- 年份
- 2024(9302)
- 2023(13263)
- 2022(11553)
- 2021(10846)
- 2020(9101)
- 2019(20888)
- 2018(20932)
- 2017(39894)
- 2016(22160)
- 2015(25020)
- 2014(25227)
- 2013(24540)
- 2012(22380)
- 2011(20152)
- 2010(20067)
- 2009(18608)
- 2008(18020)
- 2007(15900)
- 2006(13874)
- 2005(12353)
- 学科
- 济(80182)
- 经济(80055)
- 管理(67433)
- 业(60303)
- 企(51711)
- 企业(51711)
- 方法(36011)
- 数学(30579)
- 数学方法(30220)
- 财(23628)
- 农(21758)
- 中国(21399)
- 学(20250)
- 制(20046)
- 业经(19030)
- 地方(15673)
- 理论(15278)
- 务(14983)
- 财务(14905)
- 财务管理(14874)
- 体(14838)
- 环境(14399)
- 企业财务(14099)
- 农业(13886)
- 和(13806)
- 银(13804)
- 银行(13748)
- 贸(13632)
- 贸易(13626)
- 技术(13337)
- 机构
- 大学(312243)
- 学院(310050)
- 管理(121194)
- 济(116647)
- 经济(113851)
- 理学(104843)
- 理学院(103638)
- 研究(103606)
- 管理学(101826)
- 管理学院(101272)
- 中国(76122)
- 京(67054)
- 科学(66196)
- 财(56970)
- 农(52996)
- 所(52524)
- 业大(48721)
- 研究所(47859)
- 中心(46576)
- 江(45976)
- 财经(45007)
- 北京(41941)
- 农业(41764)
- 经(40787)
- 范(40622)
- 师范(40158)
- 院(37891)
- 州(36822)
- 经济学(34417)
- 技术(34401)
- 基金
- 项目(215147)
- 科学(168173)
- 研究(156984)
- 基金(155036)
- 家(135465)
- 国家(134345)
- 科学基金(114862)
- 社会(96739)
- 社会科(91479)
- 社会科学(91457)
- 省(85058)
- 基金项目(82540)
- 自然(75606)
- 自然科(73799)
- 自然科学(73783)
- 自然科学基金(72424)
- 教育(72264)
- 划(71407)
- 编号(64431)
- 资助(63428)
- 成果(53300)
- 重点(48048)
- 部(46985)
- 课题(44943)
- 发(44940)
- 创(44866)
- 创新(41877)
- 制(41473)
- 科研(41259)
- 项目编号(40065)
- 期刊
- 济(129120)
- 经济(129120)
- 研究(90564)
- 中国(62004)
- 学报(53704)
- 农(48743)
- 科学(47118)
- 管理(45059)
- 财(44263)
- 大学(40225)
- 学学(37895)
- 教育(37479)
- 农业(33517)
- 技术(26499)
- 融(25546)
- 金融(25546)
- 财经(21825)
- 业经(21146)
- 经济研究(19648)
- 经(18490)
- 问题(16603)
- 业(16435)
- 图书(16403)
- 科技(15729)
- 版(15540)
- 理论(15466)
- 业大(14291)
- 实践(14264)
- 践(14264)
- 技术经济(13638)
共检索到452341条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张秋婷 苗向阳 安铁洙
【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入29310A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
许荣 张春林 宁静 李建 雷安民
【目的】构建小鼠pMX-H1foo逆转录病毒载体,并使其在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中异位表达,为进一步研究H1foo在重编程方面的作用奠定理论基础。【方法】根据NCBI公布的小鼠H1foo基因的mRNA序列设计引物,以小鼠卵巢组织总RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠H1foo CDS序列,并连接到逆转录病毒载体pMX上。经双酶切鉴定和测序比对正确后,利用磷酸钙转染包装细胞plat-E的方法制备H1foo病毒液并感染MEF细胞,进一步收集感染的细胞进行半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测,分析其在细胞中的表达情况。【结果】克隆得到915bp的H1foo基因,构建得到逆转录病毒载体pMX-H1...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
黎淑娟 邢晓为 薛立群 黄生强 袁洪 王维
为探明湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒携带情况及病毒亚型分布,应用gag,pol特异性引物,对31头湖南沙子岭猪耳部组织的DNA,RNA样品进行了PCR,RT-PCR检测,依据env基因表型env-A,env-B,env-C,鉴定了每头猪携带PERV亚型.结果表明,在所检31头个体中,93.5%的个体基因组中同时有PERV的A,B 2种亚型(记为env-AB),另外6.5%的个体基因组中则同时有PERV的A,B,C 3种亚型(记为env-ABC),所有个体的耳样组织中均未检测到单独存在的PERV的A,B或C亚型.说明湖南沙子岭猪中存在PERV序列,且能以mRNA的形式表达,病毒亚型以env-AB为...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
沙珍霞 陈松林 刘洋 徐美瑜 叶寒青
以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。
关键词：
显微注射 细胞移植 转基因 鱼类
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李建许 陈杰 蔡亚飞 刘健 徐世永 刘红林
试验Ⅰ:以狼山鸡为供体,AA肉鸡为受体,通过赤道开窗法制作了狼山鸡-AA肉鸡的嵌合体。共操作了108枚鸡蛋,孵化成活19只,孵化成活率17.6%。获得表型嵌合体鸡胚22枚,其中15只孵化成活,嵌合体率为13.9%。对2只嵌合体公鸡解剖发现,有1只的睾丸发育异常。PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,2只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞。结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因鸡是可行的。试验Ⅱ:利用脂质体介导法,在体外将外源pEGFP质粒转入到鸡X期胚胎细胞中,培养8 h开始有外源基因的表达,体外培养12 h后获得了21.43%的转染效率。将转染后的鸡胚盘细胞移入到受体AA肉鸡的胚...
