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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
于东立 宋晓欧 鲍亚林 林思远 王建升 王秀娟 卢唯 赵弘巍
[目的]水稻葡糖酸氧化酶1(OsGLO1)定位于水稻过氧化物酶体(peroxisome),参与过氧化氢的产生,但其是否参与水稻对稻瘟病抗性的调控还未见报道。本研究的目的是为了考察OsGLO1在水稻对稻瘟病抗性中的作用。[方法]以水稻‘日本晴’和稻瘟病病菌互作体系为研究对象,使用定量蛋白质组学技术,比较和分析了亲和型和非亲和型稻瘟病菌菌株侵染引起的水稻蛋白质表达变化。[结果]研究发现水稻OsGLO1蛋白的表达受到亲和型稻瘟病菌侵染的特异性抑制,但是在非亲和反应中的表达量变化则不明显。水稻原生质体过表达和沉默
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李娇 圣聪 李涛 喻唅晞 李绚 赵弘巍
[目的]水稻乙醇酸氧化酶1（OsGLO1）是光呼吸中的关键酶，能调控植物免疫信号分子过氧化氢（H_(2)O_(2)）的产生。本研究旨在分析OsGLO1在稻瘟病抗性中的功能，揭示其调控机制。[方法]利用稻瘟病菌株Guy11分别侵染水稻野生型和OsGLO1基因过表达（OsGLO1-OE）以及沉默（cas9-glo1）的转基因水稻，观察抗病性表型，确定OsGLO1对抗病性的影响。使用稻瘟病菌GZ1（GFP标记）侵染水稻，比较菌丝扩增差异，明确OsGLO1抑制稻瘟病菌侵染后扩展的能力。分别通过定性和定量试验观察和分析H_(2)O_(2)的积累位点和积累量，研究OsGLO1在PTI途径中的作用；通过RT-PCR检测SA和JA信号通路相关防御基因的表达水平，探明OsGLO1对激素信号途径的影响。[结果]与野生型相比，受Guy11侵染的OsGLO1-OE水稻病斑更小，相对真菌生长量显著降低，附着胞以及侵染菌丝周围的活性氧积累增多，叶片中H_(2)O_(2)含量显著升高；而cas9-glo1在病斑面积和真菌生物量等方面明显高于野生型，被侵染叶片表面附着胞周围活性氧积累无显著变化，侵染菌丝周围的活性氧积累减少，叶片中H_(2)O_(2)含量显著降低。GZ1侵染48 h后，荧光显微观察显示，OsGLO1-OE水稻叶鞘中的稻瘟病菌侵染程度比野生型明显减弱，而cas9-glo1叶鞘中的稻瘟病菌侵染程度比野生型明显增强。OsGLO1过表达能显著提高SA信号途径的防卫基因如OsPR1a和OsEDS1的表达水平，但是对JA信号通路基因的表达没有明显影响。[结论]OsGLO1可以通过激活SA信号通路正向调控水稻对稻瘟病的抗病性。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
孙瑞萍 陈婷 王峰 晁哲 刘海隆 刘圈炜 黄丽丽 邢漫萍 郑心力 魏立民
为比较五指山猪和长白猪生长后期肌肉生长发育的差异,以6、8月龄五指山猪和长白猪为试验对象,采用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对其背最长肌总蛋白进行鉴定,结合生物信息学技术筛选品种间和品种内差异蛋白,并对其进行KEGG通路富集分析。结果表明:4组样品中共鉴定到1713个蛋白;五指山猪和长白猪品种间比较,6、8月龄猪中分别有460、337个差异的蛋白;品种内2个生长阶段比较,五指山猪和长白猪中分别有421、275个差异蛋白;2种比较均为上调的差异蛋白数多于下调差异蛋白数;KEGG通路分析发现,在五指山猪和长白猪品种间,6、8月龄在2个品种间的差异蛋白富集到差异显著(P<0.05)的条目分别为34、33个,在品种内,五指山猪和长白猪在2个生长阶段间的差异蛋白富集到差异显著(P
[期刊] 海洋渔业
[作者]
陈漪 胡瑞芹 冉皓宇 陈良标
斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育囊胚时期是胚胎发育过程的关键时期,利用i TRAQ蛋白质质谱分析技术,检测斑马鱼早期胚胎发育过程中囊胚sphere时期的蛋白质表达情况,并分析该时期表达的蛋白质的相应功能和参与调控的生物过程。以野生型斑马鱼发育至sphere时期即4 hpf的胚胎为样本,利用i TRAQ标记与LC-MS/MS串联质谱技术,结合数据库比对,对该时期表达的蛋白质进行定性和定量的鉴定分析。检测结果共鉴定到的总蛋白数为1 178个,利用生物信息学进行功能分析,发现这些蛋白广泛参与了细胞信号传递、细胞运动和细胞骨架构建、细胞增殖、细胞分化、物质合成与代谢等各项重要的生命活动过程。研究表明,利用i TRAQ标记的方法可以对4hpf时期的斑马鱼胚胎中的蛋白质进行有效的分离和鉴定,并初步建立了斑马鱼早期发育关键阶段sphere时期的蛋白质组表达图谱,以期为斑马鱼胚胎发育过程中蛋白质组学和调控机制的研究提供参考。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
