- 年份
- 2024(9309)
- 2023(13289)
- 2022(11625)
- 2021(10876)
- 2020(9178)
- 2019(21067)
- 2018(21181)
- 2017(40326)
- 2016(22519)
- 2015(25382)
- 2014(25550)
- 2013(24838)
- 2012(22690)
- 2011(20443)
- 2010(20387)
- 2009(18818)
- 2008(18326)
- 2007(16206)
- 2006(14129)
- 2005(12535)
- 学科
- 济(80739)
- 经济(80608)
- 管理(67745)
- 业(61166)
- 企(52308)
- 企业(52308)
- 方法(36434)
- 数学(30969)
- 数学方法(30593)
- 财(24059)
- 农(21778)
- 中国(21442)
- 学(20636)
- 制(20168)
- 业经(19119)
- 地方(15713)
- 理论(15481)
- 务(15379)
- 财务(15301)
- 财务管理(15270)
- 体(14730)
- 企业财务(14450)
- 贸(14283)
- 贸易(14277)
- 农业(13941)
- 银(13879)
- 易(13874)
- 和(13841)
- 银行(13825)
- 环境(13744)
- 机构
- 大学(315957)
- 学院(313855)
- 管理(121884)
- 济(117081)
- 经济(114266)
- 理学(105356)
- 研究(105258)
- 理学院(104107)
- 管理学(102222)
- 管理学院(101669)
- 中国(77234)
- 科学(67851)
- 京(67764)
- 财(57444)
- 农(54965)
- 所(53723)
- 业大(49954)
- 研究所(48999)
- 中心(47297)
- 江(46514)
- 财经(45327)
- 农业(43334)
- 北京(42500)
- 经(41048)
- 范(41033)
- 师范(40544)
- 院(38337)
- 州(37445)
- 技术(35226)
- 经济学(34459)
- 基金
- 项目(217423)
- 科学(169336)
- 研究(157471)
- 基金(156197)
- 家(136982)
- 国家(135853)
- 科学基金(115749)
- 社会(96544)
- 社会科(91284)
- 社会科学(91263)
- 省(86050)
- 基金项目(83309)
- 自然(76772)
- 自然科(74903)
- 自然科学(74877)
- 自然科学基金(73504)
- 教育(72590)
- 划(72462)
- 编号(64628)
- 资助(64051)
- 成果(53456)
- 重点(48660)
- 部(47263)
- 发(45373)
- 创(45307)
- 课题(45203)
- 创新(42307)
- 科研(41713)
- 制(41332)
- 大学(40304)
- 期刊
- 济(130117)
- 经济(130117)
- 研究(91497)
- 中国(62501)
- 学报(55825)
- 农(50528)
- 科学(48437)
- 管理(45371)
- 财(44870)
- 大学(41594)
- 学学(39247)
- 教育(37691)
- 农业(34772)
- 技术(26759)
- 融(26032)
- 金融(26032)
- 财经(22027)
- 业经(21397)
- 经济研究(19910)
- 经(18643)
- 业(17183)
- 问题(16623)
- 图书(16487)
- 版(16034)
- 科技(16008)
- 理论(15744)
- 业大(14957)
- 实践(14529)
- 践(14529)
- 技术经济(13779)
