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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
石迎 陶洁 李本强 程靖华 刘惠莉
为分析适应肠道细胞的猪德尔塔冠状病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）对仔猪的致病性，本研究首先用ST细胞分离培养的PDCoV感染IPEC-J2细胞进行适应性试验，通过间接免疫荧光试验（IFA）检测PDCoV抗原，然后绘制病毒生长曲线，最后分析适应IPEC-J2细胞的PDCoV对仔猪的致病性。结果表明：1）经ST细胞分离培养的PDCoV可以感染IPEC-J2细胞并出现CPE，可在细胞内检测到PDCoV抗原，PDCoV在感染IPEC-J2细胞后48 h达到增殖高峰。2）适应IPEC-J2的PDCoV对仔猪具有肠致病性，仔猪出现明显腹泻症状，甚至出现死亡；剖检可见明显的肠道病变，病理组织学显示肠上皮细胞及肠绒毛病变，并通过免疫组化对抗原进行定位，发现PDCoV广泛分布于肠道上皮细胞。3）肠道免疫细胞因子分析发现PDCoV感染仔猪后肠道I型干扰素表达上调，同时激活体内Th1和Th2型肠道细胞免疫反应，诱导感染仔猪产生免疫细胞因子发挥抗病毒作用。综上，经ST细胞分离培养的PDCoV对IPEC-J2细胞具有较强的适应性，并对仔猪产生较强的致病性。本研究为PDCoV致病机制及抗病毒免疫进一步研究奠定基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈梦茹 王悦 冯华朋 全滟平 陈健 舒建洪 何玉龙
目前发现的猪肠道冠状病毒主要有猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪三角冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)4种。其中SADS-CoV是2017年首次在我国广东省发现的一种猪肠道冠状病毒,该病毒感染后可致小于5日龄仔猪出现严重急性腹泻、急性呕吐、脱水等症状,死亡率较高,给养猪业造成巨大的经济损失。目前还未见针对SADS-CoV的有效药物和疫苗产品上市,从病毒传播、致病机制、诊断及预防控制等方面综述SADS-CoV的研究进展,期望为SADS-CoV的防控提供参考。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
徐引弟 宋念华 胡智斌 马力 张厚芝 李德学
从湖北某猪场发生典型黄痢的新生仔猪无菌采集粪便 ,上清接种小白鼠 ,取粪便和死亡小白鼠的心血接种麦康凯琼脂培养基 ,挑红色菌落 ,革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌。用法国BioMerieuxATB全自动细菌鉴定及药敏仪ID 32E肠杆菌鉴定条鉴定 ,得到大肠埃希菌的极好鉴定结果。不同剂量接种小白鼠 ,证明其毒力。用 16 3种O抗原标准血清玻板凝集试验定型为O1 0 1 型。用ATBVET药敏试条进行药敏试验结果显示对 7种抗生素敏感。
关键词：
新生仔猪 大肠埃希菌 分离 鉴定
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
武小椿 王波 刘阳坤 杨增岐 张淑霞 党如意 张鹏 赵伟 张冲 韩青松
【目的】研究野猪源Shaanxi-2及家猪源Shaanxi-1猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株对易感仔猪的致病性及发病规律,进一步弄清PRRSV变异株的病原特征及其与"猪高热病"发生的关系。【方法】选取PRRSV和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原、抗体检测均为阴性的健康仔猪(40日龄)9头,随机分为3组,用家猪源Shaanxi-1及野猪源Shaanxi-2 PRRSV变异株分别感染其中一组仔猪,每头肌注6 mL,滴鼻2 mL;另一组作为阴性对照,按相同剂量和方法接种正常Marc-145细胞处理液。攻毒后各组分圈饲养,每天定时测量体温,绘制体温变化曲线,观察临床症状,记录发病情况。攻毒后...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
方谱县 刘康 张蕙畅 夏思进 张健淞 任杰 肖少波 方六荣
通过RT-PCR对采集自河北省2个猪场的5份腹泻仔猪小肠内容物进行检测,结果均为猪δ冠状病毒(PDCoV)阳性。将病料处理后接种LLC-PK1细胞,从2个猪场的病料中各成功分离到1株PDCoV,分别命名为PDCoV CHN-HeB-A1株和CHN-HeB-B2株。通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot和电镜观察对分离的病毒进一步鉴定,IFA和Western blot结果证实2株病毒都能与PDCoV M蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,电镜下可观察到直径100～150 nm、呈典型皇冠状的病毒粒子,证实所分离的病毒为PDCoV。全基因组测序以及遗传进化分析结果表明,2株PDCoV与中国大陆毒株相似性较高,为98.7%～99.1%,与中国香港毒株处于同一簇。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王小敏 李燕华 蔺涛 刘闰夏 何孔旺 童光志 袁世山
旨为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)野毒株持续性感染细胞模型。通过将HP-PRRSV野毒株JX143感染Marc-145细胞,感染的细胞经连续传代35代,建立了稳定的PRRSV持续感染的细胞模型,获得了JX143-Marc-145-P35细胞株。应用RT-PCR、免疫荧光、空斑形态分析等技术跟踪观察了JX143-Marc145细胞株连续传代过程中病毒在细胞内的存在和生物学特性的变化。为了进一步分析病毒持续性感染过程中基因的特征性变化,通过RT-PCR扩增出JX143-Marc145-P35的全基因,并进行测序和序列分析。结果表明,在细胞模型建立的过程中,细胞病变(Cyto...