孙瑞萍 陈婷 王峰 晁哲 刘海隆 刘圈炜 黄丽丽 邢漫萍 郑心力 魏立民
为比较五指山猪和长白猪生长后期肌肉生长发育的差异,以6、8月龄五指山猪和长白猪为试验对象,采用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对其背最长肌总蛋白进行鉴定,结合生物信息学技术筛选品种间和品种内差异蛋白,并对其进行KEGG通路富集分析。结果表明:4组样品中共鉴定到1713个蛋白;五指山猪和长白猪品种间比较,6、8月龄猪中分别有460、337个差异的蛋白;品种内2个生长阶段比较,五指山猪和长白猪中分别有421、275个差异蛋白;2种比较均为上调的差异蛋白数多于下调差异蛋白数;KEGG通路分析发现,在五指山猪和长白猪品种间,6、8月龄在2个品种间的差异蛋白富集到差异显著(P<0.05)的条目分别为34、33个,在品种内,五指山猪和长白猪在2个生长阶段间的差异蛋白富集到差异显著(P
[期刊] 西南农业学报
[作者]
齐中强 杜艳 潘夏艳 文友义 于俊杰 张荣胜 俞咪娜 曹慧娟 宋天巧 李连伟 刘永锋
【目的】稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）引起的稻瘟病是水稻生产上一种最具破坏性的真菌病害，严重威胁我国的水稻生产安全。研究转运蛋白MoMfs2编码基因MoMFS2（MGG＿01301）在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能，为开发新型杀菌剂提供参考。【方法】利用基因敲除策略将其进行缺失突变并对突变体进行了一系列的生物学表型分析。【结果】实验显示该突变体无论在自然培养基还是在合成培养基上，生长速率较野生型均没有变化，表明MoMFS2基因不参与稻瘟病菌对营养的吸收利用；另外，该突变体原生质体释放速度变慢，对细胞壁胁迫因子刚果红和SDS耐受性显著增强，表明该基因参与了对细胞壁胁迫的应答，进一步推测其在稻瘟病菌细胞壁完整性发挥重要作用。此外，该突变体不能在含有刚果红和ABTS平板上产生晕圈，同时其对胞外漆酶和过氧化物酶的分泌显著降低，表明MoMfs2参与了对胞外漆酶和过氧化物酶的分泌；另外该突变体对不同类型的杀菌剂（咪鲜胺、多菌灵、和嘧菌酯）敏感性显著增强，表明该突变体对杀菌剂的耐受性降低，推测MoMFS2基因参与了稻瘟病菌对杀菌剂的外排。通过水稻喷雾和大麦离体致病性测定发现该突变体对水稻和大麦的致病性较野生型没有变化，表明MoMFS2基因不参与稻瘟病菌的致病性。【结论】转运蛋白MoMfs2参与调控稻瘟病菌细胞壁完整性和对胞外漆酶和过氧化物酶的分泌及对杀菌剂的外排，不参与稻瘟病菌的致病性。
[期刊] 水产学报
[作者]
陶丽寒 胡丹丹 张嘉俊 陶会竹 李槿年
为探讨鱼类感染拟态弧菌后脾脏和肠黏膜组织蛋白差异变化,本研究以拟态弧菌04-14分离株人工感染实验动物草金鱼,利用双向电泳(2-DE)结合质谱技术对感染前后脾脏和肠黏膜组织的差异蛋白组学进行研究。结果显示,感染后脾脏和肠黏膜组织中分别有11个和12个显著差异表达蛋白点,经MALDI-TOF-MS质谱鉴定出19种显著差异表达蛋白,其中上调表达蛋白10种,下调表达蛋白9种,α-淀粉酶、载脂蛋白A-I、β-肌动蛋白和过氧化物还原酶2为两种组织中共同存在的显著差异表达蛋白。GO注释分析表明,显著差异表达蛋白分别定
[期刊] 中国农业科学
[作者]
葛少彬 刘敏 蔡昆争 蔡一霞 骆世明
【目的】稻瘟病是水稻生产主要的病害之一,每年造成严重的产量损失。研究表明,施用硅肥作为一种环境友好型病害防治措施,在增强植物抗病性中起重要作用,但其作用机理还不完全清楚。本文旨在探讨硅处理对水稻稻瘟病的抗性效应及生理作用机理,为稻瘟病的有效防治提供理论依据和实践指导。【方法】选用稻瘟病广谱感病品系CO39(不含已知抗稻瘟病基因)及其近等基因系C101LAC(Pi-1)(抗病品系)为试验材料,设置(1)不加硅不接种(Si-M-)、(2)加硅不接种(Si+M-)、(3)不加硅接种(Si-M+)和(4)加硅接种(Si+M+)等4个处理,通过光照培养箱控制生长条件,用Hoagland营养液进行水培试验...