共检索到458854条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李华 刘晓晴 游玲
通过对预处理剂质量浓度、酶质量浓度、酶解时间、菌龄等影响因素的分析,以及渗透压稳定剂的筛选,对酒酒球菌SD-2a原生质体的制备条件进行了研究。结果表明,酒酒球菌SD-2a原生质体制备的最佳条件为:菌龄20 h,青霉素G钠质量浓度0.5μg/mL,酶质量浓度1mg/mL,酶解时间30 min,渗透压稳定剂采用SMM缓冲液,再生培养基采用添加0.7 mol/LKCl的ATB培养基,再生培养时采用双层培养基厌氧培养,可以保证较好的形成率和再生率。
关键词：
葡萄酒 酒酒球菌 原生质体 制备条件
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王莹 刘长江 张峰龙 贾茹珍 张晓霞
研究南阳酵母原生质体形成与再生的最佳条件。获取原生质体采用酶法,再生采用双层高渗平板法,因素重要性分析采用正交试验。结果表明:菌龄10h,以2.0%蜗牛酶加0.5%纤维素酶的混合酶液进行酶解破壁,酶解温度30℃,酶解时间2.5h,以0.6mol.L-1蔗糖做再生培养基的渗透压稳定剂,原生质体形成率91.40%,再生率10.56%。不进行预处理,在试验条件下,对南阳酵母原生质体形成与再生影响因素依次为:菌龄>酶解时间>酶浓度>渗稳剂。
关键词：
南阳酵母 原生质体 制备 再生条件
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李淼 曾柏全 冯金儒
研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5,培养液中加入浓度0.5%甘氨酸和含量10%的蔗糖处理后,在质量浓度均为10 mg/mL的溶菌酶和蜗牛酶(1︰1)酶解作用下,35℃处理3 h,原生质体生成量达到最大值,为7.35×106cfu/mL;亲本菌株K3,用4 U/mL的青霉素处理,在1 mg/mL的溶菌酶作用下,35℃处理1 h,原生质体形成率与再生率的乘积达到最大值,此时K3原生...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨迎青 李明海 杨媚 李勇 周而勋
为获得进行水稻纹枯病菌遗传转化所需的高质量原生质体,选用该病菌强致病力菌株GD-118,分别从酶种类、菌龄、酶解时间、酶解温度、酶液pH值和渗透压稳定剂及其浓度6个方面优化了原生质体的制备条件,从酶解时间和渗透压稳定剂及其浓度2个方面优化了原生质体的再生条件。结果表明:优化后的水稻纹枯病菌原生质体制备的最佳条件组合是"纤维素酶+溶菌酶+崩溃酶"组合酶、总酶终质量浓度10mg/mL、菌丝菌龄15h、酶解时间3h、酶解温度35℃、酶液pH5.6、以0.6mol/LMgSO4.7H2O为渗透压稳定剂,此最佳条件组合所制备的原生质体产率高达4.00×107/g;原生质体最佳的再生条件是酶解3h的原生质...
关键词：
水稻纹枯病菌 原生质体 制备 再生
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
叶小真 郭文硕 冯丽贞 金亚杰 杨新新 刘宏毅 连鑫坤 李慧敏
以桉树焦枯病强致病菌株ＣａｌｏｎｅＣｔｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｒｅｔｅａｕｄｉｉ Ｙａ５１为材料，对其原生质体生成条件进行优化．结果表明，收集１ ｇ（湿重）培养２４ ｈ的菌丝，以０．８ ｍｏｌ·ｌ～（－１）ｎａ Ｃｌ为渗透压稳定剂，置于１０ ｍ ｌ含２０ ｍｇ·ｍ ｌ～（－１）崩溃酶和３０ ｍｇ·ｍ ｌ～（－１）裂解酶的混合酶液中，在３０℃、１００ ｒ·ｍｉｎ～（－１）条件下裂解４ ｈ，原生质体生成量可达３．７２×１０７个·ｍ ｌ～（－１），在ｓｒ培养基上的再生率为３２．３３％．
关键词：
桉树焦枯病菌 原生质体 生成量 条件优化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王媛媛 段玉玺 陈立杰 朱晓峰
