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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
谢进 田晓明 刘淑欣 侯佳音 盖颖 蒋湘宁
本实验以毛白杨芽为实验材料,采用Tris-酚法、三氯乙酸-丙酮法和三氯乙酸-丙酮+Tris-酚法对其蛋白质提取方法进行比较,采用双向电泳分离蛋白质,通过PDQuest软件和质谱对这3种提取方法得到的双向电泳胶进行分析。结果显示,三氯乙酸-丙酮法得到的蛋白点数量为231±4,得到的鲜样中的总蛋白质含量为(3.57±0.618)mg/g,均高于其他两种提取方法,并且所得到的双向电泳胶更清晰,为毛白杨芽蛋白质提取的最适方法。
关键词：
毛白杨芽 蛋白质提取 双向电泳 质谱
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
舒灿伟 陈健仪 赵美 王陈骄子 周而勋
为开展水稻纹枯病菌蛋白质组学的研究,采用TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法对水稻纹枯病菌蛋白质提取质量进行比较,并建立了双向电泳体系。对电泳后的图谱用Quantity One软件进行分析,结果发现:TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法所获得的蛋白质双向电泳图谱中,分别记录得到557、309和877个蛋白质点。SDS法提取的蛋白质样品杂质较多,存在盐离子和小分子物质干扰,得到的蛋白点较少;TCA-丙酮法提取的蛋白质样品呈黄色,有色素残留;而在TCA-丙酮法的
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈香玲 任惠 黄章保 苏伟强 刘业强 李果果 刘要鑫 王小媚
为建立一套适用于鉴别＂四季芒＂成花蛋白表达差异的双向电泳方法，摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以＂四季芒＂芒果叶片为材料，采用ＴＣＡ－丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等３种芒果叶片蛋白提取方法，进行ＳＤＳＰＡＧＥ和双向电泳，比较这些方法的提取效果。结果表明，改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高ＴＣＡ－丙酮法蛋白提取质量。提取液Ｐ Ｈ能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、２－ＤＥ凝胶蛋白点数量和分布。Ｐ Ｈ ８．５提取液所提蛋白获得最多的２－ＤＥ蛋白点，但在小分子区域蛋白分辨率比Ｐ Ｈ９．０提取液所提蛋白低．．．
关键词：
芒果 蛋白提取 双向电泳 蛋白质组
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
范吉星 邓用川 黄惜 林栖凤 罗越华
分别采用TCA-丙酮沉淀法、酚法、尿素法、周涵韬法和笔者建立的酚改良法,提取红海榄根部总蛋白质,并进行了SDS-PAGE分析和双向电泳体系的优化.结果表明,酚改良法提取红海榄根部总蛋白质的纯度最高,质量最好,为建立双向电泳分析体系提供了较为理想的蛋白样品,获得了良好的双向电泳图谱.该结果为盐生植物,尤其是盐生木本植物,建立了一套可靠的蛋白提取和双向电泳方法.
关键词：
红海榄 蛋白质 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
王曼 刘连涛 孙红春 张永江 宋世佳 陈静 成国鹏 李存东
对棉花根系蛋白的双向电泳提取技术进行改良，以获得更好的分离效果，为棉花根系蛋白质组学研究奠定基础。以鲁棉研２８为材料，分别采用ＴＣＡ／丙酮法、改良ＴＣＡ／丙酮／ＳＤＳ法、饱和酚－甲醇醋酸铵法这３种根系蛋白质提取方法，提取棉花幼苗根系总蛋白，并进行双向电泳进行蛋白质分离。在蛋白质含量、蛋白纯度和电泳图谱等方面对３种方法进行比较。利用饱和酚－甲醇醋酸铵提取法提取的棉花根系蛋白，其蛋白样品纯度高，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱清晰，蛋白点数量最多为６０１个点；ＴＣＡ／丙酮法提取得到的蛋白总量最高约为７．５３ ｍＧ／Ｇ，但样品纯度低，ＳＤＳＰＡＧＥ电泳图谱模糊，蛋白点数量最少为４１７个点。采用考马斯亮蓝染色．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
余功明 胡春锦 魏源文 史国英 岑贞陆 覃丽萍 黎起秦 黄思良
为建立水稻纹枯病菌菌体蛋白的双向电泳技术,获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱。采用了酚抽提法、TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法进行水稻纹枯病菌菌体蛋白质的提取,利用17 cm、pH 5～8的IPG胶条对样品进行双向电泳,用PDQuest 8.0软件对电泳图谱进行分析,确定电泳的最佳参数。结果显示:采用17 cm、pH 5～8的IPG胶条能得到较好的双向电泳图谱;同一样品的三种不同蛋白提取方法(酚抽提法、TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法)分别得到1278、885、827个蛋白质点。酚抽提法能有效去除样品中的盐分和小分子的干扰,得到背景清晰的蛋白图谱;TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法所得图谱有一定的杂...