关键词：
水稻 稻瘟病 硅 根系 酚类物质 乙烯
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李刚 袁彩勇 曹奎荣 孙祥良 李军 王健 程保山 罗伯祥 徐卫军 唐九友 储成才
采用苗期喷雾接种鉴定方法并结合10个主效抗性基因的特异性分子标记检测,分析544份水稻种质资源的稻瘟病抗性水平及其携带的抗性基因分布情况。结果表明:稻瘟病抗性水平达高抗、抗、中抗、中感、感及高感的材料分别为25、50、78、152、156和83份;10个分子标记对应的抗病基因在供试材料中均被检测到,含有2和3个抗性基因的材料分别为4和17份(占0.7%和3.1%),476份材料含有4~6个抗性基因(占87.5%),47份材料含有7个抗性基因(占8.6%);品种抗病反应与其抗病基因种类密切相关,Pi5、Pita、Pi9、Pib等4个基因对6个强致病鉴定小种抗性表现较好。隆粳968、秀水134、嘉58、津稻263、淮稻20号、盐稻10号、谷梅4号等品种含有多个主效抗病基因,连续多年达到高抗水平。利用分子标记辅助选择将不同来源的主效抗病基因聚合到同一品种中,是控制该病害最经济有效的途径。
关键词：
稻瘟病 抗性基因 分子标记 基因聚合
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王春源 熊力 杨红文 郭小江 张依裕 谭元成 杨酸
【目的】基于串联体量标记(TMT)定量蛋白组学技术探讨柯乐猪母猪乳腺发育的调控机制，为选育工作提供依据。【方法】选取乳腺发育正常和异常的柯乐猪母猪各3头，采集乳腺组织，利用TMT定量蛋白组学技术探究正常和异常乳腺组织的差异表达蛋白，筛选与乳腺发育相关的差异关键蛋白，并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。【结果】从柯乐猪乳腺组织中共筛选出474个差异表达蛋白，包括245个上调蛋白、229个下调蛋白；基因本体(GO)功能注释和富集分析显示，差异表达蛋白主要富集在上皮细胞分化、皮肤形成和肾小管上皮细胞分化等生物学过程中，主要分布在胞外区和细胞外空隙中，参与调节肽酶抑制剂活性和肽链内切酶活性；京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析显示，差异表达蛋白主要富集在补体系统、过氧化物酶体增殖物激活受体和金黄色葡萄球菌感染等信号通路上；结合差异表达蛋白互作网络分析，筛选出10个核心差异表达蛋白[上调蛋白有P14287(骨桥蛋白)、F1RXF9(角蛋白25)、I3LDS3(角蛋白10)、Q75QW1(上皮细胞黏附分子)、A0A5S8KLN1(丛生蛋白)、F1RW75(桥粒素),下调蛋白有A0A286ZT13(白蛋白)、P06867(血纤维蛋白溶酶原)、F1SCC9(含丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的蛋白)、P50447(α-1-抗胰蛋白酶)]。【结论】采用TMT定量蛋白组学技术能有效筛选出母猪正常和异常乳腺组织中的差异表达蛋白。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王加峰 刘浩 王慧 陈志强
【目的】利用酵母双杂交系统，以组成抗稻瘟病基因Ｐｉｋ－ｈ的２个紧密连锁且功能独立的Ｐｉｋｈ－１和Ｐｉｋｈ－２蛋白为诱饵，在水稻叶片中筛选与之互作的蛋白，以便深入研究抗病基因Ｐｉｋ－ｈ介导的抗病反应途径。【方法】以含抗稻瘟病基因Ｐｉｋ－ｈ的近等基因系ｉＲＢＬ８为材料，取稻瘟病菌（ＭａｇｎａＰｏＲｔｈｅ ｏＲｙｚａｅ）ｇＤ０１９３接种１２和２４ ｈ后的水稻叶片，等量混合后提取总Ｒｎａ，按照酵母双杂交试剂盒（Ｍａｋｅ ｙｏｕＲ ｏｗｎ＂Ｍａｔｅ＆ＰＬａｔｅ＂ＬｉＢＲａＲｙ ＳｙＳｔｅＭ）的要求构建水稻叶片靶标ｃ Ｄｎａ文库。利用快速重组克隆的方法构建Ｐ ｇＢｋｔ７－Ｐｉｋｈ１和Ｐ ｇＢｋｔ７－Ｐｉｋ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