研究了青霉素、甘氨酸、溶菌酶浓度、酶解温度、菌龄、再生培养基对生防芽孢杆菌Snb2原生质体的形成与再生的影响。培养液中青霉素和甘氨酸的终含量分别为0.3%和1.0%时,菌株Snb2的生长量最佳;菌株原生质体形成的最佳条件是,溶菌酶浓度为2.0mg·mL-1,酶解温度为35℃,生产原生质体的最佳菌龄为对数生长中期;在最佳再生培养基HCNB培养基上,原生质体再生率为66.0%。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘士旺 梁宗琦 刘爱英
研究了影响羊肚菌（Ｍｏｒｃｈｅｌａ．ｓｐ）９５０６原生质体制备和再生的几个因素。实验结果得出，２０ｈ菌龄，纤维素酶（最终浓度４ｍｏｌ／ｍｌ）、溶壁酶（最终浓度５ｍｏｌ／ｍｌ）、蜗牛酶（最终浓度４ｍｏｌ／ｍｌ）的混合酶解系统，３０℃酶解温度，３．５ｈ酶解时间，ＫＣｌ（最终浓度０．６ｍｏｌ／Ｌ）作稳定剂，磷酸缓冲液（ｐＨ６．９８）为缓冲系统是最佳的原生质体制备条件，产量可达２．５×１０４个／ｍｇ。原生质体再生受培养基组成、酶解时间等因素的影响，在加入ＫＣｌ（最终浓度０．３ｍｏｌ／Ｌ）和环己六醇（最终浓度０．３ｍｏｌ／Ｌ）的ＰＤＡ培养基上，再生率为０．７２％。
关键词：
羊肚菌,原生质体,制备,再生
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李莹莹 苏静 杨世玲 张宇 李华
【目的】研究直投式酒酒球菌ＳＤ－２ａ发酵剂进行苹果酸－乳酸发酵（ＭＬＦ）对葡萄酒品质的影响，并与商业ＭＬＦ发酵剂ＶｉｎｉＦＬｏｒａｏｅｎｏＳ进行比较。【方法】将４℃保存的ＳＤ－２ａ和ＶｉｎｉＦＬｏｒａｏｅｎｏＳ发酵剂置于室温３０Ｍｉｎ后，均以１０Ｍｇ／Ｌ的接种量直接投入到赤霞珠干红葡萄酒中，于２０℃进行ＭＬＦ，发酵结束后立即加入６０Ｍｇ／Ｌ Ｓｏ２终止发酵，将发酵后的葡萄酒分别标记为ＭＬＦ－１和ＭＬＦ－２，以发酵前的赤霞珠干红葡萄酒为对照（ＣＫ），每处理重复３次。然后采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）和气质联用法（ｇＣ－ＭＳ）分别测定ＣＫ、ＭＬＦ－１及ＭＬＦ－２中的花色苷和挥发性成分，并进行感．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘限 高增贵 庄敬华 肖淑芹 陈捷
采用正交拉丁设计对影响木霉菌原生质体制备和再生的条件进行了系统研究。结果表明:木霉菌原生质体制备受到缓冲体系、渗透压稳定剂、木霉菌菌龄、细胞壁降解酶的种类、酶解时间和再生培养基的影响,而不受木霉菌株系的影响。其中以磷酸缓冲体系和蔗糖为渗透压调节剂的降解体系为最佳,木霉菌菌龄以培养20h较好,崩溃酶对木霉菌细胞壁的降解效果好,酶解时间以4h为最佳,再生培养基以基础培养基和NaCl为渗透压调节剂为最佳。
关键词：
木霉菌 原生质体 制备条件 再生率
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
魏颖颖 吴元华 张晓雯 赵秀香 高芬
针对嘧肽霉素的生物合成阻断突变株,研究了其最佳的菌体培养、原生质体制备和再生条件。采用改良的含15%蔗糖、0.5%甘氨酸的YEME液体培养基振荡培养36h,获得细腻丰富的菌丝体;对不同的酶浓度、酶解温度和酶解时间进行3因子4水平的正交试验,筛选最佳酶解条件为:溶菌酶浓度2mg·mL-1,28℃,作用90min,可获得最高的制备率为99%;再生培养基以R2YE为最佳,采取直接涂布方式,25.5℃培养可达48%的再生率。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
吴元华 董雪 安梦楠 苏燕妮 李晓冬
植物原生质体是除去细胞壁后仍具有活力的裸露单细胞,其在植物RNA病毒的复制机理研究方面具有广泛的应用。为了获得高产、高活力的烟草原生质体,以烟草(Nicotiana tabacum Linn.)品种K326为材料,对原生质体制备体系中的不同细胞壁酶解液成分、酶解时间、酶解渗透压稳定剂含量、离心时间以及离心转速等因素进行优化。结果表明:在含1%纤维素酶,0.5%离析酶,0.6mol·L-1甘露醇的酶解液中,26℃慢速震荡(40r·min-1)酶解4h,700r·min-1离心3min,得到产量及活力较高的原生质体,可直接用于植物病毒的接种试验;利用聚乙二醇(PEG)融合法向获得的高活力原生质体中...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马跃腾 杜双田 丁建 纪晓朋 鲍蕊 李珍