关键词：
水稻纹枯病菌 总蛋白 提取方法 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
邵媛媛 柳展基 王龙龙 毕玉平
以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王珊珊 郝宇涵 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。
关键词：
黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
范海延 陈捷 张春宇 郭海 林英
为建立适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法,对黄瓜叶片蛋白提取方法、裂解缓冲液、等电聚焦(IEF)参数进行研究。结果表明:丙酮法或三氯乙酸/丙酮法提取黄瓜蛋白质较好,2-DE图谱中蛋白点较多;裂解缓冲液为9.5mol·L-1尿素,2mol·L-1硫脲,1%二硫苏糖醇(DTT),2mmol·L-1三丁基磷(TBP),4%3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐(CHAPS),0.2%两性电解质,0.002%溴酚蓝,0.25%吐温20,10%异丙醇,5%甘油,10mmol.L-1苯甲基磺酰氟(PMSF)时,电泳图谱效果最好;IEF等电聚焦条件为25000Vh时,2-DE图谱蛋白点多且清晰。
关键词：
蛋白质组 双向电泳 黄瓜
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
庄维兵 高志红 章镇 侍婷 邵静
以果梅花芽为材料,比较了TCA/丙酮法和酚抽法2种总蛋白质提取方法对蛋白质双向电泳(2-DE)的影响,同时对IPG胶条种类、凝胶浓度、蛋白质上样量及染色方法等环节进行了优化。结果表明:TCA/丙酮法比酚抽法在2-DE凝胶图谱上的蛋白质点数增多,图谱背景也比较清晰,没有明显的纵横条纹;采用17 cm pH 4～7的胶条、10%的凝胶浓度、1.5～1.8 mg的蛋白质上样量,经改良胶条考马斯亮蓝G-250染色后可获得背景清晰、重复性好、蛋白质分辨率高的2-DE图谱。高质量的果梅花芽蛋白质提取方法和蛋白质双向电泳体系的优化可为果梅蛋白质组学研究奠定技术基础。
关键词：
果梅 花芽 蛋白提取 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李丽杰 苏宏 马怀宇 吕德国
为开展山定子(Malus baccata Borkh.)根系蛋白质组学研究,以当年生15片真叶的山定子实生苗白色幼嫩根系为试材,采用TCA-丙酮沉淀法、酚抽提法和Trizol抽提法3种方法提取其总蛋白质,并对样品上样量、IPG胶条的p H值范围和等电聚焦参数进行优化,建立适用于山定子根系的双向电泳技术体系。结果表明:采用Trizol抽提法提取的蛋白质产率最高,可达3.15mg·g-1FW,且其SDS-PAGE图谱明显优于其他两种方法 ;选用800μg的上样量,17 cm p H值4~7的IPG胶条和改进后的等电聚焦程序所得到的二维电泳图谱蛋白点最多,最清晰,分辨率最高。
关键词：
山定子 根系 蛋白质 提取 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
王鹏 王军节 李贞彪