李亚栋 何近刚
基因OsBRR1是LRR-RLKs基因家族中的一员,LRR-RLKs的成员大多参与调控植物的生长发育以及防卫反应。本研究分别对OsBRR1的转基因干涉株系和超表达株系进行了稻瘟病抗病鉴定。结果显示,转基因干涉株系比转空载体和野生型对照株系对具有中等毒性的稻瘟病菌株研54-04显示更强的感病性;而超表达株系对三种不同的强致病力菌株97-27-2、99-31-1与中10-8-14具有显著的抗性。结果表明,OsBRR1的表达与水稻对稻瘟病的抗性密切相关,参与调控水稻对稻瘟病的抗性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李文奇 王芳权 王军 范方军 朱金燕 杨杰 邵敏 仲维功
【目的】分析水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2在稻瘟病抗性中的作用,并解析其介导的水稻抗稻瘟病机制。【方法】根据高抗稻瘟病转hrf1水稻NJH12表达谱结果,筛选到一个表达量高达114.6倍的细胞色素P450基因Oscyp71Z2(NCBI登录号:Os07g0217600)。根据Oscyp71Z2全长编码区序列设计引物,以水稻模式粳稻品种日本晴的cDNA为模板,通过PCR扩增Oscyp71Z2全长编码区序列。将所得的cDNA序列经测序后,与双元表达载体pVec8连接,构建超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2。采用冻融法将构建的超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2质粒转入...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨铭宣 刘梦杰 王晋 虞德兵
[目的]本试验旨在研究日粮添加姜黄素对由热应激引起的蛋鸡肝脏抗氧化性能损伤的影响。[方法]以南京盘滁机械化养鸡场提供的180只280日龄海兰蛋鸡为研究对象，随机分成3组，对照组（Control）饲喂基础饲粮，环境温度为24±2℃；热应激组（HS）是基于对照组的基础上每天维持热应激6h以上，环境温度为34±2℃；姜黄素组（HS+CUR）是在热应激组的基础上，饲喂基础饲粮中添加150mg·kg~(-1)姜黄素的试验饲粮；每组4个重复，每个重复15只鸡。为了探究姜黄素对热应激蛋鸡肝脏的保护作用，采集蛋鸡肝脏组织样利用TMT蛋白质组学技术分析蛋鸡肝脏蛋白质差异表达。[结果]首先检测了蛋鸡肝脏的抗氧化功能，实时荧光定量PCR结果显示热应激组与对照组相比肝脏sod1和gpx1的表达极显著降低（P＜0.01)，cat表达显著降低（P＜0.05)；在添加姜黄素后可以极显著增加肝脏sod1和gpx1表达（P＜0.01)，显著增加cat表达（P＜0.05)。TMT (TandemMassTags)蛋白组学分析共检测到5039个蛋白，其中4235个具有定量信息，结果显示差异表达蛋白主要参与脂质和葡萄糖代谢，氧化应激，线粒体功能障碍和炎症反应等生物进程；主要参与的途径有PPAR信号通路，过氧化物酶体，脂质代谢，细胞色素P450，生物合成以及脂肪细胞因子信号通路等。进一步的，我们选取15个显著表达的差异蛋白进行在基因水平上的验证，结果表明基因水平和蛋白组学分析结果一致。[结论]本研究结果提示，补充姜黄素可以缓解蛋鸡由热应激引起的肝脏氧化应激以及与脂质代谢相关生物学过程。
关键词：
热应激 肝脏 氧化应激 脂质代谢
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