【目的】研究秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的最适条件,建立高效制备和再生原生质体的方法。【方法】以秦巴蛹虫草无性型菌株CM-16为材料,研究细胞壁裂解酶种类、酶解时间、酶解温度、菌丝体菌龄及稳渗剂种类对原生质体制备及再生效果的影响,并在单因素试验结果基础上进行正交优化试验。【结果】(1)以0.6mol/L NaCl为稳渗剂,用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄6d的菌丝酶解3h,原生质体的产量最高。(2)以0.6mol/L甘露醇为稳渗剂,用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄5d...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵文超 牛延宁 金明飞 黄静 高红亮 常忠义 方莹 鲁伟 步建国
【目的】探索制备高纯度茂源链霉菌原生质悬液的条件,为原生质体融合提供支持。【方法】在茂源链霉菌菌丝体一级培养不同时间(4,8,12,16,20,24,28,32,36,40,44,48h)后,称取菌丝体干质量,确定一级培养最佳时间;将一级培养的菌丝体转接培养二级菌丝体,在不同培养时间(13,14.5,16,17.5,19,20.5h)根据原生质体制备率、再生率的综合情况及菌丝体形态显微镜观察结果,确定二级菌丝体的培养时间及培养基中添加甘氨酸的最佳质量浓度(0,2,5,10,20g/L),根据原生质体制备率和再生率确定使用溶菌酶的质量浓度(2,5,8,10,20,50mg/mL)和酶解时间(1,...
关键词：
谷氨酰胺转胺酶 茂源链霉菌 原生质体
[期刊] 林业科学
[作者]
陈亮 孙庚午 王洪凯 吴树敬 林福呈 刘会香
葡萄座腔菌是木本植物溃疡类病害的重要病原,研究该病菌的侵染和致病过程有助于揭示病原与寄主的互作机制。携带gfp基因并高效表达的病菌可有效地实时检测和分析病菌的侵染过程,但由于该病菌在致病和室内培养过程中均不易产孢,因此,制备高质量的原生质体是进行gfp基因转化和表达的首要步骤。通过对酶的种类、酶解液浓度、菌丝年龄、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂6个可能影响原生质体制备效率的参数进行分析,结果表明:原生质体最大产量产生的条件是菌龄42 h,以1.5%崩溃酶、1.5%葡聚糖在0.7 mol·L-1NaCl的渗透压稳定剂中酶解3.5 h,最适酶解温度31℃,制备的原生质体在酵母蛋白胨蔗糖培养基(Y...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈孝仁 王源超 张正光 郑小波
为了建立聚乙二醇(PEG)介导的大豆疫霉菌的遗传转化系统,对大豆疫霉菌原生质体的制备条件及再生菌株的生物学性状进行了研究。结果表明:D riselase以及D riselase和Lysing酶的混合液均能有效地裂解菌株Pmg 2-3的细胞壁并获得原生质体;其中混合酶液的裂解效果优于D riselase单一酶液,当混合酶液中两个酶的浓度均为15 mg.mL-1时,在30℃消化3 h可产生4×106mL-1的原生质体。所制备的原生质体经细胞核染料4,6-d iam id ino-2-phenyl-indole(DAPI)染色后发现,大型均一的原生质体内含有细胞核;原生质体在再生培养基上再生率达1....
关键词：
大豆疫霉菌 原生质体 再生菌株 致病性
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