为了优化一种适用于粉红单端孢菌双向电泳的蛋白质提取方法,以期为蛋白质组学水平研究粉红单端孢菌的致病机制奠定基础。以分离纯化后的粉红单端孢菌为试验材料,分别采用超声-TCA-丙酮、超声-磷酸-TCA-丙酮、超声-SDS、超声-TCA/丙酮-酚/SDS联合抽提和TCA/丙酮-酚/SDS联合抽提等5种方法提取菌体蛋白质,通过对比分析蛋白质含量以及纯度筛选出2种较好的提取方法。在筛选聚丙烯酰胺电泳凝胶浓度的基础上,再通过双向电泳对比分析,得出最佳的蛋白质提取方法。结果表明,12%的聚丙烯酰胺凝胶浓度获得的单向电泳图谱背景清晰且无严重的拖尾现象,超声-TCA/丙酮-酚/SDS联合抽提法获得蛋白样品的质量浓度和含量分别为6.650 mg/mL和2.993 mg/g,该法提取蛋白通过SDS-PAGE分析条带清晰,双向电泳分析可获得1 238个独立清晰的蛋白点。由此可知,超声-TCA/丙酮-酚/SDS联合抽提法获得的粉红单端孢菌体蛋白适合于双向电泳分析及蛋白质组学研究。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苏源 余萍 孔垂思 蔡翌阳 杨静 刘林 李成云
利用改进的三氯乙酸/丙酮法对5叶期玉米根、茎、叶的总蛋白质进行双向电泳获得了高分辨率的电泳图谱。在等电点4～7范围内,根、茎、叶电泳图谱上的蛋白质点数分别为1100±89、1275±72和1327±98个。3个器官蛋白质点的分布在分子量25～75 kD和等电点5～6的范围内相对集中。通过优化样品的清洗程序结合对蛋白质在丙酮水化液中的2次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于玉米幼苗的根、茎、叶总蛋白质双向电泳的试验研究。
关键词：
玉米 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田邁 莫海波 常亚青 湛篧篧 陈百尧 伏光辉 安建
以刺参肠组织为材料,通过蛋白质提取方法、上样前处理方法、上样量以及聚焦条件的优化,建立了刺参肠组织蛋白质双向电泳技术体系。试验结果表明,采用TCA-丙酮沉淀法制备刺参肠组织蛋白质,能够得到高纯度的蛋白质提取液。刺参样品上样前不经过处理,等电聚焦电压1 000V,电流7mA,聚焦时间3h,平衡时间30min,最佳上样量25μg,pH 4~6.5、8.5cm的IPG胶条,银染能获得较好的双向电泳图谱。通过蛋白质双向电泳体系的优化,获得了刺参肠组织的蛋白质表达图谱,为进一步研究刺参差异表达蛋白的筛选及蛋白质组学研究提供技术保障。
关键词：
刺参 肠组织 蛋白质双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
张曼 羊杏平 徐锦华 刘广 姚协丰 李苹芳
为建立高效、稳定的西瓜根系蛋白质双向电泳技术体系，对西瓜根系蛋白质样品等电聚焦（ＩＥＦ）条件、样品上样量、ＩＰＧ胶条Ｐ Ｈ值范围、染色方法等参数进行优化。结果表明，采用ＴＣＡ／丙酮法提取西瓜根系总蛋白，裂解液组成为７ ｍｏｌ／ｌ ＵｒＥＡ、２ ｍｏｌ／ｌ ＴＨｏＵＩｒＥＡ、４％ＣＨＡＰＳ（ｍ／Ｖ）、１％ＣｏＣｋＴＡＩｌ（Ｖ／Ｖ）、６５ ｍｍｏｌ／ｌ ＤＴＴ、２％Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ ＢＵＦＦＥｒ，上样量为８００μＧ，Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ（１３ Ｃｍ）胶条、ＩＥＦ条件为４８ ０００ ＶＨ，分离胶浓度为１２．５％，ＣＢＢ－ｒ２５０染色时，可获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，该技术条件为适合．．．
关键词：
西瓜根系 蛋白质组 双向电泳
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