关键词：
胚盘细胞 嵌合体 转基因 狼山鸡
[期刊] 林业科学
[作者]
李明银
Cytochimeras are important materials used to study the behaviors of the cells with different ploidies in a tissue. The epidermal cell size and pollen size are commonly used to indirect detective the cell ploidy levels in L1 and L2 layers, because ploidy is one of the parameters that influence cell s...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
任充华 张婷婷 杨涵江 王昕 陈知龙 张智英
【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吕英军 倪嘉宁 鲍恩东
为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验。结果显示:125和250μg.mL-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍TC ID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg.mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数。聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg.kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率。但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
尚月丽 乔丽平 韩涛 夏继飞 杨德吉
应用微卫星技术对感染马立克氏病毒5 d后的32个鸡胚成纤维细胞(CEF)4号染色体上的20个微卫星标记进行PCR扩增,扩增产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染检测。试验结果显示:20个微卫星标记有18个表现出不同程度的微卫星不稳定性,其中ABR0622发生率最高,为37.50%;MCW 0174、ADL0266和ABR0382的发生率较高,均为31.25%。在32组样品中有30个检测到微卫星不稳定性,其中11号样品发生率最高,为45.00%,其次是3号样品为35.00%。结论:CEF感染马立克氏病毒后出现微卫星不稳定性现象。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘荭 高隆英 史秀杰 江育林
A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm in body size) without clinical signs. With primers 77012R and 77353F, a fragment o...
[期刊] 林业科学
[作者]
宋金耀 何文林 李松波 刘永军 孙艳军
对自宁晋县获得的毛白杨嵌合体扦插生根过程的动态跟踪分析表明 ,嵌合体过氧化物酶活性在扦插初期呈上升趋势 ,第 5d升至高峰 ,之后下降 ,第 7d至低谷 ,第 17d又出现一高峰 ,而毛白杨没有此规律 ,并且前期与此恰好相反 ;酚类、黄酮类物质与过氧化物酶活性变化相似 ,也有两个高峰 ,毛白杨中变化与嵌合体相反 ,且含量高于嵌合体 ;吲哚乙酸氧化酶活性变化规律与过氧化物酶刚好相反。试验证明嵌合体易生根与过氧化物酶活性、吲哚乙酸氧化酶活性及酚类、黄酮类含量密切相关 ,是协同作用的综合结果 ,而毛白杨不易生根也恰是不能满足这些要求
关键词：
毛白杨 嵌合体 生根机制
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈明勇 高齐瑜 郭建华 王彩虹
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张金凤 曾令兵 张辉 周勇 肖艺 苏岚 高正勇
根据草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)衣壳蛋白VP6编码基因的序列设计特异性引物,以病毒全基因组RNA为模板,通过对反应条件进行优化,建立了GCRV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。检测结果表明,本方法可在63℃下1 h内实现靶片段的大量扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯型条带,反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果。该检测体系针对草鱼呼肠孤病毒的检测灵敏度高,其最低检测限为33 pg,与常规RT-PCR方法相比较,灵敏度高10倍,且与斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵丹 邱冬 韩德敏 刘永杰
[目的]为减少鼠源单克隆抗体的异源性在犬临床治疗中引起的宿主免疫排斥反应,针对H_3N_2亚型犬流感病毒(CIV),制备具有犬源抗体恒定区基因(Fc)的鼠/犬嵌合抗体。[方法]从产生具有良好中和活性CIV单抗的鼠源杂交瘤细胞株中扩增抗体重链和轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得单链抗体基因(scFv)片段,同时从犬外周血单核细胞中扩增得到犬源抗体Fc片段;分别构建单链抗体与嵌合抗体表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化后调整蛋白浓度为1 mg·mL~(-1),检测单链抗体与嵌合抗体的ELISA和血凝抑制(HI)效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。[结果]获得的H_3N_2亚型CIV鼠源scFv的相对分子质量为45×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶640(1.56μg·mL~(-1))和1∶160(6.25μg·mL~(-1)),中和效价为1∶160(6.25μg·mL~(-1));鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的相对分子质量为80×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶2 560(0.39μg·mL~(-1))和1∶640(1.56μg·mL~(-1)),中和效价为1∶40(25μg·mL~(-1))。[结论]成功制备了H_3N_2亚型CIV鼠/犬嵌合抗体,为犬流感的临床治疗提供了物质基础。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