[期刊] 水产学报
[作者]
岳玉环 黎诚耀 杨盛华 卢强 陶增思 王文东 邹啸环 杨振国 王振英 殷震
实验选用４种鱼类传代细胞，对首次发现的鳗鲡“狂游病”的病原鳗鲡冠状病毒样病毒进行了细胞分离与培养。本研究在鲤上皮乳头状瘤细胞（ＥＰＣ）中复制了鳗鲡冠状病毒样病毒粒子，并经病毒细胞培养物的电镜负染和超薄切片法检查得到了证实。
关键词：
欧洲鳗鲡,冠状病毒样病毒,细胞培养
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗钧秋 杜建 王岚 毛湘冰 何军 余冰 陈代文
猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染仔猪能够引起仔猪肠道损伤,导致仔猪腹泻脱水甚至死亡,其致病机制主要在于破坏猪小肠黏膜,引起肠道黏膜上皮屏障功能受损,具体主要表现为:TGEV破坏仔猪肠道上皮机械屏障完整和电解质平衡,扰乱生物菌群结构,降低局部免疫功能。TGEV诱导炎症及先天免疫反应的作用机制主要通过激活维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLR)和Toll样受体(TLR),使核转录因子(NF-κB)活化,进一步诱导细胞因子和干扰素表达。通过饲粮中添加氨基酸、维生素和中草药等营养调控措施可以达到缓解TGEV损伤肠道屏障功能的目的,为预防及治疗TGEV感染对仔猪肠道屏障功能的影响提供参考。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
方剑玉 郑其升 郭小参 侯凤香 王琳 陶红梅 侯继波 陈溥言
采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)临床分离株的M基因(525 bp),通过设计4对引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分别扩增相应基因M1、K1、K2、K3和K4,连接pET-32a(+)表达载体,经鉴定后转化Escherichia coliBL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果显示,分别在相对分子质量30.8×103和24.4×103位置出现目的条带,重组蛋白均可与阳性血清发生特异反应。将蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2周后从小鼠脾脏...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周伦江 王隆柏 方勤美 吴学敏 车勇良 陈如敬 魏宏 庄向生
【目的】研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染MARC-145细胞生长相关蛋白表达量的变化,明确差异蛋白的功能信息,为深入研究PRRSV病毒复制和致病机理奠定基础。【方法】采用差异蛋白质组学和Western blotting技术,通过建立双向凝胶电泳,对高致病性PRRSV感染MARC-145细胞后表达量差异蛋白质进行了胶内酶解、质谱分析鉴定及数据库检索,明确差异蛋白质的相关信息。【结果】得到7个表达稳定、重复性好的蛋白点,其中有5个蛋白点找到匹配蛋白,分别为热休克蛋白70、硫氧还蛋白、S100钙结合蛋白A6、3-磷酸甘油脱氢酶和内参肌动蛋白,其余2个蛋白点为未知蛋白。在MARC-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张帆帆 宋德平 周信荣 黄冬艳 李安琪 彭棋 陈燕君 吴琼 何后军 唐玉新
【目的】猪Ｄｅｌｔａ冠状病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｄｅｌｔａｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，ＰＤｃｏｖ）是近年来新发现的可引起猪只，特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒，其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率，是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现ＰＤｃｏｖ ｒｔ－Ｐｃｒ检测方法，并调查当前江西腹泻猪群中ＰＤｃｏｖ的感染情况。【方法】通过对Ｇｅｎ Ｂａｎｋ数据库中ＰＤｃｏｖ全基因组序列的比对分析，找出保守序列，用Ｐｒｉｍｅｒ ３．０在线软件设计１对扩增ＰＤｃｏｖ核衣壳（ｎ）蛋白基因片段的特异性引物，基于该引物建立ＰＤｃｏｖ ｒｔ－Ｐｃｒ检测方法；用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品，挑选阳性扩增产物进行克．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
