵结合酶法纯化石莼功能性低聚糖的最佳工艺条件组合为:酵母接种量7%、发酵时间4.0 h、酸性蛋白酶使用量250 U·g(-1)、酶解液pH 4.0、酶解温度45℃,同时结合150 r·min(-1)的摇床转速、30℃的发酵温度、2.5 h的酶解时间,所得纯化后的石莼功能性低聚糖样液中
关键词：
酵母发酵 酶法 纯化 石莼功能性低聚糖
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王丽敏 李军 胡小松
利用酵母粉葡萄糖琼脂培养基对 15个批次苹果原料样本中的酵母菌进行分离 ,并用API 2 0CAUX菌种鉴定系统进行鉴定 ,得到的 2 5株酵母菌分别属于假丝酵母菌属、酿酒酵母菌属和克勒克酵母菌属的 6个种 :克柔 /平常假丝酵母菌 (Candidakrusei) 13株 ,酿酒酵母菌 (Saccharomycescerevisiae) 5株 ,克勒克酵母菌属酵母菌 (Kloeck eraspp .) 2株 ,木蓝假丝酵母菌 (C .magnoliae) 2株 ,热带假丝酵母菌 (C .tropicalis)和乳酒假丝酵母菌 (C .kefyr)各 1株 ,鉴定准确率均超过 95 % ,其中模...
关键词：
苹果 酵母菌 API菌种鉴定系统
[期刊] 水产学报
[作者]
胡澄溪 刘伟 毕燕会 周志刚
三酰甘油（TAG）合成缺陷型酿酒酵母突变株H1246常用于其他生物二酰基甘油酰基转移酶（DGAT）的基因功能鉴定。为了解外源DGAT的基因表达对酵母细胞脂质及生长的影响，实验将缺刻缘绿藻1个I型和3个II型的DGAT分别转化H1246菌株，经筛选获得tDGAT1、tDGAT2A、tDGAT2B及tDGAT2C等4株转目的基因酵母。通过显微观察、分光光度法、重量法、棒状色谱分析、气相色谱-质谱分析对酿酒酵母的形态和脂滴、细胞密度、生物量、总脂、总脂肪酸以及TAG含量进行检测。稳定生长期时的显微观察结果显示，这4个外源基因均能使H1246菌株恢复TAG的合成和贮存能力进而在细胞中出现油滴；油脂分析结果表明，tDGAT1菌株的TAG及脂肪酸含量最高，且显著高于野生型Scy62及其他3株转目的基因菌株的水平；生长性能的数据显示，4个外源基因均能使H1246菌株的细胞密度达到Scy62的水平，这可能是由于TAG的合成消耗了游离脂肪酸，以减轻其对细胞产生的伤害而致；但tDGAT1菌株的生长迟滞期明显延长，以致其生长速率最低。本研究结果表明，将缺刻缘绿藻不同类型的外源DGAT转化酿酒酵母后，使后者的生长性能及脂质含量产生不同的变化。该结果为利用基因工程改造酵母菌株以生产人类所需要的目的油脂研究奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
邓云涛 方浩 史鹏
【目的】研究转录因子Prm1和Mit1在毕赤酵母表达外源蛋白中的作用,为提高毕赤酵母中的外源蛋白产量提供参考。【方法】以毕赤酵母GS115为出发菌构建8种菌株,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,过表达Prm1、Mit1或敲除Prm1、Mit1和Mxr1,以GFP的表达量为指标,分析其对毕赤酵母产外源蛋白的影响。在甲醇和甘油2种碳源下,利用实时定量PCR分析Prm1和Mit1在转录水平的表达情况,探究Prm1和Mit1的关系。【结果】成功构建了表达GFP的菌株、单因子过表达Prm1和Mit1的菌株及敲除Prm1、Mit1、Mxr1的菌株等8种菌株。利用P_(AOX1)诱导型过表达Prm1,毕赤酵母细胞内的GFP表达量极显著提高(P<0.01),较对照分别提高3.2和2.5倍;敲除Prm1后,GFP的表达量显著下降(P<0.05);敲除Mit1后,GFP几乎不能发出荧光。实时荧光定量PCR结果显示,在甲醇和甘油2种碳源下,敲除Prm1后Mit1少量表达,敲除Mit1后Prm1大量表达。【结论】利用P_(AOX1)诱导型过表达Prm1、Mit1和利用P_(GAP)组成型过表达Mit1,均能提高GFP在毕赤酵母细胞内的表达量。Prm1和Mit1可作为正调控因子在毕赤酵母产外源蛋白中发挥作用,且Prm1能激活Mit1,Mit1可反馈抑制Prm1。
关键词：
毕赤酵母 外源蛋白 转录因子 过表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴敏 谷守芹 李坡 王梅娟 张长志 范永山 韩建民 董金皋
【目的】分析玉米大斑病菌StSte12的结构、转录活性及功能。【方法】利用生物信息学方法,对获得的StSte12进行保守结构域和进化树分析,推测该基因的功能;利用β-半乳糖苷酶法检测StSte12的转录活性;将StSTE12转化至酿酒酵母ScSTE12基因缺失突变体ste12Δ中,筛选酿酒酵母ScSTE12的功能互补突变体并对其分析,验证玉米大斑病菌StSTE12的功能。【结果】通过蛋白比对发现StSte12具有转录因子特有的STE homeodomain和ZnF_C2H2锌指结构;同源性分析显示,该基因与其它植物病原真菌的STE12-like基因有较高的同源性;利用β-半乳糖苷酶法检测发现,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李荣荣 和祯泉 鲍恩东 陈溥言
【目的】研究鸡源重组抗菌肽Fowlicidin-3的生物学特性,并为重组抗菌肽在临床上的应用奠定基础。【方法】根据抗菌肽数据库中Fowlicidin-3的氨基酸序列,选用毕赤酵母的偏嗜密码子,设计抗菌肽的基因,通过SOE法合成得到全长为114bp的Fowlicidin-3基因。将Fowlicidin-3基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-F。将线性化重组表达载体pPICZα-A-F通过电击法转入毕赤酵母宿主菌X-33中,构建分泌型重组酵母表达菌株。【结果】获得分泌型重组酵母表达菌株,Fowlicidin-3多肽表达量达到170mg·L-1,对致病性大肠杆...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郭荣荣 林玲 周思泓 韩佳宇 张瑛 白先进
【目的】VlTFL1A是葡萄3个TFL基因之一,该基因在葡萄花序形成过程中发挥重要作用。筛选VlTFL1A启动子上游的调控因子,为研究该基因在调控葡萄成花中的机理奠定基础。【方法】由VlTFL1A的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建葡萄酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,筛选VlTFL1A启动子上游的调控因子。【结果】筛选出大于500 bp的9个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析,作用在VlTFL1A启动子上游的调控因子分别为:信号识别受体亚基、钙调蛋白相关蛋白、转酮醇酶、木葡聚糖糖基转移酶、F-box蛋白、冠毒素不敏感基因1(COI1)、UV-B诱导蛋白、重金属相关的异戊二烯蛋白39等8个蛋白和一个未知功能的蛋白。【结论】筛选出的作用在VlTFL1A启动子上游的9个调控因子在葡萄花序形成过程中的功能尚未见报道,为进一步研究VlTFL1A基因的表达调控机制提供了候选蛋白。
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