严玉宝 陆承平 徐为燕 杜念兴
牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)是已知新生犊牛腹泻的主要病原之一,同时也感染成年牛、猪、马及多种家畜和人,感染相当普遍。为了深入了解 BCV 的生物学特性,国外学者对其病毒结构多肽进行了研究,而国内迄今尚未见此类报道。本实验则对 BCV MUC-270株进行了结构多肽分析,建立了非放射性标记 BCV 多肽的研究方法,为今后进一步研究打下基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
魏燕鸣 龚文孝 杨影 马季 邹忠 金梅林
为建立禽腺病毒4型的禽源细胞感染模型,并考察细胞培养毒株对动物的致病性,将实验室2014-2017年间分离的5株血清4型禽腺病毒接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH)并盲传,选取各病毒的LMH细胞培养物,按一定剂量经腿部肌肉注射接种4周龄SPF鸡;记录试验动物的发病情况,剖检采集发病或死亡鸡的脏器并制作病理切片,观察并分析病毒细胞培养物感染SPF鸡的组织病理变化。结果发现:5株血清4型禽腺病毒在LMH细胞上盲传至第4代时开始出现I群禽腺病毒所致的特异性细胞病变,提取培养物中病毒核酸并进行PCR鉴定,均能扩增出大小约564bp的特异性扩增片段,表明病毒能在LMH细胞上稳定增殖。选取各病毒第10代细胞培养物进行SPF鸡回归试验,发现细胞培养上清接种4周龄SPF鸡后第3天开始,有部分鸡开始精神沉郁,食欲消退、卧地不起瘫痪并迅速死亡,病理剖检及病理组织切片结果显示HB-1、HB-2、HB-3和SD-1毒株保持对4周龄SPF鸡的致病性,病死鸡中能观察到典型的组织病理学变化,而对照组不出现任何临床症状及病理变化。以上结果表明,LMH细胞可用于禽腺病毒增殖传代,是开展禽腺病毒分子致病机制研究的理想细胞模型。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
程文金 邓慧颖 谢荔岩 林奇英 吴祖建 谢联辉
以云南灰飞虱(Laodelphaxstriatellus)为介体昆虫,以4个水稻品种为寄主,通过人工接种对采自云南、江苏、河南、山东、安徽等省的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)23个分离物进行传毒试验.致病性评价结果表明,23个分离物可划分为5个等级,即强致病型、次强致病型、中致病型、弱致病型、极弱致病型.致病性分化表现在地理差异、毒株差异及水稻品种差异三方面.不同分离物在寄主发病率、发病时间、症状表现以及对灰飞虱传毒效率等方面都存在差异.
关键词：
水稻条纹病毒 致病性 灰飞虱
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈仕龙 陈少莺 程晓霞 林锋强 江斌 王劭 朱小丽 张世忠 李兆龙
【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的致病性。【方法】以NDRV分离株NP01、NP03、NPM为供试病毒,分析其对禽胚(番鸭胚、鸡胚)、部分禽类(雏番鸭、雏半番鸭、雏鸡、雏鹅)及细胞的致病性。【结果】NDRV分离株经尿囊腔接种能100%致死12日龄番鸭胚和9日龄鸡胚。2日龄雏番鸭、雏半番鸭经腿肌、口鼻、爪垫等途径人工感染NDRV分离株后,出现了与自然病例相同的病症,NDRV分离株对雏番鸭和雏半番鸭的致死率分别为20%~53%和13%~33%,同时能从病死鸭肝脾中回收到该病毒,耐过鸭大多成为僵鸭;15日龄雏鸡和2日龄雏鹅人工感染NDRV分离株后观察20 d,均未表现出NDRV致病的临床症状...
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